pUC19大肠克隆质粒

pUC19大肠克隆质粒

基本信息

启动子: Lac/lac promoter

复制子: ColE1 ori

质粒分类: 大肠杆菌载体；克隆质粒

质粒大小: 2686bp

质粒标签: LacZ

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

5'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT

3'测序引物: M13R:CAGGAAACAGCTATGACC

备注: 蓝白斑筛选

质粒简介

　     pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19  。这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。这些质粒缺乏控制拷贝数的 rop 基因，因此其拷贝数达 500-700 。 pUC 系列载体含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分编码序列，在特定的受体细胞中可表现 α-互补作用。因此在多克隆位点中插入了外源片段后，可通过 α-互补作用形成的蓝色和白色菌落筛选重组 质粒。pUC18、pUC19载体适合于DNA片段的克隆、进行DNA测序、对外源基因进行表达等。由于在lacZ领域中含有多克隆位点，因此在以lacZ缺欠细胞作为宿主 (如：JM109等) 进行转化后，在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上进行培养时，可以很容易地通过蓝白筛选，判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因，对插入载体中的DNA片段进行测序等。进行DNA测序时，可以方便地使用M13系列的通用引物。

质粒图谱

pUC19大肠克隆质粒使用说明：

     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；

     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；

     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；

     4、42℃热激90s，再冰浴2min；

     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；

     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；

     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；

     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。

pUC19大肠克隆质粒注意事项：

      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。

      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。