pUC118大肠克隆质粒
基本信息
复制子: ColE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;克隆质粒
质粒大小: 3162bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注: 蓝白斑筛选,产生单链DNA
质粒简介
pUC118载体是利用pUC18载体的Nde I 酶切位点,插入含有M13 phage DNA Intergenic region (IG) 的HgiA I (5645) - DraI (5941) 片段构建而成的。由于在lacZ基因中含有多克隆位点,因此在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上可以很容易地通过蓝白筛选判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因,使用M13系列的通用引物对插入载体中的DNA片段进行测序。使用Deletion Kit for Kilo-Sequence (Code No. : 6030) 可以对克隆得到的数千碱基的DNA片段进行测序。
由于pUC118载体中插入了M13 phage DNA的Intergenic region (IG),因此pUC118载体还可以在Helper phage M13K07的感染下产生单链DNA,包入Phage颗粒内后从菌体内放出,而不存在Helper phage单链DNA的污染。使用本制品时,可以稳定获得单链的长片段DNA (~7kb),并且没有缺失。
质粒图谱
pUC118大肠克隆质粒使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pUC118大肠克隆质粒注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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