pE-mMLV转录酶基因克隆质粒(非全长)
基本信息
复制子: pUC ori,f1 ori
原核抗性: 卡那霉素Kanamycin
克隆菌株: 大肠杆菌DH5α
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG
3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG
质粒简介
pE-mMLV非全长质粒,非表达质粒,具体的请参考测序报告,可以参考NCBI的序列是:AF033811.1
质粒图谱![pE-mMLV.png pE-mMLV.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201908/uepic/45562360-3be3-45b0-9147-8e651d3cdf9c.jpg)
pE-mMLV转录酶基因克隆质粒(非全长)使用说明:
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pE-mMLV转录酶基因克隆质粒(非全长)注意事项:
1、如果您收到的是甘油菌种,请先四区划线,挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多,请将质粒按比例稀释后再转化。
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