农杆菌LBA4404菌种

农杆菌LBA4404菌种

英文名称：Agrobacterium LBA4404 Strain

运输：低温

保存：-80度

有效期：3年

货期：现货

其他：

产品介绍：

农杆菌 LBA4404 菌株为 Ach5 型背景，核基因中含有筛选标签—利福平 抗性基因 rif。为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型 Ti 质粒 pAL4404，此质粒含有 vir 基因（vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组 必需的元件，pAL4404 质粒自身的 T-DNA 转移功能被破坏，但可以帮助转入 的双元载体 T-DNA 顺利转移）。pAL4404 型 Ti 质粒含有筛选标签：strep，赋 予 LBA4404 菌株链霉素抗性。此菌种多用于烟草转化，却很少用于拟南芥， 其自发突变获得四环素抗性得几率很低。

运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等

使用方法 

质粒转化农杆菌LBA4404菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方

法。

1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，

30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的

200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，

至 OD600 达到 1.3~1.5；

3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水

将菌体沉淀重悬；

4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，

其终体积约为 240 uL；

7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上

述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；

9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、

电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电

容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转

至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；

12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。