大肠杆菌DH5α菌种

大肠杆菌DH5α菌种

英文名称：

运输：低温

保存：-80度

有效期：3年

货期：现货

其他：

产品介绍：

本菌种是美国科学家 D. Hanahan 在 1983 年首次报道的 K-12 系大肠杆

菌菌株，它是以 DH1 为基础构建的，是分子生物学中最常用的用于克隆的大

肠杆菌菌株，其主要特点如下：

1. 转化效率比 DH1 更高，适用于分子克隆。

2. 脱氧核糖组成型合成，适合扩增制备高拷贝和大型质粒。

3. 携带?-半乳糖苷酶?片段，如果外源基因携带此酶的?片段，则可以进行蓝

白斑筛选重组子。

4. 内源核酸酶 EndA1 缺失，提取的质粒 DNA 残留 DNase 少，质量高。

5. 基于 RecA 的三套重组系统均缺失，质粒在复制过程发生重组、丢失和串

环的可能性降低，使得插入片段稳定。

6. EcoK 限制功能缺失（hsdR-），不能酶切在 EcoK 位点没有甲基化的 DNA，

但其修饰功能完整，故可以用 EcoK 位点非甲基化质粒通过本菌株制备其

对应的甲基化质粒，后者可用来转化限制 EcoK 功能正常（基因型为

hsdR+）的 K-12 系的大肠杆菌。

7. 本菌株对常见抗菌素没有抗性。

运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等

使用方法 

质粒转化大肠杆菌DH5α菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。

根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方

法。

1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，

30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的

200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，

至 OD600 达到 1.3~1.5；

3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水

将菌体沉淀重悬；

4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，

其终体积约为 240 uL；

7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上

述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；

9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、

电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电

容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转

至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；

12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。