大肠杆菌C41(DE3)菌种

大肠杆菌C41(DE3)菌种

英文名称：E. coli C41(DE3) Strain

运输：低温

保存：-80度

有效期：3年

货期：现货

其他：

C41(DE3)菌株能有效表达来源于各个物种包括细菌酵母，植物，病毒和

动物等多个物种的有毒蛋白，这是因为该菌的基因存在突变，可以包容有毒蛋

白的表达。C41(DE3)来源于 BL21(DE3)，含有一个基因突变，能够降低 T7

RNAP 的酶活力，所以能够阻止表达有毒蛋白细胞的死亡。正如标准的

BL21(DE3)菌株 C41(DE3)是??DE3 的溶源性菌株，它在 lacUV5 启动子额

下游含有 T7 RNA 聚合酶基因，适合表达克隆于 T7 启动子表达载体上的基因。

但是，C41(DE3)存在 Ion 和 ompT 蛋白酶的缺陷，而且蛋白表达量比

BL21(DE3)稍低。本菌株基本信息如下：

1. 抗性：无。

2. 培养基：LB。

3. 菌株类别：大肠杆菌。

4. 培养条件：37℃，有氧，LB。

5. 质粒转化：42℃热激。

6. 保存方式：20%甘油，-20℃。

7. 基本应用：用于蛋白表达。

8. 基因型：F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)

运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂 YPD 培养基、山梨醇、超纯水等

使用方法 

质粒转化大肠杆菌C41(DE3)菌种的方法有很多，如电转化、化学转化等。

根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个电转化方

法。

1. 挑取酵母单菌落，接种至含有 5 mL YPD 培养基的 50 mL 三角瓶中，

30℃，250-300 r/min 培养过夜；

2. 取 100-500 μL （≤1:100）的培养物接种至含有 50 mL 新鲜培养基的

200 mL 三角摇瓶中，28~30℃，250-300 r/min 培养过夜(约 20 小时)，

至 OD600 达到 1.3~1.5；

3. 将细胞培养物于 4℃，1500g 离心 5 分钟，用 50 mL 的冰预冷的无菌水

将菌体沉淀重悬；

4. 按步骤 3 离心，用 25 mL 的冰预冷的无菌水将菌体沉淀重悬；

5. 按步骤 3 离心，用 2-5 mL，1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬；

6. 按步骤 3 离心，用 160 μL 的冰预冷的 1M 的山梨醇溶液将菌体沉淀重悬，

其终体积约为 240 uL；

7. 将 5~20 μg 的线性化 DNA 溶解在 5~10 μL TE 溶液中，与 80 μL 的上

述步骤 6 所得的菌体混匀，转至 0.2 cm 冰预冷的电转化杯中；

8. 将电转化杯冰浴 5 分钟；

9. 根据电转化仪提供的资料，参考其他文献及多次摸索，确定合适的电压、

电流、电容等参数，按优化的参数，进行电击（推荐：电压 1.5 kV ；电

容 25 μF ；电阻 200 Ω；电击时间为 4 ～10 msec）。

10. 电击完毕后，马上加入 1 mL 1M 的冰预冷的山梨醇溶液将菌体混匀，转

至 1.5 mL 的 EP 管中，置于 30℃摇床低速培养 1 小时；

11. 将菌体悬液涂布于 MD 平板上，每 200~600 μL 涂布一块平板；

12. 将平板置于 30℃倒置培养，直至单个菌落出现（3-4 天）。