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植物叶绿体纯化试剂盒

供货周期: 现货
品牌: 钦诚生物
规格: 15次
货号: QC120308-15
CAS号:
报价: ¥890
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产品介绍

植物叶绿体纯化试剂盒

英文名称:Plant Chloroplast Isolation Kit

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:1-2天

其他:


产品介绍:

制备植物叶绿体

产品及特点

 叶绿体是重要的,负责植物光合作用的细胞器,很多重要的特性(如雄性不育)

也跟叶绿体相关,所以叶绿体是研究植物生理和母系遗传的重要材料。对植物叶绿

体进行生化,遗传和分子生物学研究都需要进行叶绿体纯化。本产品就是基于密度

梯度离心的,专门用于从植物叶片中纯化完整叶绿体的试剂盒。它具有下列特点:

1. 即用型试剂盒,用户不需要单独配制各种溶液。

2. 提供 AB 两种选择,A 型用于叶绿体粗提,所得叶绿体含少量其他细胞器污染,

可用于后续的 SDS-PAGE,Western,ELSIA 和蛋白组分析。B 型用于叶绿

体精提,所得叶绿体完整,可用于后续的光合作用,电子链和磷酸化,跨膜转

运,体外叶绿体蛋白合成,蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜,基质,类

囊体,叶绿体 DNA 和叶绿体 RNA 纯化。

3. 本产品足够 15 次提取,每次可处理 30g 叶片,能得到 5 mg 左右叶绿体。

4. 已经成功用于菠菜,大豆,莴笋,白菜,烟草和甜菜等植物,还可用于更多植

物(可能需要优化条件)。


运输及保存 常温运输和保存,试剂盒期限一年。

自备试剂 去离子水。

使用方法 注意:叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用器

皿和溶液均需要在 4℃预冷。离心时一定要在 4℃进行,离心力以 g 而不是 rpm

计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取过程还需要在昏暗的光线条件下进行。

1. 实验前 1-2 天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离心

时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用蒸馏

水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要保持叶

片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。

2. 新鲜(实验当天)制备溶液 A:将自备的去离子水与溶液 A 成分一按 4:1 的

比例混合,然后在混合液中加入溶液 A 成分二干粉到终浓度 0.1%(每 100 mL

中加入 0.1 g 干粉),摇晃溶解后所得溶液即为溶液 A,冰上预冷待用。一次

实验(从 30 g 叶片提取叶绿体)所需要的溶液 A 体积跟材料不同而不同。溶

液 A 不能长期保存,需要现用现配。

3. 新鲜采集植物叶片,快速去除叶脉并将叶片剪成 1-3 cm2大小的碎片并浸泡在

适量的预冷的溶液 A 中(每克叶片加 4 mL 溶液 A,但对烟草和大豆,每克叶

片需要加 6 mL 溶液 A)。

4. 将浸泡了叶片的溶液 A 转移到 Waring 匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中,

低速匀浆 10 秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后,再

低速匀浆 10 秒。注意:除 Waring 匀浆机外,还可以选择 Dounce 玻璃匀浆

器,Polytron 匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法,但这些方法的

单次处理量都比较小,需要将样品分成很多小份单独匀浆,然后再汇集。

5. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,可先将滤液收集到预冷的 200 mL 量筒中,再

等分到 4 个预冷的 50 mL 的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过 35

mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。

6. 在水平转子离心机上 4℃ 200 g 离心 3 分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或

400 g 离心 1 分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。

7. 将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的 50 mL 塑料离心管中。

8. 在水平转子离心机上 4℃ 1000 g 离心 7 分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体,

呈浅绿色。

9. 在沉淀中加入 1.5 mL 预冷的溶液 A,手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意:

重悬时最好避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀下

有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。

10. 将 4 管叶绿体重悬液汇集(共约 6 mL)。此溶液为叶绿体粗提产物,可直接

用于后续的 SDS-PAGE,Western,ELSIA 和蛋白组分析。如果需要以之为

材料精提叶绿体,就需要将破裂的叶绿体和完整的叶绿体分开,根据植物的不

同,可选用下述两种密度梯度离心法之一进行分离。

11. 单浓度分离法(适合菠菜,白菜和莴笋等材料):

a) 在 50 mL 塑料离心管中先加入 6 mL 溶液 A 成分一和 4 mL 溶液 B,充

分混合均匀。

b) 在其液面上小心铺上第 11 步汇集得到的约 6 mL 叶绿体重悬液。

c) 在水平转子离心机上 4℃ 1000 g 离心 8 分钟,最上层的绿色带含破碎的

叶绿体,线粒体和核糖体等,管底的绿色沉淀为完整的叶绿体。

d) 小心将上清倒出后,在叶绿体沉淀中加入预冷的 0.5 mL 溶液 A 成分一,

手指轻弹管底使之重悬。

e) 将叶绿体重悬液转移到 1.5mL 离心管中并避光保存。可在相差显微镜下

检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用,否则非常容易失去活性。

12. 双浓度分离法(适合烟草,甜菜和大豆等材料):

a) 在 14 mL 塑料离心管中先加入 0.5 mL 溶液 A 和 2 mL 溶液 B,充分混

合均匀,得密度梯度重液。

b) 在另一试管中将 3 mL 溶液 A 和 2 mL 溶液 B 充分混合均匀,得密度梯

度轻液。

c) 将密度梯度轻液小心铺在密度梯度重液之上,然后将第 10 步汇集得到的

叶绿体重悬液中的 4 mL(还剩下 2 mL)小心铺在密度梯度轻液之上。

d) 在水平转子离心机上 4℃ 3200 g 离心 15 分钟,最上层绿色带含破碎的

叶绿体、线粒体和核糖体等,重液和轻液间的绿色带为完整叶绿体。

e) 用广口吸管小心将重液和轻液之间的绿色带(叶绿体)转移到新的离心管

中,加入三倍体积的预冷的溶液 A 成分一,轻柔混匀。

f) 在水平转子离心机上 4℃ 1700 g 离心 1 分钟,小心将上清倒出后,在绿

色的叶绿体沉淀中加入预冷的 0.5 mL 溶液 A 成分一,手指轻弹管底使之

叶绿体重悬。

g) 将叶绿体重悬液转移到 1.5 mL 离心管中并避光保存,也可在相差显微镜

下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用,否则非常容易失去活性。所

得精提叶绿体可用于后续的光合作用,电子链和磷酸化,跨膜转运,体外

叶绿体蛋白合成,蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜,基质,类囊体,

叶绿体 DNA 和叶绿体 RNA 纯化。




植物叶绿体纯化试剂盒信息由上海钦诚生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于植物叶绿体纯化试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应植物叶绿体纯化试剂盒外,上海钦诚生物科技有限公司还可为您提供KHYG-1 人NK细胞淋巴瘤细胞 QCH833、RKOE6 人结肠癌细胞系 QCH846、NCI-H660 人神经内分泌前列腺小细胞癌细胞QCH851等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。
工商信息

企业名称

上海钦诚生物科技有限公司

企业信息已认证

企业类型

信用代码

91310113MA1GN73Y5T

成立日期

2018-12-29

注册资本

50

经营范围

从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术转让;仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】

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