改良Lowry法蛋白定量试剂盒
英文名称:Modified Lowry Protein Assay Kit
运输:常温
保存:常温
有效期:1年
货期:1-2天
其他:
产品介绍:
改良Lowry法蛋白定量试剂盒,更抗干扰
产品及特点
Folin 酚试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚氨基酸(色氨酸
和酪氨酸)发生颜色反应,可用于测定蛋白质浓度,但灵敏度较低。Lowry
在此基础上加入 Biuret(双缩脲)反应步骤,即先在碱性条件下使蛋白质和
Cu+形成复合物,再使其与 Folin 酚试剂发生显色反应,产物在 750nm 检测。
Lowry 法使不含酚的蛋白质也能被检测出来,灵敏度是单独使用 Folin 酚的
10 倍左右,是双缩脲反应的 200 倍,因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。
Lowry 检测原理图如下:
传统 Lowry 法受到很多常用的试剂(如 DTT、糖、甘油、Triton 等)干
扰,步骤繁琐。本公司对 Lowry 法进行改良,具有下列特点:
1. 即开即用,不需要单独购买每个成分再配制。
2. 能抵抗部分干扰物(如一定浓度 SDS 或其他去污剂)的干扰。
3. 检测线性范围广,在 2-100 μg,检测上限比经典 Lowry 法高 30%-40%。
使用手册 1 份
运输及保存 常温运输和保存(但 BSA 标准品需要-20℃保存),有效期一年。
自备试剂 去离子水、蛋白样品、样品缓冲液
使用方法 一:准备工作
1、 制备溶液 A:将 16 mL 溶液 A 成分二和 16 mL 溶液 A 成分三加入到装
溶液 A 成分一的塑料瓶中,混合均匀得到 240 mL 溶液 A。注意:溶液 A
各成分分开提供更加稳定。
2、 制备 Lowry 工作液:将溶液 A、溶液 B 和溶液 C 按 3:1:1 的体积比混
合得到 Lowry 工作液。此工作液可以室温放置 2-3 周,所以最好用多少
配多少。如果发现溶液 B 或溶液 C 有沉淀,需 37℃溶解并摇匀后再使用。
3、 制备福林酚工作液:在装有 10 mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入 90 mL 去
离子水,摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置 6 个月。
二:试管法
4、 先用去离子水将 BSA 标准(2 mg/mL)稀释到 50 ug/mL,然后在标记
的试管中加入下列成分(单位:uL)。注意:每个样品最好做三个稀释度,
每个稀释度最好设置三次重复,阴性对照和标准品也最好做三次重复。
标准品(每个做三次重复,此处只列出一个)
编号 BSA 标准
(50 ug/mL) 水 总体积
阴性对照 0 0 200
1 0 200 200
2 25 175 200
3 50 150 200
4 100 100 200
5 150 50 200
6 200 0 200
样品(以 1 个样品、3 个稀释度为例,每个稀释度三个重复,
此处只列出一个)
编号 样品 总体积
1 200 (稀释度 1) 200
阴性对照 1
200(用稀释度 1 稀释的溶解蛋
白样品的缓冲液) 200
2 200 (稀释度 2) 200
阴性对照 2
200(用稀释度 2 稀释的溶解蛋
白样品的缓冲液) 200
3 200 (稀释度 3) 200
阴性对照 3 200(用稀释度 3 稀释的溶解蛋
白样品的缓冲液) 200
5、 每管中加入 200 uL Lowry 工作液,振荡混匀后室温反应 10 分钟。
6、 每管中加入 100 uL 福林酚工作液,振荡混匀后室温反应 30 分钟。
7、 用容量为 0.5 mL、光径为 1 cm 的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定 750
nm 的光吸收。测定时,先空白(即阴性对照)后样品,测定样品和 BSA
标准品时,先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净,必
要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
8、 根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线,然后根据未知样品的光吸收
从标准曲线中查得其对应的浓度。
三:96 微孔板法
9、 同上,只是反应用 96 微孔板设置,用酶标测试仪 750 nm 测定光吸收。
四、样品中干扰物质的去除(本产品不含相关产品,
如果样品中有干扰 Lowry 法蛋白定量的物质(见附表),可另购本公司的
微量蛋白质沉淀试剂盒(CAT#:81217-50)去除,也可以用自备试剂按下法
去除:用水将样品调到体积为 200 uL, 加入 20 uL 0.15%去氧胆酸钠,混匀,
室温放置 10 分钟。加入 20 uL 72%的 TCA,室温放置 5 分钟。3000 g 离心
15 分钟,小心去除上清。用 200 ul 水溶解蛋白沉淀后以用于 Lowry 法测定。
改良Lowry法蛋白定量试剂盒信息由上海钦诚生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于改良Lowry法蛋白定量试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应改良Lowry法蛋白定量试剂盒外,上海钦诚生物科技有限公司还可为您提供HCC4006 人肺腺癌细胞QCH789、NCI-H810 人非小细胞肺癌细胞 QCH771、TMK-1 人胃癌细胞 QCH790等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。