单细胞裂解液(RNA实验用)
英文名称:Single Cell Lysis Solution(RNA) Embryonic Cell Lysis Solution
运输:低温
保存:负20℃
有效期:1年
货期:1-2天
其他:
产品介绍:
裂解单细胞,用于后续RNA操作
产品及特点
单细胞裂解液(RNA 专用)是单细胞 RNA 提取专用裂解液,产品经过多次
优化,含有多种去污剂、变性剂和盐,可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的
破坏,维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于测序和 RT-PCR 等试验。
本产品足够使用 200 次以上。
胚胎裂解液用于将卵裂球(blastomere,含 2-8 个细胞)分离成单个胚胎的
溶液,得到的单个细胞如果用于 DNA 分析(如全基因组扩增或 PCR),则可直接
用于单细胞裂解液(DNA 型)裂解;如果用于 RNA 分析(如 RT-PCR),则可直
接用于单细胞裂解液(RNA 型)裂解。本产品不能用于胚囊(blastocyst,含 70-100
个细胞)。
自备试剂 PBS 溶液
使用方法 如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备,此处所列步
骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球(2-8 细胞胚胎)等材料,对其
他材料(如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等),用户需自行选用合适的方法制备单
细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如 FACS 分离细胞、卵细胞等),则可
以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤:
一、用培养细胞或实体组织制备单细胞:
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织,将细胞重悬于自备的液体细胞培养基
中。
2. 按常规方法对细胞进行计数。
3. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中,400 g 离心 4 分钟沉淀细胞,小心弃
上清(培养基)。
4. 将细胞沉淀重悬于 50 uL 自备的 PBS 溶液中,使其终浓度为 2-80 个细胞
/uL。
5. 在干净的培养皿上点加数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴,加入 5 uL 细胞悬浮
液到第一个小液滴中,然后再从第一个小液滴中转移 5 uL 到第二个小液滴,
如此系列稀释样品数次,使得其浓度接近每 2.5 uL 液体中含 1 个细胞,放冰
上待用。
二、用卵裂球(blastomere,2-8 细胞胚胎)制备单个细胞:
6. 在培养皿中点数个含 5 uL 胚胎裂解液的小液滴。
7. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
8. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
9. 在最后一个液滴中,卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
10. 取单个细胞,转移到数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
11. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个 200
uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照(2.5 uL 样品中不含细胞)。
三、用单细胞裂解液裂解细胞
12. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品,确认含一个细胞后,将其转移到一
个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。最好同时设置无样品的阴性对照(2.5
uL 样品中不含细胞)。
13. 在 2.5 uL 样品中,显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
14. 裂解后可以放冰上待用,如果长期不用,可以放-80℃保存。
四、单细胞裂解物的 RT-PCR 扩增
15. 细胞裂解物从-80℃中取出后,放冰上融化待用。
16. 以上步操作得到的细胞裂解物为模板,按常规方法进行 RT-PCR 反应。
企业名称
上海钦诚生物科技有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
91310113MA1GN73Y5T
成立日期
2018-12-29
注册资本
50
经营范围
从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术转让;仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】
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