大鼠脑微血管内皮细胞

细胞简介：

脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑。大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。1）脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；2）脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；3）脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生 “两极分化”的表现型。 与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。

本公司生产的大鼠脑微血管内皮细胞采用酶解和密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵/T25方瓶，vWF、Factor VIII呈阳性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基信息：

我们推荐使用钦诚生物研制的大鼠脑微血管内皮细胞专用完全培养液作为体外培养大鼠脑微血管内皮细胞的培养基。

二、使用方法

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出T-25cm²培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中静置4-6小时或过夜，以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，放入37℃，5%CO₂细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm²培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.125%胰蛋白酶消化液约2ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落，再加入完全培养液终止消化，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm/min，离心5min；

3）用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至15ml无菌离心管中，滴加入完全培养液5ml混匀细胞，然后将细胞悬液转移至适当面积大小的培养皿中；

3）放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

三、注意事项

1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月；

2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；

3、该细胞只可用于科研；