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荧光探针和荧光染料冻干防护

2020-07-12 22:04

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冻干对荧光探针和荧光染料有防护作用,冻干可防止探针和染料降解,提高反应的灵敏度和特异性。接着介绍一下荧光探针和荧光染料的特性。荧光探针是PCR扩增时在加入一对引物的同时加入荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。荧光染料是在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。低温预冻,低温真空干燥,过程隔离氧气水分,冻干法可彻底防止荧光物质降解。试剂冻干机Pilot3-6T IVD方面应用示例(荧光PCR): 1.探针、底物、引物原料要求确定。 2.冻干溶液配方开发,采用正交法或响应曲面法进行辅料筛选。 3.选择适合的包材和模具。 4.设计冻干曲线配合辅料筛选。 5.确定配方及工艺。 6.稳定性测试。 7.根据稳定性测试结果修正工艺或配方。 8.整个环节注意环境、设备、人员的结合。
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Pilot2-4M冻干机第一次运行或停放时间较长,需要运行或重新运行时,为确认设冻干机的性能状况,应首先做一次空载运行,这时冻干机的抽空速率和真空度可能要差一些,这属于正常现象,但要密切注意以下情况: 1) 制冷机组的声音、发热。 2) 冷冻机组的油位、色泽。 3) 压缩机机头、机尾的结霜。 4) 压缩机的温度。 5) 循环泵的声音和压力。 6) 放气阀漏气。 7) 真空泵开启30min后的声音及排烟口的排烟量。 Pilot2-4M冻干机的冻干过程 先是将冻干箱进行空箱降温到-40℃,然后把产品放到冻干箱内的板层上进行预冻(降温阶段)。待制品冻实后,就可以进行升华操作啦!制品的升华需要在高真空下进行,一般要求干燥箱内真空达到0.1mmHg以上。为了保证冰的升华能够持续进行,我们还需要将搁板加热,给予升华所需的热量。在冷冻干燥过程中,冻干可以分为升华阶段和制品的再干燥阶段。升华阶段要进行第一步加热,使冰大量升华。这个时候,制品温度不宜超过共熔点,通常保持在±10℃之间对冻干效果好!

为用户提供冻干工艺优化、保护剂配方研发、冻干一致性评价、冻干代工生产,制药、医疗、美容、大健康、材料行业冻干流水线开发、冻干工艺开发等定制化整体解决方案。 服务范围:冻干曲线摸索优化、冻干保护剂开发、冻干赋型剂开发、冻干生产放大、冻干一致性评价、GMP等级产品代工生产。化妆品冻干配方开发。制药、医疗、美容、大健康、材料行业冻干流水线开发、冻干工艺开发。擅长在蛋白及酶类抗体药物开发;分子、免疫、生化类等试剂、临床试剂冻干项目开发。冻干项目技术开发流程: 1.填写冻干开发需求书(可根据需要签订保密协议); 2.提供样品交给实验人员,实验人员将进行分析研究,确立技术方案; 3.我们根据开发工艺报价,双方签订《冻干技术开发合同》; 4.实验人员开始技术开发并及时向用户汇报开发进展; 5.实验人员将开发结果向用户汇报; 6.将开发成果寄给用户,并附有实验报告,用户进行验收。

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