Taq DNA 连接酶是一种热稳定性连接酶,能够催化磷酸二酯键的形成,使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5′-磷酸末端和 3′-羟基末端通过磷酸二酯键相连。Taq DNA 连接酶催化的连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对,并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此,可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内,Taq DNA 连接酶均有活性。
组分
组分名称数量Taq DNA Ligase (40 U/μl)25 μl/250 μl10×HiFI Taq Ligase Buffer250 μl/2.5 ml
20 mM Tris-HCl(pH 7.6),25 mM KAc,10 mM Mg(Ac)2,10 mM DTT,1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100,45℃ 温育。 该酶需 NAD+ 作辅因子,在 10× Taq DNA 连接酶缓冲液中已添加 NAD+;为了延长 NAD+ 的半衰期,缓冲液应于 -70℃ 贮存。
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