MALDI蛋白样品处理试剂盒
产品及特点本产品用于基质辅助激光解吸离子化(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization,MALDI)分析,所含的基质液是 MALDI 分析的必 不可少的关键成分,其主要作用一是起到分子溶剂的作用,使样品分子分开, 但又不会使蛋白质发生共价修饰;而是能从激光脉冲中吸收能量,使蛋白质 发生瞬间相变,用于质谱分析。本产品的特点是:
1. 即开即用,用户不需要单独准备各种成分。
2. 经过优化,可用于各种样品的 MALDI 分析。
3. 可以选择 CCA(羟基苯丙烯酸)、DHB(2,5-二羟基苯甲酸)和 SA(芥 子酸)三种不同的基质。CCA 适用于分子量在 5Kd 一下的蛋白质和多 肽分析(肽指纹图谱);DHB 适合于一般蛋白质、多肽、低聚糖、脂和 合成多聚物的分析;SA 适合分子量在 3Kd-150Kd 的蛋白质分析。
规格及成分 成份500 次包装
(CAT#:LM111004-500)
MS 专用溶解液 50 mL
基质液成份一 50 mg(干粉)
基质液成份二 10 mL
使用手册 1 份
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 MilliQ 水(可选
![QQ图片20191121152700.png QQ图片20191121152700.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/6fb646fa-010f-459f-8b5f-b352f7bf1a9f.jpg)
使用方法
一:样品准备
1、 将蛋白样品真空冻干后加入 MS 专用溶解液 100 uL,溶解半小时(期间 可以按下步配制基质液)。蛋白质的终浓度好在 1-10 pmol/uL 之间。 如果是 Reverse-Phase-HPLC 制备的样品,则可以不加 MS 专用溶解液 而直接使用。注意:一定要在蛋白质样品真空冻干前将其中的缓冲液、 盐、去污剂和变性剂等去除,否则它们会严重影响蛋白质晶体的形成, 没有蛋白晶体的形成就不能进行 MALDI 分析。
2、 称量 1 mg 左右的基质干粉到一干净的 EP 管中,按每 mg CCA 加 100 uL 基质液成份二的比例加入基质液成份二,混匀后离心。注意:此是用 于结晶用的饱和溶液,可能有沉淀,故需要离心。注意:基质液好新 鲜配制。本试剂盒提供 50mg,足够配 50 次 200 uL 的基质液。
3、 选用下面两种上样法之一上样。也可以自选其他的上样方法。
二:Dried-Droplet 法上样
1、 将 1 uL 蛋白质样品与 1 uL 新配的饱和基质液混匀。注意:可以多做几 个不同的蛋白质样品和基质液的比例,在 1:1-10:1 均可。
2、 用移液器将 1 uL 混合液点到 MS 仪器的样品靶上,让液体在室温下挥发 干净。注意:不要有气泡,枪头也不要触及靶面,也不能搅动上样后的 混合液,在未结晶之前不要摇晃。样品靶必须充分清洗干净,以免上次 试验的残留样品的干扰。
3、 如果样品中含有非挥发性杂质,在此步可以用自备的 MilliQ 水洗涤晶体 一次。
4、 将样品靶插入质谱仪内,后续操作按 MALDI-TOF 仪器使用手册进行。
5、 同样方法处理自备对照样品(一般仪器厂家提供)。
三:Thin-Layer 法上样
1、 用移液器将 1 uL 基质液点到 MS 仪器的样品靶上,在基质液挥发前迅速 进入下一步操作。
2、 迅速用移液器将 1 uL 样品点到 MS 仪器的样品靶上,让液体在室温下挥 发干净,一般需要 5 分钟。
3、 将样品靶插入质谱仪内,后续操作按仪器使用手册进行。
4、 同样方法处理自备对照样品(一般仪器厂家提供)。
5、 同样方法处理标准品(仪器厂商提供)。
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