大肠杆菌Tuner(DE3)化学感受态细胞
产品及特点本产品是大肠杆菌 Tuner(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。Tuner 系列菌株是 BL21 的 lacZY 缺失突变株,能够同时调整同一培养体系中所有细胞的蛋 白表达水平。lac 通透酶(lacY)突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞,从而获得浓 度依赖的、水平均一的诱导。通过改变 IPTG 浓度,表达可从极低水平调节到极强的、 完全诱导的表达水平(通常与所使用的 pET 载体相关)。低水平表达可以增强难表达蛋 白的溶解性和活性。(DE3)宿主菌是 lDE3 溶原菌,染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。本感受态细胞一般配合 pET 载体一起表达。
Tuner(DE3)菌株基因型:
规格及成分成分 编号 10 支包装
本产品 LM130562-10 0.1mL×10
使用手册 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl,可以根 据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适 量的 DNA,通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用 移液器轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 90 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体 被吸收,倒置培养,37℃培养 12-16 小时。
注意:
1 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平 板;若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数 较少,可通过离心(4,000 rpm ,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布 于平板中。
2 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。
F – ompT hsdSB (rB – mB –) gal dcm lacY1(DE3)
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企业名称
上海联迈生物工程有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
310117003747946
成立日期
2017-09-26
注册资本
100
经营范围
从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、一类医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】
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公司地址
上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
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