大肠杆菌SURE化学感受态细胞
产品及特点本产品是采用大肠杆菌 SURE 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可直接用 于 DNA 的化学转化。
本试剂盒具有下列特点:
1. 使用 pUC19 质粒检测,转化效率可达 108,-80℃保存几个月转化效率不改变。
2. 主要用于克隆不稳定的 DNA 片段,如重复序列、Z-DNA 等。
3. 本产品质量稳定,使用方便,质优价廉。
4. 大肠杆菌SURE菌株基因型是K-12,e14-(mcrA-), Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171, endA1, gyrA96, thi-1, supE44, relA1, lac, recB, recJ, sbcC, umuC::Tn5
(Kanr), uvrC。其基因型符号及其含义列表如下:
基因型符号 含义
K-12 本菌种属于K-12系,本系所有菌种都携 带F因子和?、e14、rac三种原噬菌体。
[F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)] 本菌种的 F 因子还携带 proAB lacIqZΔM15 Tn10。其中野生型的 proAB 可合成脯氨酸;lacI q使 lacI 抑 制蛋白过表达,对 lac 启动子的抑制加 强,降低背景表达;又叫 lacZ△M15, 编码?-半乳糖苷酶基因?片段,与携带? 片段的质粒互补可恢复酶活性,用于蓝 白斑筛选; Tn10 转座子带四环素抗性
e14- (mcrA - ) 本菌种的 e14 原噬菌体缺失,故其携带 的mcrA基因也缺失,丧失对甲基化CG 的切割
endA1 缺失核酸内切酶 I
gyrA96 DNA促旋酶突变,导致对萘啶酮酸和荧 光喹啉的抗性 lac 染色体缺失lac操纵子 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 缺失对甲基化C的限制、缺失EcoK修饰 限制系统,缺失对甲基化A的限制 recB recBCD重组系统的重组辅助酶ExoV 失活,重组和损伤修功能复 recJ 重组缺失,降低质粒间的重组 relA1 戒严反应缺失,RNA合成可以在蛋白合 成停止后继续进行 sbcC RecF重组途径突变,有利于扩增携带回 文结构的噬菌体和质粒 supE44 使琥珀终止子编码谷氨酰胺,为某些质 粒和噬菌体生长所需 thi-1 不能合成硫氨(维生素B1) umuC::Tn5 SOS修复突变,增加回文结构稳定性。 携带的Tn5转座子带卡拉霉素抗性 uvrC UV修复缺失,增加回文结构稳定性
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
大肠杆菌 SURE 化学感受态细胞 LM90208 0.1 mL×10
使用手册 LM90208sc 1 份
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等
![QQ图片20191121152700.png QQ图片20191121152700.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/6fb646fa-010f-459f-8b5f-b352f7bf1a9f.jpg)
使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl,可以根 据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的 DNA(根据实际情况加入适 量的 DNA,通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和),用 移液器轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 90 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃摇床,150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于 37℃直至液体 被吸收,倒置培养,37℃培养 12-16 小时。
注意:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布 平板;若转化的 DNA 总量较少,可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的 克隆数较少,可通过离心(4,000 rpm ,2 分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体 后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培 养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液 再涂布新培养基进行培养。
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