液相内毒素清除剂

液相内毒素清除剂

产品及特点 

去除液体生物样品（包括质粒 DNA 样品）中污染的内毒素(endotoxin)具有重要的临床意义，因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖，即 lipopolysaccharides)是包括 E.coli在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分，并且带电性跟 DNA 类似，所以从 E.coli 细胞中提取的质粒 DNA 和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污染，并且很难用用常规方法（包括硅胶膜吸附，离子交换吸附、凝胶排阻过滤、氯化铯超速离心）去除。本产品就是专门用于高效去除生物样品中的内毒素污染。

1. 简单快速，一次处理只需要 20 分钟左右，不需要复杂仪器设备。

2. 高效，一次处理可以去除 90%以上的内毒素，经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到 0.2 EU (endotoxin unit，约 0.1 ng LPS)/mL 以下。

3. 适用范围广，可用于 DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。

4. 不影响 DNA 和绝大部分蛋白质的活性，处理过的质粒 DNA 可用于转染实验。

5. 既可小规模使用(在 1.5 mL 离心管内)，也可放量使用。
规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装 
液相内毒素清除剂 60607 25 mL 使用手册 60607sc 1 份

运输及保存 常温运输和保存，有效期两年。

自备试剂 无内毒素的水或 TE 缓冲、3M 醋酸钠、乙醇 

使用方法

 如果使用前本产品有分层，请冰浴后振荡混匀。

一：用于体积小于 500 uL 的 DNA/RNA 样品

1. 在一干净的离心管中加入 500 uL 的样品。如果不足 500 uL,可以用水或 TE补足。

2. 加入 50 uL 的 3 M 醋酸钠（pH 5.2），混匀后冰浴 5 分钟。

3. 加入 50 uL 预冷的本产品，充分混匀后冰浴 10 分钟。

4. 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止（一般需要 1-5 分钟）。

5. 室温 12000-15000×g 离心 2 分钟(不能低温离心)，离心后上层为无色透明，下层为淡蓝色。

6. 将上清转移到新的离心管中。

7. 如果需要，可以重复步骤 3～6。

8. 加 1 倍体积的异丙醇或两倍体积的乙醇，混匀, 12000-15000×g 离心 30分钟。

9. 弃上清后用 70%酒精洗 2 次。

10. 空气干燥沉淀后加入 100 uL 无内毒素的水或 TE 缓冲液溶解沉淀。

11. 测定 DNA 和内毒素的含量，与未纯化的样品比较。

二：用于体积大于 500 uL 的 DNA/RNA 样品

整个操作同上，只是在 15 或 50 mL 塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力。

三：整合到碱变性法质粒 DNA 制备过程中

整个操作同上，只是：

1. 样品必须是加溶液 III 离心后得到的上清液或后得到的质粒溶液。

2. 如果处理的是加溶液 III 离心后得到的上清液，可以略去第 2 步操作。

3. 处理后的溶液需要用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度，然后上柱，以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。

4. 洗脱 DNA 所用水或溶液必须无内毒素污染。

四：对蛋白质和其它生物样品

整个操作同上，只是：

1．略去第 2 步操作，加 3 M 醋酸钠（pH 5.2）的目的是为沉淀核酸。

2．第 4 步改为 37℃保温以免蛋白质变性，溶液呈混浊状或分相一般需要 20-30分钟。

3．略去第 8 步和以后操作。