痰液DNAout
产品及特点
痰液是重要的临床样品,可以用于诊断肺癌,肺结核等各种疾病。但是从痰液中纯化 DNA 十分棘手,为此本公司开发了本产品,专用于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中纯化 DNA,用于后续的分子生物学分析。本产品具有下列特点:
1. 每次可以处理 10-20 mL 痰液,得到 2-5 ug DNA。
2. 纯度高,可直接用于后续得 PCR 检测。
3. 一管式操作,减少污染,节约成本。
4. 含痰液保存液(溶液 A),便于取样和运输。
5. 无毒环保,不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。
规格及成分 成 份 50 次大纸盒包装
溶液 A(痰液细胞固定液) 500 mL 溶液 B(痰液解稠剂) 500 mL 溶液 C 30 mL 使用手册 1 份
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 异丙醇,70%乙醇。
![QQ图片20191121152700.png QQ图片20191121152700.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/6fb646fa-010f-459f-8b5f-b352f7bf1a9f.jpg)
使用方法
一:痰标本的获取与保存(注意:痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌,需按传染源相关规定流程进行操作)
1. 每例患者在常规痰标本采样时,好连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是先在每个 50 mL 的痰液收集管内新鲜加入 10 mL 溶液 A 和 10 mL 溶液 B,待患者晨起漱口后,咳深部痰 7~8 口(约 10-20mL),收集到装有溶液 A 和溶液 B 混合液的痰液管收集内,混匀后储于 4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取足三管后一起送实验室,4℃冰箱保存直到使用(一般不超过 7 天)。
2. 使用时,在室温反复振摇装有样品(总体积约 30-40 mL)的痰液收集管 5~10 分钟,充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。
3. 4℃2500g 离心 5 分钟,弃上清。
4. 沉淀再用自备的 PBS 液洗两遍。
5. 所得沉淀可以直接用于涂片,用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在 0.2mLPBS 缓冲液中重悬后转入 1.5 mL 螺旋盖塑料离心管,-20℃冰箱长期保存,或立即用于下步的 DNA 提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环境,建议不要使用压盖式塑料离心管。同时好设置一个阳性和一个阴性对照。
二:DNA 提取
6. 在上步所得的 0.2 mL 样品中加入 0.6 mL 溶液 C。溶液 C 容易形成沉淀,用前需37℃加热融化并摇晃均匀。
7. 室温放置 10 分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记,以在下步区别向心面和离心面。
8. 振荡数秒后加入 0.7 mL 自备的异丙醇,旋紧盖后振荡 30 秒混匀。
9. 把离心管的向心面对向转头,13,000-15,000 g 室温离心至少 15 分钟。
10. 小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的 DNA 沉淀(此时可能看不见)。
11. 加入 1.0 mL 70%乙醇, 振荡数秒后 15,000 g 室温离心 5 分钟。注意:在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
12. 小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的 DNA 沉淀(此时呈膜状沉淀)。
13. 将离心管放回离心机再短暂离心数秒, 然后用移液器移弃约 50 uL 残留液体(70%乙醇),否则它会影响后续反应。
14. 加入 200 μl RNase-free 水,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状DNA 沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶,短暂离心后存上清(含 DNA)。
15. 直接取适量用于 PCR,样品使用量不超过 PCR 体系的 1/2。剩余 DNA 样品可以室温放置 2 小时,也可保存于-80℃保存一个月。
痰液DNAout信息由上海联迈生物工程有限公司为您提供,如您想了解更多关于痰液DNAout报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应痰液DNAout外,上海联迈生物工程有限公司还可为您提供CD14试剂盒;小鼠CD14分子(CD14)ELISA试剂盒、CD14试剂盒;人CD14分子(CD14)ELISA试剂盒、CD109试剂盒;人CD109分子(CD109)ELISA试剂盒等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。