mRNA 纯化试剂盒
产品及特点
构建 cDNA 文库、、蛋白质体外翻译和 RT-PCR 检测稀有的 mRNA 等研究常 常需要从总 RNA 中分离 mRNA。 mRNA 只占总 RNA 的 1%左右,但由于带 poly(A)尾巴,所以可以通过与 Oligo(dT)纤维素的亲和结合而与其他 RNA(如 rRNA、tRNA 等)分离开。本产品就是基于此原理开发的、专门用于从总 RNA 中 提取 mRNA 的试剂盒。它具有下列特点:
1. 一站式,,即开即用,非常方便。
2. 一次可以处理约 10-15 ug 总 RNA,从中可得 0.1-0.5 ug 左右的 mRNA。
3. Oligo(dT)纤维素吸附能力强,每克可以吸附 50-80 OD 的 mRNA,相当 于 2000-3000 ug mRNA。
4. 离心法、只需要离心就可以完成,免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。
5. 得到的 mRNA 可以直接用于构建 cDNA 文库、蛋白质的体外翻译和 RT-PCR。
6. 本试剂盒足够 25 次微量 mRNA 提取实验。
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
结合液 LM80817a 100 mL Oligo(dT)纤维素 LM80817b 25 mg RNase-free 水 80403 10 mL 微量核酸沉淀剂 50903 10 mL 使用手册 80817sc 1 份 运输及保存
常温运输,收到货后 Oligo(dT)纤维素最好放-20℃长期保存,有效期一年。
自备试剂 75%乙醇
![QQ图片20191121152700.png QQ图片20191121152700.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/6fb646fa-010f-459f-8b5f-b352f7bf1a9f.jpg)
使用方法 本产品提供 25 mg Oligo(dT)纤维素,每克 Oligo(dT)纤维素能够结合 50-80 OD 的 mRNA。
1. 将 250uL 结合液加入到装有 25 mg Oligo(dT)纤维素的离心管中。
2. 洗涤纤维素:取 10 uL(相当于 1mg Oligo (dT)纤维素)与 0.5 mL 结合液 混匀,室温放置 5 分钟。10 uL 相当于 1mg Oligo (dT)纤维素。剩余部分放 -80℃保存。1000g 离心 30 秒,小心吸弃结合液后留 Oligo (dT)纤维素沉 淀待用。
3. 将自备的总 RNA 100uL(如果体积不足 100 uL,用 RNase-free 水补足), 65℃加热 5 分钟。
4. 加入等体积(100uL)的结合液,混匀后冷却到室温。 5. 全部转移到装有 Oligo(dT)纤维素的离心管中,混匀后室温放置 5 分钟,期 间颠倒混匀数次。
6. 4℃ 1000 g 离心 5 分钟,小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去 除了 mRNA 的总 RNA。可以-80℃保存作为阴性对照。如果 mRNA 回收失 败也可以再次用于纯化。
7. 洗涤一次:加入 0.5 mL 结合液,混匀后 4℃ 1000g 离心 5 分钟,小心弃上 清。
8. 重复上步的洗涤步骤 2-4 次。
9. 在加入 50 uL RNase-free 水,混匀后 4℃ 1000 g 离心 5 分钟,小心收集 上清(mRNA)。
10. 重复上步 1 次。
11. 将各次收集的 mRNA 混合,即为 mRNA 溶液。
12. 按微量核酸沉淀剂的方法沉淀 mRNA,具体操作如下:
13. 按 2:1 的比例将微量核酸沉淀剂与 mRNA 溶液混合。注意:微量核酸沉 淀剂取用前需要摇匀。
14. 室温 15000g 离心 10 分钟。
15. 弃上清后加自备的 75%乙醇 1 mL,振荡混匀。
16. 15000g 离心 5 分钟,弃上清。
17. 再短暂离心后小心吸弃上清,沉淀即为回收的 mRNA 沉淀,可溶于 RNase-free 水中直接使用或放-80℃保存。