Collagenase, Type IV, powder 胶原酶IV(进口原料)1g
Collagenase is a protease that cleaves the bond between a neutral amino acid (X) and glycine in the sequence Pro-X-Gly-Pro, which is found with high frequency in collagen. Collagenase is unique among proteases in its ability to degrade the triple-helical native collagen fibrils commonly found in connective tissues such as skin, tendon, blood vessels, and bone. Collagenase disaggregation is suitable for the culture of human tumors, mouse kidney, human adult and fetal brain, and many other tissues including epithelium. Collagenase is relatively gentle, dissociates well at physiological temperature and pH, and requires no mechanical agitation or special equipment.
Reagent Type: Collagenase
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Shelf life: 24 months from date of manufacture产品介绍
本公司胶原酶来源于进口原料,酶活性高,纯度高。本品为固体粉末状态。
胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
IV型胶原酶推荐用于胰腺组织和胰岛的分离。
外观为黑棕色粉末。
分子量68,000到125,000,
最适PH为6.3-8.8。
活性: 高于125 units/mg solid
酶的溶解性:0.05 - 0.1 mg/ml 胶原酶溶于50 mM TES buffer,pH 7.4 (37 ℃) 含 0.36 mM 氯化 钙。
反应体系的终浓度为50 mM TES,0.36 mM 氯化钙,25 mg 胶原,0.005-0.01 mg 胶原酶。
酶液在含有 0.3-0.5 mM 钙离子 PH 7.5 的条件下可以在 37 ℃维持活性 5 小时。在-20℃可以维持数月。
胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X) 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。
主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶,组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。
使用说明:
胶原酶的使 用浓度一般为0.1- 5 mg/ml,消化过程中可以搅拌以促进酶的消化。
胶原酶在消化的过程中可以引起 细胞的少量死亡,一般消化时间为15min至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。
消化过程中的缓冲液为含钙离子和BSA的Krebs Ringer Buffer。在消化的过程中如果细胞大量死亡 则需要降低酶量,同时可以加入0.5%BSA或5-10%血清来稳定细胞的状态和消化效果。
胶原酶的灭菌首先离心或者用0.8μm的滤器去掉不溶物。然后再用0.2μm的滤器过滤除菌。
盐酸 苯甲脒和TLCK联合作用可以与该酶成分中大部分的蛋白酶结合而抑制其活性,但是他们却不会抑 制胶原酶的活性。其中盐酸苯甲脒的浓度一般为1 mM,TLCK 的浓度一般为0.100-0.135 mM。值得 注意的是两者不能完全保证所有蛋白酶的活性均被抑制。
活性说明:
1 个胶原消化单位(CDU):在 pH 7.4,37℃以及钙离子存在的条件下,以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA 单位:在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下,一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
激活剂:Ca2+,最适合浓度为5 mM。
抑制剂:EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、巯基乙酸钠、8-羟基喹啉、2,2'-联吡啶等。
底物:不同类型的胶原是其天然底物,而一些合成的多肽也可以作为其底物,比如: N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。
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