Collagenase, Type V, powder胶原酶V(进口原料)1g
Collagenase is a protease that cleaves the bond between a neutral amino acid (X) and glycine in the sequence Pro-X-Gly-Pro, which is found with high frequency in collagen. Collagenase is unique among proteases in its ability to degrade the triple-helical native collagen fibrils commonly found in connective tissues such as skin, tendon, blood vessels, and bone. Collagenase disaggregation is suitable for the culture of human tumors, mouse kidney, human adult and fetal brain, and many other tissues including epithelium. Collagenase is relatively gentle, dissociates well at physiological temperature and pH, and requires no mechanical agitation or special equipment.
Reagent Type: Collagenase
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Shelf life: 24 months from date of manufacture产品介绍
本公司胶原酶来源于进口原料,酶活性高,纯度高。本品为固体粉末状态。
胶原酶V包含至少7种蛋白酶成分,它能消化多种组织。
它可用于胰腺小岛组织的分离,将结缔组织分离成单个细胞。
外观为黑棕色粉末。
分子量从68-130KD不等,
最适PH为6.3-8.8。
活性:1-3 FALGPA units/mg solid,>125 CDU/mg (CDU=collagen digestion units)
酶的溶解性:溶解性:可溶于TES缓冲液,Hank's平衡盐和Earles平衡盐等溶液。在-20℃可以维持数月。
胶原酶能够特异性结合-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X) 和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的混合酶。
主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白 酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶,组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共 同作用。
使用说明:
消化软骨组织的浓度一般为 1-2 mg/ml,消化肝脏组织大约 1 mg/ml。 但是具体的消化浓度因种属特异性而异。很多文献指出胶原酶可以消化多种组织,胶原酶的使用浓 度一般为 0.1- 5 mg/ml,消化过程中可以搅拌以促进酶的消化作用。胶原酶在消化的过程中可以引起 细胞的少量死亡,一般消化时间为 15min 至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。消化过程中选的缓冲液为含钙离子和 BSA 的 Krebs Ringer Buffer。 在消化的过程中如果细胞大量死亡则需要降低酶量,同时可以加入0.5%BSA或5-10%血清来稳定细胞的状态和消化效果。胶原酶的灭菌首先离心或者用0.8μm的滤器去掉不溶物。然后再用0.2μm 的滤器过滤除菌。 对于组织培养方面的应用,胶原酶可以用不含钙离子的溶液配制如hanks,ebss等。
活性说明:
1 个胶原消化单位(CDU):在 pH 7.4,37℃以及钙离子存在的条件下,以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。
1FALGPA 单位:在 pH 7.5、25℃以及钙离子存在的条件下,一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0μmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
激活剂:Ca2+,最适合浓度为5 mM。
抑制剂:EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、巯基乙酸钠、8-羟基喹啉、2,2'-联吡啶等。
底物:不同类型的胶原是其天然底物,而一些合成的多肽也可以作为其底物,比如: N-CBZ-gly-pro-gly-gly-pro-ala (Km = 0.71 mM)、N-CBZ-gly-pro-leu-gly-pro、N-(3-(2-furyl)acryloyl)- leu-gly-pro-ala(FALGPA)、4-Phenylazo benzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-D-arg、N-2,4-Dinitrophenyl- pro-gln-gly-ile-ala-gly-gln-D-arg。除此之外N-Succinyl-gly-pro-leu-glypro7-amido-4-methylcoumarin是 类胶原酶的肽酶的底物。N-(2,4-Dinitrophenyl)-proleu-gly-leu-trp-ala-D-arg 氨基酸化合物是脊椎动物 胶原酶的底物。
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