阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

 阪崎肠杆菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）

水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，

请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月

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36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。移取 1ml 转种于 10ml ST-Vm 肉汤，44℃±0.5℃培养 24h±2h。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

◆ 实验操作

将试剂完全解冻，各组分离心 30s。

1. 试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：

若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性

对照），将反应液置于 0.6ml 或者 1.5ml 离心管中，涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2ml PCR 管中，并向每管加入 1

滴 C-I（约 20μl）。

试剂 使用量

A-ES-I 22×(N+2)μL

B-I 1×(N+2)μL

反应液总体积 23×(N+2)μL

2．模板制备（样本制备区）

建议使用试剂配套细菌组 DNA 提取系列产品，具体过程详见产品说明书。

3．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）

在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 2μl 模板，顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-ES-I。涡旋混匀 30s，

离心 1min，立即进行扩增反应。

4. 扩增反应（扩增及产物分析区）

①恒温仪器 63℃条件下反应 30min。

②若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个

循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，30 个循环。

其他仪器请参照仪器说明书进行设置。

◆ 结果判定

①仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有阪崎肠杆菌；若显示“阴性”，则样品中不含有阪崎肠杆菌

或含量低于检测限。

②在荧光定量 PCR 仪上，根据有无“S”型扩增曲线判定结果。若有“S”型扩增曲线，则样品中含有阪崎肠杆菌；

若无“S”型扩增曲线，则样品中不含有阪崎肠杆菌或含量低于检测限。

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★ NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技

术支持人员联系。