![1.png 1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201904/uepic/db1e4314-4de5-4d0d-8bc2-5bcbfb40cc9d.jpg)
禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途,下面就向大家介绍PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤
典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
实验过程:
一、禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
相关PCR产品列表:
18-86230 Fowl Adenovirus(FAdV-C)禽腺病毒C型探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-86240 Fowl Adenovirus(FAdV-D)禽腺病毒D型探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-86250 Fowl Adenovirus(FAdV-E)禽腺病毒E型探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-64200 Fowlpox Virus(FPV)鸡痘病毒探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-45710 Francisella novicida新凶手弗朗西斯菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-45700 Francisella spp.弗朗西斯菌通用探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-45720 Francisella tularensis土拉热弗朗西斯菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34710 Fusarium equiseti木贼镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34720 Fusarium graminearum禾谷镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34730 Fusarium moniliformeV探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34740 Fusarium nivale雪腐镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34750 Fusarium oxysporum尖孢镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒(植物病原) 50次
18-34760 Fusarium poae梨孢镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34770 Fusarium solani茄病镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34780 Fusarium sporotricoides拟枝孢镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34700 Fusarium spp.镰刀菌通用探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-34790 Fusarium tricinctum三线镰刀菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-71300 Fusobacterium necrophorum坏死梭杆菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-26910 Gallid Herpesvirus 1禽疱疹病毒1型探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-26920 Gallid Herpesvirus 2禽疱疹病毒2型探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-26900 Gallid Herpesvirus禽疱疹病毒通用探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-46600 Garba病毒探针法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-38100 Gardnerella vaginalis阴道加德纳菌探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-57200 Geotrichum spp.地霉属通用探针法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次
18-46700 Germiston Virus杰米斯顿病毒探针法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次
禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒信息由上海联迈生物工程有限公司为您提供,如您想了解更多关于禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应禽传染性支气管炎病毒 California型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒外,上海联迈生物工程有限公司还可为您提供鲁氏不动杆菌PCR试剂盒、禽脑脊髓炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒、奥叶兹基氏病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。