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厌氧细菌培养技术

2022-07-07 13:34

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资料摘要:

一、厌氧菌的培养方式 厌氧菌的培养过程中,最重要的就是为其提供厌氧生长环境,厌氧环境的提供可以从以下两方面着手。 一方面可以提供厌氧装置如厌氧手套箱,厌氧产气罐或者厌氧产气袋。另一方面可以提供含有还原剂的特殊培养基,如含少量琼脂,L-半胱氨酸,硫乙醇酸钠,巯基乙醇等的液体培养基。 要注意的是,如果没有厌氧手套箱,我们在对厌氧菌活化或者是转接操作的时候,动作要快,防止厌氧菌在空气中暴露的时间过长。 二、我们正常的大气环境中是有氧环境,这类厌氧菌通常生活在哪里呢?我们研究这类菌有什么意义呢? 我们的大气环境确实是一个有氧环境。但是,地球上还存在很多厌氧环境比如深海和淤泥中,厌氧菌在我们人体中也普遍存在。 我们研究厌氧菌,一方面是因为厌氧菌是临床上一类重要的病原菌;另一方面,哺乳动物肠道菌群中99%是厌氧菌,其中许多是促进消化吸收的有益菌,不管是从致病机理,还是开展疾病治疗来说对厌氧菌的研究意义都很重大。 三、为什么好氧菌在生长繁殖过程中必须有氧气存在,而厌氧菌在生长过程中氧气却对对其产生毒害作用呢? 微生物虽然可以利用氧,通过有氧呼吸来产生更多的能量,满足机体的需要,但是氧对一切生物都会产生有毒害的代谢产物,比如会产生超氧阴离子,过氧化氢和羟自由基。超氧阴离子和羟自由基是强氧化剂,能氧化细胞内的大分子物质和有机化合物,对细胞造成损伤,过氧化氢也会损害一些细胞组分。 但是,微生物细胞可以通过产生过氧化氢酶,超氧化物歧化酶和超氧化物还原酶等等这些酶类来清除细胞内的毒性氧。 对于好氧菌来说,细胞内往往会产生超氧化物歧化酶和过氧化氢酶,所以氧气对这类微生物不会产生毒害。 那么对于厌氧菌来说,细胞内无法合成超氧化物歧化酶(SOD)和细胞色素氧化酶,大多数还缺乏过氧化氢酶。所以,这类微生物无法消除氧气对它的毒害作用。只能在无氧的环境中通过发酵或无氧呼吸产能。
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1、选择容积较液体体积大一倍以上的分液漏斗,把活塞擦干,在活塞上   均匀涂上一层润滑脂(切勿涂得太厚或使润滑脂进入活塞孔中,以免污染萃取液)塞好后再把活塞旋转几圈,使润滑脂均匀分布,看上去透明即可。   2、检查分液漏斗的顶塞与活塞处是否渗漏(用水检验),确认不漏水时方可使用,将其放置在合适的并固定在铁架上的铁圈中,关好活塞。   3、将被萃取液和萃取剂(一般为北萃取液体积的1∕3)依次从上口倒入漏斗中,塞紧顶塞(顶塞不能涂润滑脂)。   4、取下分液漏斗,用右手手掌顶住漏斗顶塞并握住漏斗颈,左手握住漏 斗活塞处,大拇指压紧活塞,把分液漏斗口略朝下倾斜并前后振荡:开始振荡要慢,振荡后,使漏斗口仍保持原倾斜状态,下部支管口指向无人处,左手仍握在活塞支管处,用拇子和食指旋开活塞,释放出漏斗内的蒸气或产生的气体,使内外压力平衡,此操作也称“放气"。如此重复至放气时只有很小压力后,再剧烈振荡2—3min,然后再将漏斗放回铁圈中静置。   5、待两层液体分开后,打开顶塞,再将活塞缓缓旋开,下层液体自活塞放出至接受瓶:   (1)若萃取剂的比重小于被萃取液的比重,下层液体尽可能放干净,有时两相间

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