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小磁珠也有大用途

Nanomicro

2017/12/15 09:44

阅读:766

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小磁珠也有大用途

 

分子诊断是以核酸作为检测对象,主要应用于临床各科的诊断中,如肿瘤、感染、遗传等各方面,而核酸提取是分子诊断实验的“第一步”。通过对磁珠进行一定的包被(如硅基、氨基、羧基等),从而可以实现对核酸的高通量、自动化提取,这一技术产生于20世纪80年代,已经有了成熟的试剂盒并形成为产业。

磁珠的用武之地:体外诊断(In-Vitro Diagnostics)

提到磁珠,就不得不提一下目前大热的体外诊断研究,磁珠在其中扮演着不可替代的重要角色。体外诊断(简称IVD)根据其检验原理和方法的不同可分为血液学诊断、生化诊断、免疫诊断、分子诊断、微生物诊断、尿液诊断、凝血诊断等,在我国目前生化诊断市场较为成熟,免疫诊断中以化学发光和分子诊断为发展速度较快的细分市场。

据统计,全球IVD市场于2013年已达到554亿美元,并有望在2018年达到800亿美元规模,欧美日等发达国家是IVD消费的主要市场。具体到产品分类上,POCT、微生物和免疫诊断占比较多,POCT类主要是因为欧美等发达国家的饮食结构和体制原因,在IVD市场中血糖快检应用较多,故而占据了较大比重。

磁珠法提取核酸的原理及步骤

核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下释放DNA/RNA,此时经过表面修饰的超顺磁性纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”形成“核酸-磁珠复合物”,复合物可在外加磁场的作用下被分离,最后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后,可得到欲提取的核酸物质。

图1 磁珠法提取核酸流程示意图

传统核酸提取法与磁珠法比较

随着基因检测、个性化给药、产前诊断等技术的快速发展,生物界各领域都以追求自动化、高通量为诉求,在此背景下磁珠法提取DNA要比传统方法(Chelex100 法、有机法、二氧化硅法、盐析法等)更为简便快捷、安全环保,并且磁珠与核酸进行特异性结合提取得到的产物纯度和浓度都更高。

  截止目前,超过30家企业的45款试剂盒获CFDA批准用于临床检验应用,共计22家企业的核酸提取仪获CFDA批准进口和国产各占50%。 

传统核算提取法

磁珠提取核酸法

技术难度较低

高质量、高产量、高通量

手动提取

流程自动化

操作繁琐,费时费力

无需进行复杂的人工提取程序

不适用大量样品的核酸提取

减少酚类、氯仿等有机试剂对实验者的伤害

不适用临床分子诊断

极大满足现今市场对核酸提取效率的要求

表1. 磁珠提取核酸法与传统提取法基本信息对比

诚意之作:纳微磁珠——MagneStar

MagneStar超顺磁珠是纳微科技(Nano-Micro)开发的具有均一粒径、快速磁反应速度、超高比表面积及生物学惰性的磁珠产品,由于其在蛋白、核酸、抗体和细胞的分离方面具有独特优势,是高通量生物样品制备的理想选择,广泛用于体外诊断(IVD)化学发光、核酸提取、基因测序片段筛选、细胞分离、靶向药物载体等重要领域。MagneStar超顺磁珠包括:磁珠母球、羟基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠和Protein A磁珠。

MagneStar超顺磁珠的优势

ü  多种类型均一粒径:核壳型(300nm,500nm,1μm),单分散夹层型(2μm,3μm,5μm)

ü  超快的磁响应,仅为几秒至十几秒,较同类产品快一倍以上

ü  磁含量可灵活调控,非特异性吸附低

ü  提供各种表面功能基团包被

ü  更专业的客户定制服务  

MagneStar产品属性一览表

磁珠名称

标称直径

表面功能

磁珠结构

特性

典型应用

磁珠微球

300nm

NA

实心磁球

纯Fe3O4

材料研究,用于表面修饰

羟基磁珠

(含母球)

300nm

-SiOH

核壳型

高比表面,高结合量

自动化核酸提取,如:病毒或基因组DNA分离;全血、组织、植物和微生物样本基因组DNA提取;总核酸分离(血浆、全血等);质粒DNA提取

500nm

1μm

2μm

-OH

夹层型

单分散

低非特异性吸附

生物大分子的分离纯化

接枝多种功能团的载体等

3μm

5μm

氨基磁珠

300nm

-NH2

核壳型

高比表面,高结合量

蛋白吸附低,用于核酸分离,   酶固定、小分子纯化、催化剂载体

500nm

1μm

2μm

夹层型

单分散

低非特异性吸附

可进一步偶联蛋白配体如抗原、抗体、Oligo(dT)等生物分子,用于mRNA分离、文库构建、免疫检测、药物结合与靶向输送

3μm

5μm

羧基磁珠

300nm

-COOH

核壳型

高比表面,高结合量

核酸提取,不适合蛋白分子纯化

500nm

1μm

2μm

夹层型

单分散

低非特异性吸附

细胞分离、亲和层析、免疫分析,可在特殊化学试剂(如EDC)的作用下将多肽、蛋白、抗体、寡聚核苷酸等生物配体共价偶联到磁珠表面

3μm

5μm

Protein A

磁珠

2μm

耐碱性

Protein A

夹层型

低非特异性吸附

从血清、腹水、组织培养液中分离高纯度抗体,适用于抗体纯化和免疫(共)沉淀

5μm

*核壳型(PF):以磁性Fe3O4为核,以SiO2或高聚物为外壳层,比表面积大,磁含量高

*单分散夹层型(PFI):以单分散的聚合物为核心,中间层为磁性Fe3O4,最外层是无机材料,以降低非特异性吸附

        

注:我们可以提供磁珠母球、羟基磁珠、羧基磁珠、氨基磁珠,更多规格型号或定制,请联系业务代表。


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