如何正确选择液相色谱柱

一、色谱柱参数及其意义

选择色谱柱时应考虑不同色谱柱参数的影响，以下内容对色谱柱的参数进行分析。

1、色谱柱尺寸

较长的色谱柱组分保留较强，运行时间较长，柱效更高，分离度效果更好。在实际工作中应综合衡量运行时间和柱效，选择长度适宜的色谱柱。例如含量测定、溶出检测对于分离的要求较低，可选用较短的色谱柱，减少运行时间；有关物质一般选择较长的色谱柱，提高分离效果。

内径小的色谱柱灵敏度较高，峰型更窄，但是载样量较小。如果载样量满足要求，需要更高更尖锐的峰提高灵敏度，可以选择更小内径。但是如果进样量超过了柱载样量，色谱峰将极大变宽。所以应在灵敏度和载样量之间综合衡量。

粒径小的色谱柱分离度较好，色谱柱压力更大。如果5μm粒径的色谱柱分离度稍有不足，则同型号3μm色谱柱的分离度一般会提供令人满意的选择性。

如果选择较小尺寸的色谱柱，应衡量柱外死体积对柱效的影响，柱外死体积包括连接管线、进样体积、色谱柱接头与色谱柱连接处的空隙等。所以一般超高效液相使用的色谱柱不适用于常规液相仪。小规格色谱柱最好使用同一品牌的仪器，减少连接处空隙引入的死体积。题外话：岛津、安捷伦、waters之间仪器管线接头和色谱柱不匹配，仪器和色谱柱品牌不一致必然引入较大连接空隙，应注意这方面的影响。

2、其他参数

高比表面积具有较强的保留能力、柱容量和分离度，低比表面积能更快达到平衡状态，这点在梯度淋洗中很有意义。

大孔径的填料可以延长大分子在填料中的滞留时间，达到充分分离，改善峰型。大分子样品一般应选择较大孔径色谱柱，如蛋白质、多肽类。

单齿键合色谱柱平衡更快；双齿键合稳定性较好，柱容量较大。

碳栽量大保留较强，分离效果较好。反之保留较弱，分离效果较差。

封尾（也称封端）柱能减轻碱性组分（阳离子）与硅胶表面残留硅氧负离子作用而引起的色谱峰拖尾现象；对于极性样品经封尾处理与未经封尾处理的色谱柱选择性也不同。一般碱性化合物应选择封尾处理的色谱柱。

二、常见固定相解析

1、直链烷烃（C18、C8、C6、C4、C3……）

非极性和极性较弱的化合物常选择该类固定相色谱柱。一般来说，链长越长，柱容量更大，保留时间更长，分离效果更好，柱稳定性更好。因此C18是最常用的一种反相色谱柱，但是某些组分如大分子样品因其保留太强，使用C18难以洗脱，会用到更短链固定相色谱柱（如C4等）。在开发方法的时候如果使用C18柱，最难洗脱的组分在流动性允许的有机相最高比例下保留仍然太强导致运行时间际过长，就可以考虑使用C8柱。