微流控电阻抗技术检测蜜蜂孢子

倘若地球上的蜜蜂消失了，人类或要消失？这句话不是小编说的，是下图这个老头儿说的。小编也绝没有要危言耸听的意思。

这个老头儿在他的绝密手记上是这么说的：人类有可能在2060年灭绝；倘若地球上的蜜蜂全部消失了，人类或许也要消失了，甚至有可能只剩下不到4年的时间。

好吧，说什么我都不相信他说的2060年人类就灭绝的事情。不过认真地说，如果没有蜜蜂授粉，地球上的万物应该都会受到影响吧。难道要靠苍蝇么？

内生孢子又称芽孢，主要来源于寄生在昆虫的消化道上皮细胞中的微孢子虫，典型的有蜜蜂肠道微孢子虫和家蚕微孢子虫。微孢子虫病感染传播速度快，易出现群体体质衰弱甚至死亡，因此需要对昆虫肠道中的内生孢子进行检测，以达到对微孢子虫病的防控和判断最佳治疗期。

目前，实验室对于蜜蜂肠道内生孢子的计数只能通过显微镜计数，其过程费时费力，且蜜蜂肠道内生孢子粒径较小，仅2_~3μm，不同人员间镜检结果偏差较大，且浓度偏高时镜检尤其困难。卓微科技定制版JIMBIO CL 细胞计数仪可替代显微镜镜检，检测浓度范围为1e5~5e6，能够提高计数效率，给出准确客观的计数结果。

下面是整个蜜蜂肠道内生孢子的计数案例

材料：

感染微孢子虫病蜜蜂 、PBS（1X）

孢子悬液纯化制备：

1、取蜜蜂的腹部，置于放入蒸馏水及研磨粉的研钵中研磨。

2、研磨均匀后转入10ml离心管中，500rpm低速离心3min。

3、上清转入新的10ml离心管，弃沉淀，2000rpm高速离心10min。

4、弃上清，用清水重新悬浮沉淀，4000rpm离心10min。

5、取沉淀，用1mlPBS溶解沉淀，4℃保存备用。

显微镜镜检图：

结果与分析：

从图1、图2可以看出，蜜蜂肠道内生孢子比较小，且浓度较高的时候，样本平铺在血球计数板上非常密集，显微镜下计数困难。

从表1中可以看出，定制版JIMBIO-CL测试结果与计数板统计相比，平均浓度基本一致，由于定制版JIMBIO-CL为10微升样本全计数，测试结果波动较小，稳定性明显优于进口血球计数板。

注意事项：

1、只能使用PBS（1X）稀释待测蜜蜂孢子样本；

2、加样前需充分混匀待测样本（可根据样本总量选择不同规格液枪吹打）；

3、为保证检测结果的稳定性，待检测样本总量不要低于100微升。

致谢：

感谢福建农林大学蜂学院郭睿老师课题组和黄伟峰老师课题组提供样本，并共同完成应用开发。

欢迎研究蚕宝宝的课题组给我们致电，一起研究蚕宝宝的内生孢子。