钙是影响多种细胞过程的重要信使，包括细胞迁移、交流和对刺激物或异物作出反应的能力。由于其在细胞功能中的重要性，细胞内的钙（称为细胞内钙）受到高度调节。钙主要储存在细胞器内，例如内质网和线粒体，并根据特定信号释放。这种严格的调节使细胞内钙成为了解细胞功能和信号动力学的绝佳工具。钙：细胞过程的多功能指示剂有几种细胞内钙的荧光指示剂可用于研究细胞功能。这些指标使研究人员能够检查伤口愈合、传染病、药物治疗等过程中的细胞反应。在我们的实验室中，我们使用钙信号作为读数来了解病毒在感染过程中利用宿主信号反应的能力，并剖析所涉及的信号通路。为此，我们利用含有荧光钙指示剂的细胞活细胞成像，其中荧光的增加表明细胞内钙的增加。轮状病毒感染的非洲绿猴肾细胞 (MA104) 的活细胞成像。MA104 细胞，以绿色显示，表达钙指示剂 GCaMP6s，其中绿色增加表示细胞内钙增加。在这个活体细胞成像视频中，轮状病毒感染的细胞呈红色——Hyser 实验室此前曾报道，在轮状病毒感染期间，轮状病毒会导致受感染细胞中的细胞内钙增加，随后激活邻近细胞中的特定信号通路，从而引起未感染细胞的细胞内钙信号 (Chang-Graham et al., 2020)。钙指示剂的种类及应用：钙指示剂主要分为两大类：化学指示剂（即染料）和基因编码的钙指示剂（即钙指示剂被编码到细胞系、动物模型或系统中）。钙指示剂已用于使用显微镜、高通量筛选和流式细胞术进行的体内和体外工作。然而，我们将专注于使用显微镜在体外可视化和量化钙信号。用于活细胞成像实验的钙指示剂类型取决于预期的细胞系、成像长度以及定性或定量数据的预期结果等因素。1. 预期细胞系：对于原代细胞系，直接的方法是使用荧光染料（化学指示剂），其中荧光钙指示剂被简单地添加到培养的细胞中，并可以在孵育期后成像。这些染料也是首次实验收集初步数据的极好方法。使用荧光染料时的一个重要提示是在添加之前和之后彻底清洗细胞，因为染料会导致高背景荧光，使得在显微镜和活体成像期间更难以正确聚焦细胞。与基因编码的钙指示剂相比，荧光染料通常更亮、更稳定。然而，染料通常不如遗传传感器特异，并且可以具有更高的背景荧光。在活细胞成像中，荧光染料（包括 Fura-2AM、Fluo-4AM、Indo 1AM 等）可以有效地进行短期活细胞成像。一个潜在的警告是，在某些细胞中，细胞可能会保留染料或无法正确加载到某些细胞类型或亚群中。此外，随着时间的推移，细胞倾向于抽出染料。虽然添加阴离子转运蛋白抑制剂可以防止细胞泵出染料，但这些抑制剂可能对某些细胞类型具有细胞毒性，如果使用其他治疗方法评估钙信号的变化，可能会使情况复杂化。钙染料的一个重要考虑因素是使用抑制剂还是激动剂。抑制剂和激动剂也可能影响钙染料反映类似于天然组织中的表达的能力。在用 ADP 进行激动剂治疗期间，人肠道类器官单层的实时、短期成像。这些有机体单层以绿色表达钙指示剂 GCaMP6s。ADP 是一种已知的激动剂，用于在细胞中引发细胞内钙信号传导。激动剂治疗是测试治疗剂量反应的极好方法。2. 成像长度时机就是一切。对于活细胞成像，时间长度和间隔是需要牢记的重要参数。成像过程中的主要问题是光漂白和光毒性。应避免连续应用激发光，重要的是选择足够强的曝光时间和光功率来检测钙信号，但不要过强，以免对细胞造成损害。成像的长度将取决于实验。对于测试激动剂或细胞反应，这通常是 5-20 分钟的较短成像运行，每 1-2 秒捕获一次图像。对于研究伤口修复或病毒感染期间钙信号传导的实验，我们会在 18-20 小时内成像，每分钟捕捉一次图像。轮状病毒感染的非洲绿猴肾细胞 (MA104) 的活细胞成像。MA104 细胞，以绿色显示，表达钙指示剂 GCaMP6s，其中绿色增加表示细胞内钙增加。在这个活细胞成像视频中，轮状病毒感染的细胞呈红色——Hyser 实验室此前曾报道，在轮状病毒感染期间，轮状病毒会导致受感染细胞中的细胞内钙增加，随后激活邻近细胞中的特定信号通路，从而引起未感染细胞的细胞内钙信号。钙成像LED光源pE-340 fura和pE-800 fura提供了最全面的钙成像系统，强大而高效的 LED 提供 340-635 nm 的光谱覆盖范围，适用于所有流行的钙指示剂、pH 指示剂、视蛋白以及从 Fura-2 到 Cy5 的日常荧光荧光团。通过 USB、TTL 或模拟实现对所有八个通道的单独控制，以便轻松地将每个 LED 与选定的钙指示剂或荧光团组匹配。与激光不同，LED 更宽的光谱输出可以通过使用滤光片进行细化，以激发一系列染料，从而扩大的覆盖范围。使用新的 LED 照明光源，可以将更少的 Fura-2 染料加载到细胞中，同时仍保持相同的测量钙浓度和良好的信噪比。由于染料毒性降低，所需染料的减少不仅提高了细胞活力，而且还降低了每次实验的成本,通过波长切换和滤光片定制波长输出的能力意味着实验不再受光源的限制，即使在未来需求发生变化或新染料出现时也是如此。活细胞成像的技巧考虑要使用的细胞系很重要。为了研究钙动力学（或其他细胞信号），使用形成为单层的细胞系将确保感兴趣的区域将保持聚焦以捕获信号动力学以获得最佳视频质量和干净的量化。对于涉及细胞间通讯和钙动力学的实验，细胞系汇合度也是一个重要的考虑因素。为了获得最佳质量的成像，选择合适的载玻片非常重要。有些细胞培养物更喜欢玻璃而不是光学级塑料载玻片，因此最好测试腔室载玻片。我们为我们的细胞系使用ibiTreat  µ-Slide 8 Well高腔盖玻片。µ-Slide 8 Well high（货号80806）对于活细胞成像，重要的是以允许形成融合的单层但不会导致细胞过度拥挤和结块的密度对细胞进行铺板。最后一个技巧是在成像过程中使用合适的介质。许多传统细胞培养基含有酚红，会导致高背景荧光。这使得在成像过程中很难将真实信号与背景噪声分开。因此，用 PBS 清洗细胞并用无酚红培养基或用于活细胞成像的市售培养基替换培养基非常重要。毒胡萝卜素治疗前后非洲绿猴肾细胞 (MA104) 的活体短期成像。MA104 细胞，以绿色显示，表达钙指示剂 GCaMP6s，其中绿色增加表示细胞内钙增加。毒胡萝卜素是一种众所周知的肌细胞/内质网 Ca2+-ATP 酶抑制剂（这对于从胞质溶胶中螯合钙很重要）。通过这种抑制作用，毒胡萝卜素诱导内质网应激，并可导致源自内质网的细胞内钙增加。参考：Chang-Graham AL, Perry JL, Engevik MA, Engevik KA, Scribano FJ, Gebert JT, Danhof HA, Nelson JC, Kellen JS, Strtak AC, Sastri NP, Estes MK, Britton RA, Versalovic J, Hyser JM. Rotavirus induces intercellular calcium waves through ADP signaling. Science. 2020 Nov 20;370(6519):eabc3621. doi: 10.1126/science.abc3621.

流体环境下的细胞影响关键因素是什么剪切力（dyn/cm2）体内的内皮细胞通常存在于它们不断暴露于血流摩擦力（称为剪切应力）的环境中。剪切应力是生理条件下内皮细胞功能的关键调节因子，流动障碍和剪切应力改变与动脉粥样硬化或血栓形成等病理有关。内皮细胞通过各种受体感知剪切应力，并将机械剪切应力刺激传递到细胞内信号传导中，导致细胞功能和表型发生变化血液流动细胞如何感知剪切力剪切力由细胞表面的流量传感器感应，内皮细胞表达各种机械传感信号。细胞骨架在整个细胞的剪切力传递中起着关键作用，信号通过细胞骨架元件传递到各种细胞内位点。流体环境下细胞—模拟血管在模拟流体生理条件下体外培养内皮细胞：•细胞形态的变化•肌动蛋白应力纤维的形成•稳定性粘附连接和紧密连接（屏障形成）vHUVEC的免疫荧光染色，分别在静态条件下和流动下培养5天流体活细胞-活细胞成像流体下的活细胞成像可以实时可视化剪切应力效应（例如，肌动蛋白应激纤维的形成）HUVEC在20 dyn/cm2下培养的LifeAct-TagGFP2。图像分别以相差和荧光拍摄模拟淋巴血管中的流动系统设置: 1） ibidi Pump System 2） µ-Slide I 0.8 Luer 3） Oscillating flow  (4 dyn/cm2; 0.25 Hz; 48h)Courtesy of A. Sabine, Universityof Lausanne, Switzerland(refer to A. Sabine et al., TheJournal of Clinical Investigation, 2015)FOXC2 和振荡剪切应力维持淋巴管内皮细胞-细胞连接和血管完整性。流体环境下—滚动和粘附试验研究流动下的细胞-细胞附着可以深入了解免疫细胞-内皮细胞的相互作用（e.g., during inflammation）单层的 LPS 刺激脑血管内皮细胞（ CVEC ）以1 dyn / cm灌注 的颗粒细胞。

周细胞生长在血管内皮细胞外周，能够辅助血管的成熟。周细胞的缺失能够直接影响血管的形成。但在肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension (PAH)）患者肺组织内的内皮细胞与周细胞之间的关联而导致的血管损伤的机理却尚未清楚。 斯坦福的科研人员在研究周细胞（pericytes）和肺血管内皮细胞（PMVECs）关系时，希望能观测到周细胞和PMVECs共培养时，周细胞收到PMVECs细胞的影响而产生的迁移和极化行为。但在传统的实验中，研究人员只能发现周细胞对PMVEC细胞有一趋化行为。但是无法量化这一趋化行为，也无法研究周细胞的极性变化。 SUMOylation of TARBP2 regulates miRNA/siRNA efficiency.Chen C, Zhu C, Huang J, Zhao X, Deng R, Zhang H, Dou J, Chen Q, Xu M, Yuan H, Wang Y, Yu J.Nat Commun. 2015 Nov 19;6:8899. doi: 10.1038/ncomms9899 在文中，研究人员使用Ibidi开发的伤口愈合插件进行了这一共培养“伤口愈合”实验。这是一种双孔的硅胶插件，可以放在培养皿中，插件两孔间的孔壁宽度为500μm。将两种细胞分别种在插件的两个孔中，等待细胞贴壁长满后，将插件移除，这样，两孔间的缝隙就是一个无细胞的“划痕”。不仅能够观测到周细胞向内皮细胞迁移的行为，而且可以使用细胞免疫荧光染色的方法，对周细胞内的细胞骨架排列进行观测，确定细胞的一个趋化行为。一，实验材料 1) 细胞:    PMVECs        （C-12282，PromoCell）Pericyte          2) 实验耗材:   伤口愈合插件培养皿 (ibidi, 81176) 3) 细胞培养基:  EC-media   （C-22120， PromoCell）                   Pericyte media （ScienCell Research Laboratories） 4) 灭菌镊子 5) 试剂：中性粒周蛋白    （ab4448， Abcam）                              鬼笔环肽        （Invitrogen）二，实验步骤1）铺细胞（图二）将ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带撕除。在ibidi细胞插件的每孔中分别加入1.5 × 104的PMVECs和Pericyte的细胞悬液。注意不要大力晃动培养皿。以防止细胞不均匀。在37℃培养箱中孵育。图二，ibidi伤口愈合插件中加入细胞2）形成“划痕”采用无血清培养基饥饿细胞16小时。如图四所示，小心的用镊子夹住插件的一个角，将插件移除。图三，移除插件移除插件后，要用显微镜检查是否形成合格的“划痕”。小心的清洗细胞，之后加入2ml培养基进行培养（图四）。三，采集并分析图像在显微镜下选取能同时看到“划痕”和两边细胞的视野进行成像，“划痕”的方向最好是水平或者垂直。采集0h和6h的图像，观测细胞的迁移率和细胞迁移方向。       用中性粒周蛋白定位微管生长中心（MTOC）并用鬼笔环肽标记F-actin。由图可见，相对于左侧的对照，右边的PAH来源的Pericytes迁移距离较短，并且从荧光标记图上可见，红色箭头表示迁移的方向，PAH组无特定方向，不受PMVEC的影响。柱状图为统计结果。

介绍：在全球范围内，癌症每年造成约 1000 万人死亡。1与癌症相关的死亡的主要原因不是原发肿瘤，而是癌症转移：恶性细胞侵入原发肿瘤以外的组织并在这些组织中扩散1，基础癌症研究是世界卫生组织降低癌症死亡率1战略的关键因素之一，研究转移的潜在机制可为主要临床问题提供重要信息。 在癌症转移中，单细胞的迁移在很大程度上受化学线索的影响，化学线索通过趋化性2为细胞迁移提供方向：单细胞沿着化学引诱物的浓度梯度迁移。3已经描述了各种化学引诱物用于通常研究的细胞系。据报道，HeLa 细胞（宫颈癌细胞）向更高浓度的纤维连接蛋白4和基质细胞衍生因子 1α 迁移。5已描述大鼠神经胶质瘤细胞系 C6 被缓激肽吸引。6包含所有上述化学引诱剂分子的细胞培养中常用的培养剂是胎牛血清 (FBS；未出生小牛的血清)。7-9因此，FBS 为化学线索提供了一个有趣且直接的模型系统提供给癌细胞。 然而，为了研究癌细胞对化学线索的反应，需要在具有化学引诱剂梯度的环境中进行准确的细胞追踪。已经进行了多种细胞培养容器设计，向细胞10-12提供趋化梯度，对细胞成像和监测。这些血管中的细胞可以提供实际问题。目前，最常用的活细胞成像装置是具有足够放大倍数的显微镜和用于调节培养条件的台面培养箱。虽然这些显微镜具有精确成像和细胞跟踪所需的光学特性，但在使用这种设置进行活细胞成像时存在实际问题。与专用培养箱相比，培养箱中培养条件的调节对变化更敏感。13,14此外，图像仅在某些时间点捕获，但显微镜无法用于其他用户在此期间的（端点）成像整个实时成像实验。可以克服这些问题的系统是 CytoSMART® Lux3 BR Duo 试剂盒。这种用于活细胞成像的专用系统适用于常规培养箱，因此可以在恒定和最佳的培养环境中进行培养监测。 这些设备的光学特性提供了高质量的成像，以及准确的细胞追踪。通过将同一培养箱内的两个设备连接到一台笔记本电脑，可以同时监测和比较两种培养物，而无需为其他实验室成员占用显微镜。 在这项概念验证研究中，我们使用并排的高质量活细胞成像来确定 FBS 梯度对癌细胞系定向迁移的影响。使用ibidi µ-Slide Chemotaxis, CytoSMART® Lux3 BR Duo Kit 用于监测暴露于 FBS 梯度或恒定 FBS 浓度的两种癌细胞系。随着时间的推移跟踪细胞，这提供了对癌细胞趋化迁移的基本见解，这可能最终与癌症转移有关。ibidi 80326图 1：实验设置。将癌细胞系接种在 Ibidi µ-Slide Chemotaxis 中并添加培养基，从而产生 FBS 梯度或恒定 FBS 浓度。使用 CytoSMART® Lux3 BR Duo 试剂盒监测培养物 24 小时，成像间隔为 5 分钟。材料和方法：在标准培养条件下，将 HeLa 细胞（Innoprot P20107）和 C6 细胞（ATCC CCL-107）在补充有 10% FBS (Gibco) 和 1% pen-strep (Gibco) 的 DMEM (Gibco) 中培养至亚融合 (37 °C；5% CO2)。每个癌细胞系以每通道 18,000 个细胞（6 µl 细胞悬浮液；300 万个细胞/ml；含 10% FBS 的培养基）接种在 Ibidi µ-Slide Chemotaxis 中。将 65 µl 培养基（DMEM、FBS、pen-strep）添加到两边水库中：一个水库中的 20% FBS 和另一个水库中的 0% FBS 或两个水库中的 10% FBS（图 1）。使用 CytoSMART® Lux3 BR Duo 试剂盒（37°C；5% CO2）制作培养物的高质量图像：监测培养物 24 小时，每 5 分钟拍摄一次快照。然后，从 CytoSMART® Cloud 导出图像，并使用 FIJI 插件 TrackMate 跟踪单个细胞。15使用 FIJI 插件 Chemotaxis 和迁移工具将跟踪的路径转换为趋化图。16结果：图 2（HeLa 细胞）和图 3（C6 细胞）中显示了具有 FBS 梯度或恒定 FBS 浓度的培养物的延时图像。HeLa 细胞在恒定 FBS 浓度下从它们的起源迁移了更远的距离，但表现出略微倾向于向更高的迁移暴露于梯度时的 FBS 浓度。在恒定的 FBS 浓度下，C6 细胞似乎从原点迁移的距离更小。然而，这些细胞在 FBS 梯度中也显示出较少的定向迁移 - 因此没有明显的趋化迁移。图 2：HeLa 细胞在恒定 FBS 浓度下迁移更大的距离，但在暴露于梯度时更倾向于向更高的 FBS 浓度迁移。A) 使用 CytoSMART® Lux3 BR Duo Kit 制作的 HeLa 细胞原始图像，使用 FIJI 插件 TrackMate 进行单细胞检测（紫色）和路径检测（黄色）。B) 使用 FIJI 插件趋化性和迁移工具可视化的 HeLa 细胞的趋化位移，纵向和横向位移相对于 FBS 梯度定义。图 3：C6 细胞在 FBS 梯度中没有显示出明显的趋化迁移。A) 使用 CytoSMART® Lux3 BR Duo 试剂盒制作的 C6 细胞原始图像，使用 FIJI 插件 TrackMate 进行单细胞检测（紫色）和路径检测（黄色）。B) 使用 FIJI 插件趋化性和迁移工具可视化的 C6 细胞的趋化位移，纵向和横向位移相对于 FBS 梯度定义。讨论：癌症转移是癌症相关死亡的主要原因，因此细胞迁移是癌症研究的重要课题。高质量的活细胞成像是准确细胞追踪的先决条件，它提供了对驱动转移性细胞迁移机制的基本见解。这些机制之一是趋化性，其中细胞沿着趋化剂的梯度增加迁移。本研究旨在通过 ibidi µ-Slide Chemotaxis和CytoSMART® Lux3 BR Duo 试剂盒使用并排高质量活细胞成像来确定 FBS 梯度对癌细胞系定向迁移的影响。这些设备提供了可立即应用于分析软件的高质量图像，从而实现轻松准确的单细胞跟踪。从该跟踪中可以看出，HeLa 细胞更倾向于向更高的 FBS 浓度迁移，而 C6 细胞则不太清楚。宫颈癌是最常见的转移性原发肿瘤之一，转移灶见于例如骨、肝和肺组织。17胶质瘤转移是一种非常罕见的现象。18,19这些转移中的每一个的临床患病率都可能与血清的多少有关 - 在本研究中由 FBS 建模– 作为细胞的化学引诱剂。由于通过血流扩散是转移17的主要机制，因此肿瘤细胞向血管的定向迁移和可能的趋化迁移可引发转移。与神经胶质瘤细胞系 C6 相比，在本研究中显示出更多趋化迁移的宫颈癌细胞系 HeLa 似乎与相应转移的临床患病率一致。在本研究中用作化学引诱剂的 FBS 提供了一个实验上简单的模型系统。除此之外，这种设置模拟了向血管的定向迁移。然而，FBS 具有可变且复杂的组成 20，因此对负责所研究细胞定向迁移的特定分子几乎没有提供任何了解。还应考虑到 FBS 具有除趋化迁移外影响细胞行为的其他特性：例如，细胞培养物中的 FBS 浓度会影响细胞增殖。21尽管在高 FBS 浓度和低 FBS 浓度下增殖率没有明显差异观察到，细胞迁移可能仍然受到其他 FBS 相关过程的影响。因此，在相同设置下的后续实验，使用单个化学引诱剂可以提供有关细胞行为的更详细信息。结论：在这项研究中，我们成功地展示了使用高质量活细胞成像进行准确细胞追踪的可能性。 ibidi µ-Slide Chemotaxis，CytoSMART® Lux3 BR Duo Kit 能够并行监测实验条件，并提供直接适用于细胞追踪的图像。这揭示了趋化性。HeLa 细胞在 FBS 梯度中的迁移，而 C6 细胞没有显示出明显的趋化迁移。高质量的成像和相应的结果最终可能与癌症转移的基础研究相关。参考文献： [1] World Health Organization (2021). Fact sheet: Cancer. Retrieved from: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cancer.[2] Roussos ET, Condeelis JS, Patsialou A (2011). Chemotaxis in cancer. Nat Rev Cancer, 11(8), 573-587.[3] Iijima M, Huang YE, Devreotes P (2002). Temporal and spatial regulation of chemotaxis. Dev Cell, 3(4), 469-478.[4] Sugihara K, Saito T, Okadome M, Sonoda K, Kobayashi H, Kamura T, Tsukamoto N, Nakano H (1994). The promotion of invasionthrough the basement membrane of cervical carcinoma cells by fibronectin as a chemoattractant. Cancer Lett, 79(2), 167-173.[5] Sun Y, Cheng Z, Ma L, Pei G (2002). β-Arrestin2 is critically involved in CXCR4-mediated chemotaxis, and this is mediated by its enhancement of p38 MAPK activation. J Biol Chem, 277(51), 49212-49219.[6] Montana V, Sontheimer H (2011). Bradykinin promotes the chemotactic invasion of primary brain tumors. J Neurosci, 31(13),4858-4867.[7] Hayman EG, Ruoslahti E (1979). Distribution of fetal bovine serum fibronectin and endogenous rat cell fibronectin in extracellular matrix. J Cell Biol, 83, 255-259.[8] Marques CS, Soares M, Santos A, Correia J, Ferreira F (2017). Serum SDF-1 levels are a reliable diagnostic marker of feline mammary carcinoma, discriminating HER2-overexpressing tumors from other subtypes. Oncotarget, 8(62), 105775.[9] Zhou Y, Wang W, Wei R, Jiang G, Li F, Chen X, Wang X, Long S, Ma D, Xi L (2019). Serum bradykinin levels as a diagnostic marker in cervical cancer with a potential mechanism to promote VEGF expression via BDKRB2. Int J Oncol, 55(1), 131-141.[10] Guy JB, Espenel S, Vallard A, Battiston-Montagne P, Wozny AS, Ardail D, Alphonse G, Rancoule C, Rodriguez-Lafrasse C, Magne, N. (2017). Evaluation of the cell invasion and migration process: a comparison of the video microscope-based scratch wound assay and the boyden chamber assay. J Vis Exp, 129, e56337.[11] Nogalski MT, Chan GC, Stevenson EV, Collins-McMillen DK, Yurochko ADA (2012). Quantitative evaluation of cell migration by the phagokinetic track motility assay. J Vis Exp, 4(70), e4165.[12] Chen Y-C, Allen SG, Ingram PN, Buckanovich R, Merajver SD, Yoon E (2015). Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations. Sci Rep, 5, 9980.[13] Frigault MM, Lacoste J, Swift JL, Brown CM (2009). Live-cell microscopy–tips and tools. J Cell Sci, 122(6), 753-767.[14] Ettinger A, Wittmann T (2014). Fluorescence live cell imaging. Methods Cell Biol, 123, 77-94.[15] Tinevez J-Y, Perry N, Schindelin J, Hoopes GM, Reynolds GD, Laplantine E, Bednarek SY, Shorte SL, Eliceiri KW (2017). TrackMate: An open and extensible platform for single-particle tracking. Methods, 115, 80–90.[16] Ibidi (n.d.). Chemotaxis and Migration Tool. Retrieved from: https://ibidi.com/chemotaxis-analysis/171-chemotaxis-andmigration-tool.html.[17] NIH – National Cancer Institute (2020). Metastatic Cancer: When Cancer Spreads. Retrieved from: https://www.cancer.gov/types/metastatic-cancer. [18] Alvord EC (1976). Why do gliomas not metastasize?. Arch Neurol, 33(2), 73-75. [19] Lun M, Lok E, Gautam S, Wu E, Wong ET (2011). The natural history of extracranial metastasis from glioblastoma multiforme.               J Neurooncol., 105(2), 261-273. [20] van der Valk J, Bieback K, Buta C, Cochrane B, Dirks W, Fu J, Hickman JJ, Hohensee C, Kolar R, Liebsch M, Pistollato F, Schulz M, Thieme D, Weber T, Wiest J, Winkler S, Gstraunthaler G (2018). Fetal bovine serum (FBS): past–present–future. Altex, 35, 99-118. [21] Ibrahim B, Stange J, Dominik A, Sauer M, Doss S, Eggert M (2020). Albumin promotes proliferation of G1 arrested serum starved hepatocellular carcinoma cells. PeerJ, 8, e8568.

广州科适特CoolLED荧光光源暨南大学装机广州科适特科学仪器有限公司一直致力于为客户提供定制化的荧光显微镜成像系统，根据客户的反馈和需求为客户提供显微镜解决方案和服务，暨南大学荧光显微镜光源顺利安装完成，主机是Nikon Ti-U倒置荧光显微镜，之前使用的其他的LED光源，光强比较弱，无法获得高质量的荧光图像，因此需要更换大功率激发光源，我们推荐客户使用的是CoolLED pE-300White，光源可以通过TTL和USB软件控制开关，大功率LED光源确保高要求的应用图像清晰，pE-300White光源此为日常的荧光团研究提供照明，例如DAPI, FITC, TRIT和Cy5，安装操作简单，效果良好。我们推荐使用的是pE-300white直接连接版本，可直接安装至显微镜的落射荧光端口，简单调整后，便可优化显微镜光路，可通过桌面控制终端优化亮度，减少样本损伤。直接连接优势：直接连接到显微镜时，可以提高照明强度。照明强度不会损耗，无需液体光导管耗材，减少后期使用成本，匹配当前所有新旧显微镜的适配器选择。只需要一次简单调整便可使用。为什么选择CoolLED?卓越的技术CoolLED系统专用于生成明亮的高对比度图像，以增强研究人员和临床医生的数据生成和解读能力。我们通过专业的LED组装和独特的主动冷却技术来实现该目标，使辐照度能够达到其他LED照明系统的五倍之多。通过热管理将LED保持在恒定温度下，从而更好地驱动设备，以增加辐照度，稳定性，可靠性和使用寿命，同时提供市场上最低的能耗。运用直接照明，有效地将光传输到显微镜，因此可以不需要液体导管，目前只有 CoolLED提供该功能，并且我们的照明系统类型可利用更大的功率，同时耗材更少而使总成本最低。CoolLED提供一系列LED产品和不同控制级别，从单波长模型和简单白光到用于高级研究应用的高级系统。CoolLED荧光光源特点：· 寿命长，衰减慢，通常不需要更换灯泡及校准· 即时开/关： 无需预热或冷却· 控制方便，可TTL,USB,通常也配备外部控制器· 能进行特定波长开关，减少荧光串色及荧光淬灭。· 结合多色带通滤片组的选择可实现无转盘设计，减少震动 

广州科适特科学仪器有限公司一直致力于为客户提供定制化的荧光显微镜成像系统，根据客户的反馈和需求为客户提供显微镜解决方案和服务，天津大学荧光显微镜光源顺利安装完成，该系统为Nikon Ti2荧光显微镜，ECLIPSE Ti2提供了25mm视野（FOV），大限度地扩大了大尺寸CMOS摄像机的传感器面积，从而显着提高了数据效率，我们推荐客户使用的是CoolLED pE-300Lite光源，大功率LED光源在Ti2的大视野下提供亮度照明，确保高要求的应用的清晰，pE-300Lite光源此为日常的荧光团研究提供照明，例如DAPI, FITC, TRIT和Cy5，符合常规的实验室耗材预算，安装操作简单，效果良好。我们推荐使用的是pE-300Lite直接连接版本，可直接安装至显微镜的落射荧光端口，简单调整后，便可优化显微镜光路，可通过桌面控制终端优化亮度，减少样本损伤。直接连接优势：直接连接到显微镜时，可以提高照明强度。照明强度不会损耗，无需液体光导管耗材，减少后期使用成本，匹配当前所有新旧显微镜的适配器选择。只需要一次简单调整便可使用。为什么选择CoolLED?卓越的技术 CoolLED系统专用于生成明亮的高对比度图像，以增强研究人员和临床医生的数据生成和解读能力。我们通过专业的LED组装和独特的主动冷却技术来实现该目标，使辐照度能够达到其他LED照明系统的五倍之多。通过热管理将LED保持在恒定温度下，从而更好地驱动设备，以增加辐照度，稳定性，可靠性和使用寿命，同时提供市场上最低的能耗。运用直接照明，有效地将光传输到显微镜，因此可以不需要液体导管，目前只有 CoolLED提供该功能，并且我们的照明系统类型可利用更大的功率，同时耗材更少而使总成本最低。CoolLED提供一系列LED产品和不同控制级别，从单波长模型和简单白光到用于高级研究应用的高级系统。LED荧光光源优点：寿命长，衰减慢，通常不需要更换灯泡及校准即时开/关： 无需预热或冷却控制方便，通常配备有外部控制器能进行特定波长开关，减少荧光串色及荧光淬灭。结合多色带通滤片组的选择可实现无转盘设计，减少震动

 广州科适特科学仪器有限公司一直致力于为客户提供定制化的荧光显微镜成像系统，根据客户的反馈和需求为客户提供显微镜解决方案和服务，最近刚好为暨南大学客户安装一台荧光光源，客户使用的是Olympus IX-81电动倒置荧光显微镜系统，具有多种物镜（4x – 100x）和CCD相机，该仪器原来搭配传统金属卤素灯光源，客户觉得不太好用，后期需要更换耗材，维护成本高，所以现在想更换LED荧光光源，我们推荐客户使用的是CoolLED pE-300Lite光源，此为日常的荧光团研究提供照明，例如DAPI, FITC, TRIT和Cy5，符合常规的实验室耗材预算，安装操作简单，效果良好。给客户推荐使用的是pE-300Lite直接连接版本，可直接安装至显微镜的落射荧光端口，简单调整后，便可优化显微镜光源，一步到位，使用简单，即时开关，可通过桌面控制终端优化亮度，减少样本损伤。 LED荧光光源优点：寿命长，衰减慢，通常不需要更换灯泡及校准即时开/关： 无需预热或冷却控制方便，通常配备有外部控制器能进行特定波长开关，减少荧光串色及荧光淬灭。结合多色带通滤片组的选择可实现无转盘设计，减少震动

荧光显微镜是目前使用频率很高的常用实验室仪器。如果优化从光源到样品表面的照明是实验室经常碰到的问题。广州科适特科学仪器有限公司在给客户服务过程中，根据客户反馈和参考相关文献，简要总结如何优化显微镜荧光光源。当来自显微镜荧光光源在通往显微镜的样品表面可能出现问题时，可以在以下部位查找可能的故障原因。 显微镜荧光光源与倒置荧光显微镜的连接。虹色标记的位置1-5对应于后续表格中用于测量的光路中的位置。 近年来，越来越多的LED光源被用于荧光显微镜成像。这些LED光源的设计克服了汞灯和金属卤化物弧光灯的局限性，可提供令人优越的性能，远远超过了早期的照明光源。LED显微镜荧光光源具有高信噪比（SNR）和高分辨率，增强的灵敏度和稳定性特点。可为荧光显微镜成像提供高质量的实验数据，同时具有更长的使用寿命和更低的维护成本。但是，要实现LED光源的这些优点，必须将照明器的输出有效的传送到显微镜的样品表面。我们可以研究一下显微镜荧光光源是如何传递到显微镜样品表面的。光路分析不仅可以用于优化照明效果，还可以用于解决照明中出现的问题。显微镜光源光路分析当我们发现显微镜样品平面的荧光激发亮度不够，很容易就认为光源有问题，光强不够。但通常不一定正确。因为实际上，光路的所有中间组件都可能影响最终的样品表面照明。解决这个问题需要考虑所有将照明器输出传输到显微镜的光学组件的情况（请参考下图），这些配件最终都会影响整个显微镜的通光率。该表对从显微镜荧光光源到显微镜样品表面的光通量进行了逐步分析。使用10倍物镜（位置5A）在样品平面上测得的光通量大概15–50 mW / mm2，基本在宽场荧光显微镜的需求范围内（1–100 mW / mm2）。下图显示了用来测试的光源到Nikon Ti显微镜样品表的光通量。 对于荧光显微镜应用，光源提供的辐照度在各波长下是不一样的。这是因为荧光发射光强度取决于可用于荧光团吸收的光子数。对于相同的辐照度水平，光子数量随波长增加。因此，在其它条件不变的情况下，375 nm激发光下产生一定荧光强度所需的辐照度是750 nm（2×375 nm）所需的辐照度的两倍。因此，在显微镜光源中通常红色光谱区域具有较低的辐射通量水平（635/22 nm；请参阅表的最右列）。尽管表中所示的辐射通量水平对于常规的宽视野荧光显微镜来说是足够使用的，但确实存在改进的机会。此类改进针对两个主要应用需求。首先，要在较短的时间间隔内获取更多图像而又不影响信噪比，则需要来自光源的较高辐射度和较短的相机曝光时间。第二，许多用于提高宽视野荧光显微镜的空间分辨率的技术会增加光学滤片。由滤片引起的损耗必须通过增加光源的输出来补偿。改进方法探讨我们参考表中光路，简要地研究实现这些改进的方法。1. 激光光源：与本文举例使用的LED荧光光源不同，采用固态二极管激光光源来提高输出光功率。2. 液体光导管。液体光导可以减少显微镜荧光光源引起显微镜振动。它也可以使光源可以放在远离显微镜的位置，避免操作空间太拥挤。但是，液体光导管会降低显微镜荧光光源输出，损耗35％到50％的光强。可以选择较大直径（例如5mm光导管代替3mm）的液体光导管提高辐照度，这通常需要重新设计显微镜光路以将增加的光强传播到样品平面。3. 准直镜：与基于消色差透镜的传统设计相比，采用复眼透镜的准直仪可提供出色的光通量和空间均匀性。4. 物镜：在落射荧光显微镜中，荧光强度与物镜数值孔径（NA）相关，物镜的数值孔径越大，荧光强度也增加。因此，选择大数值孔径的物镜，同时具有足够的工作距离能够获得更好的荧光效果。总体来说，荧光显微镜的照明光源技术不断在发展。传统的弧光灯有很多缺点，包括它们含有有毒的汞蒸气。LED光源由于光强的不断改进，已经能够满足大部分荧光成像的要求。但是，按照上面介绍的分析步骤进行操作，将有助于显微镜用户理解光源与显微镜是如何一起工作的，并有助于找到光源及成像问题的原因。参考文献1. D. Grünwald, S. M. Shenoy, S. Burke, and R. H. Singer, Nat. Protoc., 3, 1809–1814 (2008).2. D. Dormann, PLoS One, 14, e0214659 (2019).3. B. Van Giel, Y. Meuret, and H. Thienpont, Opt. Eng., 46, 043001 (2007). 电子邮件：support@kosterscience.com

1 信息细胞迁移在许多复杂的生理和病理过程中起着重要作用。伤口愈合测定是研究体外细胞迁移的简单方法。该测定基于以下观察：在汇合的单层中人工产生的间隙边缘上的细胞将迁移直至建立新的细胞 - 细胞接触。ibidi Culture-Insert 2 Well为伤口愈合实验提供了完整的解决方案，从样品制备到图像分析只需要几个步骤。本应用简报是使用ibidi Culture-Insert 2 Well 在24孔培养板上分析MCF-7细胞迁移实验的详细方案。并行测试了五种不同浓度的人表皮生长因子（hEGF）对迁移行为的影响并与对照条件进行比较。2 材料· 细胞：MCF-7 (ATCC: HTB-22; DSMZ: ACC115)· ibidi实验耗材:   Culture-Insert 2 Well 24, ibiTreat (ibidi, 80241)· 细胞培养表面：ibiTreat· 细胞培养基：RPMI (Sigma, R8758) + 10% FCS (Sigma, F0804)· 细胞解离溶液：Trypsin-ETDA (Sigma, 59418C)· 生长因子：human epidermal growth factor (hEGF) (Promokine, C-60170)· 无菌镊子· 倒置显微镜，最好具有自动图像采集系统和用于活细胞成像的顶部培养箱 3 实验工作流程在该实验中测试了hEGF对MCF-7细胞迁移行为的影响。使用五种不同的hEGF浓度，并将迁移行为与未用hEGF处理的对照细胞进行比较。图1实验装置：测试了五种不同的hEGF浓度（绿色）（5,10,20,30,40ng / ml）。未处理的细胞（白色）作为对照。对每种条件进行四次技术重复。 3.1 步骤1：细胞接种正确的接种浓度是一个关键参数，因为24小时后应达到汇合的单层。需要进行预实验以确定所用细胞系的最佳浓度。1. 取下附在μ-Plate底部的保护膜（图2A）。2. 像往常一样准备细胞悬液。建议包括离心步骤以去除死细胞和细胞碎片。将MCF-7细胞悬浮液调节至细胞浓度为5×10 5 细胞/ ml。3. 将70μl细胞悬浮液应用于2孔的培养插件每个孔中（图2B）。避免摇动μ-Plate，因为这会导致细胞分布不均匀。4. 将细胞在37°C和5％CO2 培养至少24小时。图2在开始细胞接种步骤（A）之前取下保护膜。将70μl细胞悬浮液填充到2孔培养插件（B）的每个孔中。3.1 第2步：划痕形成μ-Plate 24 Well的使用并行测试五种不同的hEGF浓度和对照条件。每种实验条件可以进行四次技术重复（图1).1. 在显微镜下观察培养24小时后的细胞密度。如果24小时后未达到融合细胞单层，则将μ-Plate于细胞培养箱中再培养几个小时。定期检查汇合点。2. 将生长因子添加到细胞培养基中以获得以下浓度：0,5,10,20,30和40ng / ml EGF。3. 用无菌镊子轻轻取出2孔培养插件。要移除培养插件，请抓住一个角，如图3所示。4. 用无细胞培养基或PBS洗涤细胞层以除去细胞碎片和未附着的细胞。5. 小心吸出无细胞培养基或PBS。6.用移液管将1ml细胞培养基加到24孔板的每个孔中。图3使用无菌镊子取出2孔培养插件3.1 第3步：获取显微镜图像我们建议录制延时视频，以确定时间依赖性和细胞迁移的特征。1. 将μ-Plate 24孔培养板放在显微镜上并确定所有24个孔的位置。2. 在接下来的几个小时内多次拍摄图像，开始观察过程。在24小时内每30分钟拍摄一次图像。4 结果分析显微图像以获得关于培养细胞迁移特征信息。分析细胞覆盖区域随时间的变化来确定细胞速度。图4 hEGF对MCF-7细胞迁移行为影响的比较。测试了四种不同的EGF浓度，并与对照实验进行了比较。使用Culture-Insert 2 Well 在24孔培养板上进行测试六种不同（或更多）的条件。通过比较细胞速度与对照条件的速度来分析五种不同hEGF浓度（每种重复四次）的影响。实验数据显示，与对照组相比，hEGF增加了MCF-7细胞的细胞速度。如图4所示，hEGF> 10ng / ml的浓度显示细胞速度没有进一步增加。

2020年6月18日，我司应客户邀请在深圳南山医院进行关于仪器相关技术交流培训。此次培训重点讨论了康宁细胞计数仪的相关实验方法，使用手册，以及在使用过程中应该注意的事项；对实验室仪器的一些使用，维护进行相关问答；解决客户在做实验时所遇到的一些问题，让客户正确的使用各种实验室小仪器。在康宁细胞计数仪的装机培训中，就细胞计数仪进行全面的讲解和使用演示，并且验证康宁细胞计数仪的优越性能：准确、小巧、操作方便。这款仪器能让实验室的老师们为计数细胞节省出更多的时间，并且得到想要的准确的细胞浓度来进行自己的实验研究。经过培训后，简单的操作让用户很快就学会了如何使用，并且亲自上机进行了一遍实验操作，对细胞计数仪的各方面性能非常满意。我司坚持以客户为中心，服务至上，快速响应客户需求，持续为客户创造长期价值进而成就客户. 我们坚持聚焦战略，在新产品引入, 创新服务等领域持续进行投入，以客户需求和前沿技术驱动公司发展, 致力于成为科研仪器领域优质的供应商,服务商和发展商。对细胞计数器感兴趣的老师，欢迎咨询我们---康宁corning仪器南区总代理---广州科适特科学仪器有限公司

细胞迁移在许多复杂的生理和病理过程中起着重要作用。伤口愈合测定是研究体外细胞迁移的简单方法。该测定基于以下观察：当在汇合细胞单层上产生人工间隙时，所产生的间隙边缘上的细胞将迁移直至建立新的细胞。ibidi Culture-Insert 系列为伤口愈合实验提供了完整的解决方案，从样品制备到图像分析只需要几个步骤。本应用简报是使用 ibidiCulture-Insert 2 Well 分析 MCF-7 细胞迁移行为的详细方案。图 1   使用 ibidi Culture-Insert 2 Well 进行伤口愈合测定的实验工作流程ibidi Culture-Insert 2 Well 放置在细胞培养表面上，提供两个细胞培养容器，每个容器由 500μm 壁隔开。在两个储库中填充细胞悬浮液仅允许细胞在指定区域生长。移除培养插入物 2 在适当的细胞附着后，产生大约 500μm 的无细胞间隙。显微镜用于评估伤口愈合过程。根据您感兴趣的焦点，可以通过使用视频显微镜或通过在不同时间点观察图像来完成。测量细胞覆盖区域的变化允许量化伤口闭合的速度并提供细胞迁移特征。实验工作流程也可以应用于 Culture-Insert 3 Well 和 Culture-Insert 4 Well。他们的区别是更多的孔和相应的更高数量的无细胞间隙。1.  材料细胞：                              MCF-7 (ATCC: HTB-22; DSMZ:ACC115)同一实验软件:                   2 孔插件放在 35 毫米的培养皿中，高壁（ibidi，80206）细胞培养表面：                 ibidi ibitreat细胞培养基：                    RPMI (西格玛，R8758) = 10% FCS (西格玛,  F0804)细胞解离溶液：                 胰蛋白酶-ETDA（Sigma，59418C）无菌镊子倒置显微镜，最好具有自动图像采集系统和用于活细胞成像的阶段顶部培养箱实验工作流程步骤 1：细胞接种为了建立可靠的数据采集系统，您必须在开始实验之前定义实验参数。这包括例如选择正确的细胞接种密度。我们建议使用 24 小时后产生 100％ 光学汇合细胞层的密度。1. 像往常一样准备细胞悬液。建议包括离心步骤以去除死细胞和细胞碎片。将细胞悬液调节至合适细胞浓度。在 24 小时后获得 3×105 细胞/ ml以获得汇合的细胞层。2. 将 70μl 细胞悬浮液应用于 Culture-Insert2 孔的每个孔中。避免摇动 μ-Dish，因为这会导致细胞分布不均匀。3. 将细胞在 37°C 和 5％CO2 下孵育至少 24 小时图 2   在 ibidi Culture-Insert 2 Well 中接种细胞第 2 步：间隙形成汇合细胞层是开始该测定的先决条件。去除 Culture-Insert 2 孔后加入新鲜培养基。如有必要，补充培养基中的抑制或增强物质，以评估其对细胞迁移行为的影响。1. 在显微镜下 24 小时后检查细胞密度。如果在 24 小时后没有达到汇合的细胞层，则将 μ-Dish 再次置于细胞培养箱中 12-24 小时，定期检查汇合点。2. 用无菌镊子轻轻取出 Culture-Insert 2 孔。如图 3 所示，删除 Insert 一角图 3   使用无菌镊子去除 ibidi Culture-Insert 2 孔3. 移除插入后，检查您的细胞层是否仍附着在 μ-Dish 的表面上。4. 用无细胞培养基或 PBS 清洗细胞层，去除细胞碎片和非附着细胞。5. 使用推荐体积为 2 ml 的无细胞培养基填充 μ-Dish图 4   由 ibidi Culture-Insert 2 Well 创建的无细胞间隙第 3 步：获取显微镜图片我们建议录制延时视频，以确定时间依赖性和细胞迁移的特征。1. 将培养皿放在显微镜上并移动它直到你有间隙，并在图像中捕获两个细胞前端。使用 4x / 5x 或 10x 物镜。伤口区域的方向并不重要，但需要水平或垂直。2. 在接下来的几个小时内多次拍摄图像，开始观察过程。3. 在 ibiTreat 表面上培养的 MCF-7 细胞的时间推移测量进行 20 小时，时间间隔为 30 分钟。图 5   使用 MCF-7 细胞的迁移测定的时间流逝测量（比例尺：200μm）步骤 4：使用 ACAS 和数据解释进行定量图像分析必须分析显微照片以获得关于培养细胞的迁移特征的信息。这可以通过使用图像处理软件手动完成，也可以使用自动图像分析完成自动细胞分析系统（ACAS）由 ibidi 提供。使用 ACAS 分析此处显示的示例数据。自动图像分析检测细胞覆盖区域。相对于时间绘制细胞覆盖区域显示了间隙闭合的过程。线性相可用于表征迁移（=伤口闭合的速度）。线性相的斜率显示平均刮擦闭合速度为 0.0184×106μm2/ 小时（= 0.44×106μm2/ 天）。图 6   ACAS 伤口愈合实验的定量图像分析

2020年五一劳动节不期而至，为致一直奋斗在一线的科研人员，广州科适特科学仪器有限公司隆重推出买就送活动，即日起，凡购买康宁细胞计数仪、康宁磁力搅拌器、离心机、加热板、移液器等相关产品每单累计达一定金额，免费赠送320G移动硬盘一只或小米10000mA移动充电宝一个！活动规则： 1.赠送条件适用于如下分析产品：康宁细胞计数仪；康宁品牌数字显示加热板; 康宁品牌数字显示搅拌器；康宁品牌数字显示搅拌加热板，多位点可控搅拌器；康宁各通道规格移液器。2.满足如下条件的每单可赠送320G移动硬盘一只。（同一用户单位，订单折扣后总额 ≥ 5000元 ）；3.满足如下条件的每单可赠送小米10000mA移动充电宝一只。（同一用户单位，订单折扣后总额 ≥ 3000元 ）；4.活动截止日期：2020年6月 1日。（解释权归广州科适特科学仪器有限公司所有）详情咨询还有更多精美礼品！快速精确的细胞计数长期以来，选择手动还是自动细胞计数困扰了大多数的科研工作者。因为手动细胞计数准确性高，但耗时且易受操作者主观影响；自动细胞计数仪则更快速且客观，但计数所需的耗材成本却较贵。 而Corning细胞计数仪结合了细胞计数自动和手动的优点，可进行快速精确的细胞计数，既有手动的准确性，又有自动的快捷性，同时细胞计数所需的耗材成本低。主要特点如下：快速——在线图像处理系统。精确——基于云计算的机器学习算法。低成本——常规玻璃材质细胞计数板，可重复使用。计数只需3秒Corning细胞计数仪可在三秒内完成单次细胞计数*，相较大多数的自动细胞计数仪更快。传统的细胞计数是基于图像分析算法在一个相对较小的计算平台上完成。而Corning细胞计数仪则采用CytoSMART™云计算应用软件，通过Microsoft Azure云端计算平台进行图像处理。这种云计算系统意味着更快更准确的图像分析能力。准确率高Corning细胞计数仪使用先进的图像分析处理软件，应用复杂的深度神经网络算法，使细胞计数的准确性达到最大。若添加台盼蓝，仪器便可在计数时区分活细胞和死细胞，从而计算出细胞活力。该软件还能对含 有细胞簇的样本进行分析处理，所以对高浓度的细胞样本（高达1 x 10*7 个细胞/ mL）Corning细胞计数仪亦能进行精确计数。计数成本低每台Corning细胞计数仪会提供一片可重复使用的细胞计数板，很大程度的节约了客户一次性耗材的投入成本。同时客户也可使用相应的血球计数板结合Corning细胞计数仪进行细胞计数。操作简便Corning细胞计数仪操作十分简便，无需花费过多的时间进行 人员操作培训。首先，将仪器连接到您的计算机或平板电脑，启动CytoSMART™云应用程序。然后，将装有样本的细胞计数板放置在仪器上，调整焦距，点击“计数”按钮，即可进行细胞计数，可对8次计数结果进行同步分析。随时随地查看数据传统自动细胞计数仪瓶颈：1.机载的计算机系能较小，报告生成时间过长。2.屏幕分辨率低，不能很好的分辨出活细胞或死细胞。3.只能通过U盘将数据导出 Corning细胞计数仪很好的解决了以上难题。Corning细胞计数仪可在计算机上快速生成测试报告，包含计数样本的细胞浓度和活力，以及标注活细胞和死细胞的样本图像（若计数时添加台盼蓝），并将报告发送至CytoSMART™云端，使您可以随时随地在智能手机，平板电脑或计算机上查阅生成的图像和计数结果。所有测试生成的报告都将保存在CytoSMART™ 云端，因此您可以调阅相联实验的报告分析细胞培养的状态和质量。

2019年11月21日，我司应客户邀请在汕头大学医学院附属第一医院进行关于仪器相关技术交流培训。此次活动我们和康宁厂家的产品专家---施工，一同前往汕头大学医学院附属第一附属医院进行技术交流。我司坚持以客户为中心，服务至上，快速响应客户需求，持续为客户创造长期价值进而成就客户. 我们坚持聚焦战略，在新产品引入, 创新服务等领域持续进行投入，以客户需求和前沿技术驱动公司发展, 致力于成为科研仪器领域优质的供应商,服务商和发展商。此次培训重点讨论了康宁细胞计数仪的相关实验方法，使用手册，以及在使用过程中应该注意的事项；对实验室仪器的一些使用，维护进行相关问答；解决客户在做实验时所遇到的一些问题，让客户正确的使用各种实验室小仪器。一天的时间里，我司工程师和康宁公司产品专家为实验室学生和老师解决了许多仪器上使用的问题，比如关于计数仪、移液器、离心机、摇床等仪器的一些参数校准和使用说明，当然也有关于某些实验的交流。施工在实验室里亲自演示各种实验仪器，重点的就细胞计数仪进行全面的讲解和使用演示，以验证康宁细胞计数仪的优越性能，准确、小巧、操作方便。这款仪器能让实验室的老师们计数细胞节省出更多的时间，并且得到想要的准确的细胞浓度来进行自己的实验研究。对细胞计数器感兴趣的老师，欢迎咨询我们---康宁corning仪器总代理---广州科适特科学仪器有限公司。康宁corning细胞计数仪介绍快速精确的细胞计数长期以来，选择手动还是自动细胞计数困扰了大多数的科研工作者。因为手动细胞计数准确性高，但耗时且易受操作者主观影响；自动细胞计数仪则更快速且客观，但计数所需的耗材成本却较贵。 而Corning细胞计数仪结合了细胞计数自动和手动的优点，可进行快速精确的细胞计数，既有手动的准确性，又有自动的快捷性，同时细胞计数所需的耗材成本低。主要特点如下：快速——在线图像处理系统。精确——基于云计算的机器学习算法。低成本——常规玻璃材质细胞计数板，可重复使用。计数只需3秒Corning细胞计数仪可在三秒内完成单次细胞计数*，相较大多数的自动细胞计数仪更快。传统的细胞计数是基于图像分析算法在一个相对较小的计算平台上完成。而Corning细胞计数仪则采用CytoSMART™云计算应用软件，通过Microsoft Azure云端计算平台进行图像处理。这种云计算系统意味着更快更准确的图像分析能力。准确率高Corning细胞计数仪使用先进的图像分析处理软件，应用复杂的深度神经网络算法，使细胞计数的准确性达到最大。如图1 所示，若添加台盼蓝，仪器便可在计数时区分活细胞和死细胞，从而计算出细胞活力。同时如图2 所示，该软件还能对含 有细胞簇的样本进行分析处理，所以对高浓度的细胞样本（高达1 x 10*7 个细胞/ mL）Corning细胞计数仪亦能进行精确计数。计数成本低每台Corning细胞计数仪会提供一片可重复使用的细胞计数板，很大程度的节约了客户一次性耗材的投入成本。同时客户也可使用相应的血球计数板结合Corning细胞计数仪进行细胞计数。操作简便Corning细胞计数仪操作十分简便，无需花费过多的时间进行 人员操作培训。首先，将仪器连接到您的计算机或平板电脑，启动CytoSMART™云应用程序。然后，将装有样本的细胞计数板放置在仪器上，调整焦距，点击“计数”按钮，即可进行细胞计数，可对8次计数结果进行同步分析。随时随地查看数据传统自动细胞计数仪瓶颈：1.机载的计算机系能较小，报告生成时间过长。2.屏幕分辨率低，不能很好的分辨出活细胞或死细胞。3.只能通过U盘将数据导出 Corning细胞计数仪很好的解决了以上难题。Corning细胞计数仪可在计算机上快速生成测试报告，包含计数样本的细胞浓度和活力，以及标注活细胞和死细胞的样本图像（若计数时添加台盼蓝），并将报告发送至CytoSMART™云端，使您可以随时随地在智能手机，平板电脑或计算机上查阅生成的图像和计数结果。所有测试生成的报告都将保存在CytoSMART™ 云端，因此您可以调阅相联实验的报告分析细胞培养的状态和质量。如需申请细胞计数仪样机试用，欢迎联系我们！公司：广州科适特科学仪器有限公司电话：020-38102730邮箱：sales@kosterscience.com

  2020年1月7号第四届康宁小仪器产品培训会在广州举行，广州科适特作为康宁南区小仪器代理，我们邀请到康宁全球产品经理和各地经销商伙伴一起培训和交流，让我们享受了一场仪器讲解盛宴。

2019年第十二届本次会议由中国科学院广州生物医药与健康研究院和广州再生医学与健康广东省实验室共同承办，会议将于11月19-20日正式开会。会议特别邀请了美国医学科学院院士、表观遗传与发育生物学专家Andrew Feinberg教授，美国科学院和美国医学科学院院士Stephen Weiss教授，欧洲科学院院士及EMBO会士Thomas Graf教授，英国医学科学院院士TonyGreen、Roger Barker教授作为KeynoteSpeaker在会上发言；还邀请了多位国内知名专家，包括中科院生物化学与细胞生物学研究所景乃禾、李劲松研究员，中山大学孙逸仙纪念医院副院长宋尔卫教授等。此次会议将成为国内干细胞与再生医学研究领域的又一次盛会。在此次会议中，科适特作为被邀请参展商，，与各大专家、学者、科研工作者一起进行学术交流与分享。 展会上，科适特为展会提供ibidi功能实验技术文章摘要，引来了各大科研工作者的强势围观，工程师为大家进行了新品的讲解以及等一系列介绍。同时科适特也是中科院、医科院等高等研究院所，以及各大大专院校实验室常见的实验室仪器和耗材合作服务商。

美国康宁公司最近几年一直致力于发展康宁品牌的常规实验室仪器,以便给客户提供更全面的产品, 目前已经形成了包括各种系列的移液器,温控摇床,各种常规离心机系列, 磁力搅拌加热器，细胞计数器系列的完善的产品线,最近又发布了一款全新的成员，最近美国康宁公司发布了全新的EliteTouch和Axypet®  Pro移液器产品。康宁Lambda EliteTouch移液器经过精心设计，可提供最高水平的舒适性，准确性和精确度。轻巧的结构，轮廓处理的手柄和4位数的计数器旨在确保舒适的移液。所有移液器都具有平滑的柱塞运动和极低的移液力，以减少手腕疲劳和疲劳（RSI）。彩色按钮（包括在内）可以帮助识别用户或应用程序的样品安全性并降低交叉污染的风险。主要有以下特点：?符合人体工程学的手柄设计非常适合左右手?方便的单手音量设置和自动锁定系统可防止工作期间意外的音量变化?4位计数器提供更高的精度，并且始终可以完美地定位?单通道移液器与非常窄的管子兼容?可完全高压灭菌，抗紫外线，可防止污染?多通道轴单独缩回，以实现完美的尖端装载和更轻松的尖端弹出?独特的弹射杆系统可轻松弹出尖端?简单的实验室校准可帮助您快速将移液器调整为各种液体类型?经过单独测试并提供质量证书订购信息Corning®Lambda™EliteTouch™移液器单通道     体积范围（μL）准确性（％） 精度（％） 规格（μL）   数量/ CS6050      0.1 - 2        ±40.0至±1.5    ≤12.0至≤0.7    10        16051      0.5 - 10        ±4.0至±1.0    ≤2.8至≤0.4       10          16052      2 - 20        ±3.5至±0.8    ≤1.5至≤0.3         200          16053      5 - 50        ±3.5至±0.8    ≤1.3至≤0.3         200          16054      10 - 100    ±3.0至±0.8    ≤1.0至≤0.2         200          16055      20 - 200        ±2.0至±0.6    ≤0.7至≤0.2     200          16056      100 - 1000 ±2.5至±0.6    ≤0.6至≤0.2       1000          18通道6057      0.5 - 10       ±10.0至±2.0           ≤8.0至≤1.2               10          16058      5 - 50       ±4.0至±1.6    ≤2.5至≤0.6    200          16059      20 - 200       ±3.0至±1.0    ≤1.5至≤0.6    200/300          16060      30 - 300       ±3.0至±1.0    ≤1.5至≤0.6    300          112通道6061    0.5 - 10       ±10.0至±2.0    ≤8.0至≤1.2                10          16062    5 - 50       ±4.0至±1.6    ≤2.5至≤0.6    200    16063    20 - 200       ±3.0至±1.0    ≤1.5至≤0.6    200/300    16064    30 - 300       ±3.0至±1.0    ≤1.5至≤0.6    300    1 Corning Lambda EliteTouch入门套件 6065    Corning Lambda EliteTouch入门套件包括：4个单通道移液器：0.5至10μL（货号6051），2至20μL（货号6052），20至200μL（货号6055），100至1000μL（货号6056）;通用线性支架，用于四个单通道移液（货号6066）;Corning DeckWorks移液器吸头：10μL（货号4135），200μL（货号4138），1000μL（货号4140）;3个彩色按钮（4套）配件4088    移液器代表一个单通道，8通道或12通道移液器6066    用于四个移液器的通用线性支架，橙色（四个单通道，最多两个8通道或12通道移液器）6067    通用线性支架，用于四个移液器，透明（四个单通道，最多两个8通道或12通道移液器）6068    六个移液器的通用线性支架，透明（六个单通道，最多三个8通道或12通道移液器）

生物学研究中的LED：从显微成像到光遗传学由于LED被引入生物科学研究的显微镜照明，使研究小组和影像实验室有信心将其范围和潜力完全取代金属卤化物光源，合适的HBO弧光灯替代品一直是一个挑战。但随着最近推出的全光谱照明装置和更先进的系统，LED照明正在成为新的标准。显微镜长期以来一直在生物科学研究中占据重要位置，可追溯到第一次观察活细胞包括使用LED的技术已经开发 - 并且将继续 - 以满足研究人员新的和不断变化的需求。生物科学显微镜生物科学微拷贝中使用的技术可分为两个主要阵营：透射光，明视场显微镜，用于可视化染色的组织学样本或采用对比度方法，如相位对比度，微分干涉对比度和浮雕对比度;反射光荧光显微镜  图1a，1b。明场显微镜图像描绘了染色载玻片（a）和迁移室（b）中细胞的相衬图像。为了筛选染色组织（图1a）或对比技术，如相（图1b）或DIC，典型的研究实验室将使用配备12 V白炽钨卤灯（100 W）的显微镜设置为9 V，色温约为3200 K.虽然这是一种廉价而有效的设置，但LED光源正成为主要显微镜制造商的默认透射光源。LED具有与日光滤光器类似的显色指数，可提供出色的灵活性并集成到硬件和软件中。LED照明已经成为明场显微镜的一种选择，但它在荧光显微镜领域却是如此已经产生了最大的影响。直到最近十年，高压汞蒸气电弧放电灯才是氙气标准配置工作的替代品。大约在这个时候，LED成为荧光显微镜的一个选择。LED克服了很多与弧光灯相关的问题，包括灯泡的重复更换和随后的对准，重启时间，启动后强度的波动以及随时间的强度下降。克服汞和氙系统失效的能力并非如此最初由LED制造商实现。对于需要单色或双色系统的研究人员而言，LED立即适用。然而，主流市场需要的是适合标准范围的荧光团（DAPI，FITC，TRITC，Cy5）的光源，以及使用Cy5.5，Cy7，CFP，YFP等的灵活性。终端LED系统有四个“固定”通道，确实找到了自己的位置，但没有达到预期的效果。一般光源的作用由金属卤化物光源填充。卤化物灯泡持续了2000小时，重要的是它们比四通道LED装置提供更大的灵活性。卤化物源也有一些缺点。灯泡在显微镜开启的持续时间内点亮，而LED仅在短暂的采集期间点亮。一些卤化物光源的波动系数可以达到10%。图2a，2b。与汞或卤化物光源相比，基于LED的光源的强度具有更好的寿命和强度稳定性（a）。光谱范围涵盖大多数技术中使用的大多数荧光团的峰值激发卤化物光源本质上将UV和IR投射到光导上。由于UV和IR的降解，卤化物系统中的光导管需要在一段时间后更换。但LED对光导的危害较小，消除了任何退化。为了产生影响，LED制造商需要一种能够在365到700纳米及更长时间内提供光谱照射的系统。通过组合多个波长生产有效的白光源，可直接替代用户现有的显微镜系统和滤光片立方体。这些还提供了额外的优势0到100％的强度调整，随时间稳定的强度（图2a和2b），即时开/关和集成到软件中的机会。白光LED照明系统应被视为金属卤化物和汞的经济有效替代品。如上所述，主要制造商最初为更高级的例程构建了四色LED光源，包括多色，延时成像。与传统光源相比，它们具有许多优点，例如强度稳定性和速度。在带有内部快门的标准延时显微镜系统中，快门将被打开，相机曝光被接合，然后每张照片的快门关闭。这仍然会使样品暴露在来自弧光灯的光下，使相机获取时间增加一倍，并可能导致光毒性和实验失败。在实验中，始终建议从样本中的多个站点拍摄图像。这确保了图像作为整体代表样本。在某些情况下，很难访问统计所需的点数实验方案中循环时间内的显着性。即使在简单的情况下，研究人员使用电动显微镜并自动更换旋转木马中的过滤器，颜色之间的切换时间可以在500到800毫秒之间，慢快门时间为200毫秒。为克服这一缺陷，一些显微镜制造商采用先进的弧光照明系统快速内部快门（1 ms），以及相邻位置之间50 ms延迟的快速滤光轮和衰减器。但是，连续激活这些组件仍会增加时间开销并导致图像捕获速度变慢。为了加快成像速度，一些公司采用实时控制器来并行更换组件;这些系统增加的复杂性和成本使它们超出了标准研究实验室的范围。最初的四通道LED单元获得了成功发光二极管平面是几微米，使得这样小的焦平面易受焦点漂移的影响，这通常是由热膨胀和收缩引起的。为了克服热漂移的挑战，有两种常见的方法：基于软件的算法和基于硬件的z校正。只要细胞被限制在相似的图像平面，软件程序就可以充分地保持焦点，但是可以被自由浮动的非粘附细胞混淆。在硬件漂移校正系统中，光沿物镜向后反射到检测器，实时监测并传递到显微镜Z驱动器中。无论细胞环境如何，这都将保持所需的焦点位置，并且对于诸如粘着斑形成或新的超分辨率技术（即PALM，STORM和GSD）的许多研究项目而言是至关重要的。使用LED照明的先进技术有一系列新兴技术传统上采用激光照射样品，但现在转向LED。一个例子是结构照明显微镜（SIM），一种宽视场技术，可以将衍射极限以外的横向分辨率提高一倍。这是通过将一系列图案顺序投影到样品上并捕获图像，然后进行后处理来实现的。用于产生图案的快速LED颜色切换和DMD（可变形镜装置）意味着与传统的结构化图案生成的机械方法相比可以实现高速。直到最近，旋转盘共焦显微镜系统的特点是激光器 在这些情况下取得了一些成功没有必要将硬件快门，衰减器轮或滤光轮用于配备多波段二向色镜的显微镜。单个LED可以通过TTL触发在例如，当在装有弧光灯的电动显微镜中以50ms的相机曝光时间成像三种颜色时，每个位置的时间是2到3秒，取决于组件的速度。对于配备多波段二向色的LED和显微镜，循环时间为151 ms。虽然高速系统速度更快，但LED可以显着超越它们。吸收的主要障碍是四线系统的相对不灵活性。现在，最新一代LED系统克服了这些问题，因为它们配备了多达16个波长（图3a和3b），跨越365nm到770nm，能够触发适合市场上主要四频滤波器立方体的LED组合。它们现在已成为普通高速，延时成像以及下面提到的一些先进技术的照明系统。焦点漂移校正LED不仅用于在延时显微镜中照射样品。它们也用于大多数焦点漂移校正系统（来自制造商等）如徕卡，尼康和蔡司），这是用于保持焦点的反馈设备。在高倍率下，焦点对准由于通过系统的光损失而发光。然而，现在LED更强大，它们被用在一些较便宜的系统中。对于允许更多光传输的光盘，LED特别成功。LED已成为更便宜的替代方案的其他方法是TIRF显微镜，光动力疗法（其中光用于减少肿瘤），FRET（福斯特共振能量转移）用于确定蛋白质 - 蛋白质相互作用和钙成像。与最快的基于短弧光栅的系统相比，用于钙成像的LED已经变得普遍，因为其亚毫秒开关和更高的稳定性。以前，比例图像可以10 fps成像。LED的速度增加到100 fps。光遗传学在神经科学中，长期以来一直希望选择性地靶向一种细胞类型进行研究而不影响样品中的其他细胞（图4）。部分地，这是在15年前通过使用Cre-Lox方法标记细胞来实现的，所述细胞瞬时表达已知对该细胞类型具有选择性的基因（图5）。然而，即使可以标记细胞类型，从单个细胞记录的方法在技术上具有挑战性或可能对组织有害，因此并不总是合适的。随着2005年光遗传学的发展，克服了其中一些挑战。光遗传学将动作电位的光学调制与选择性靶标的遗传方法结合起来。在异质群体中的单细胞类型，例如在脑组织中。它基于细菌视蛋白的修饰，细胞视蛋白是单个单元，光活化离子泵，其通过病毒载体选择性地递送到靶细胞中。根据所表达的离子通道，将聚焦光照射到细胞上将选择性地激活或抑制。直到过去几年，激光仍然被认为是光学刺激，因为它们的光谱线宽窄，组织中的分散度低于非相干光源。然而，LED的FWHM较窄，最近功率/光输出增加（光纤末端100 mW / mm2，近似LED总功率的1％和LED的快速时间切换，“就光遗传学应用而言，LED在几乎所有方面都超过了激光器，”OpenOptogenet-ics表示（http://openoptogenetics.org/). 随着光遗传学协议变得更加标准化，并且在新研究实验室的能力范围内，LED光源也是如此对研究组来说越来越有吸引力的选择。LED始终具有需要一个或两个波长的位置，其中不需要超过四种颜色的灵活性，或者速度是关键因素。然而，随着最近推出全光谱照明装置和更先进的系统，具有多达16个波长和快速触发，LED照明已成为新的标准。

美国康宁公司最近几年一直致力于发展康宁品牌的常规实验室仪器,以便给客户提供更全面的产品, 目前已经形成了包括各种系列的移液器,温控摇床,各种常规离心机系列, 磁力搅拌加热器系列的完善的产品线,最近又发布了一款全新的成员，用于细胞房常规使用的新型产品，快速细胞计数器产品。多年来，手动和自动细胞计数之间的选择一直很困难。一方面，手动细胞计数是准确的，但是耗时且非常依赖于用户经验。自动细胞计数更快，但一次性计数幻灯片的成本可能是一个问题。一个艰难的选择，但现在康宁提供了一个解决方案。新的康宁细胞计数器是第一个两全其美的自动细胞计数器。它有如下特点：?速度快 - 由于其独特的在线图像处理?数据准确 - 得益于其基于云端的机器学习算法。?低成本 - 使用普通可重复使用的玻璃血细胞计数器。不需要消耗品。三秒钟的细胞计数康宁细胞计数器可以在不到三秒的时间内完成单个细胞计数。这比大多数自动细胞计数系统快得多。对于传统系统，图像分析算法必须在相对较小的机身自带的计算机上处理。使用CytoSMART™云应用程序的康宁细胞计数器可以处理Microsoft Azure云计算平台中的图像。这种云计算能力意味着它可以比任何现有的机载处理器更快地分析图像。更高的准确性康宁细胞计数器使用复杂的深度神经网络进行细胞检测。这种先进的图像分析软件可实现最佳精度。当添加Trypan蓝（图1）时，系统还可以检测细胞活力。康宁细胞计数器可以检测细胞簇，从而获得“高浓度样品”的准确细胞计数（高达1 x 107细胞/ mL;图2）。 图1.通过图像分析算法检测用Trypan蓝染色的死细胞。红色圆圈代表死细胞，绿色圆圈代表活细胞。图2.图像分析算法能够检测细胞簇。红色圆圈代表死细胞，绿色圆圈代表活细胞。*使用73 Mbps下载速度和20 Mbps上传速度进行测量。实际速度可能因互联网连接而异。随时随地访问数据.低成本，如手动计数该细胞计数器与提供的计数板或客户提供的血细胞计数器配合使用，使用户可以享受自动细胞计数的好处，而无需一次性载玻片的成本。使用方便Cell Counter使用简便。只需将Cell Counter连接到您的计算机或平板电脑，即可启动CytoSMART Cloud App。将装载的计数室放在舞台上。专注于您的单元格，然后按“计数”按钮。细胞计数器的简单性使得在您的实验室工作的任何人都可以轻松计数细胞而无需进行大量培训。 图3.使用康宁细胞计数器（n = 3）手动计数不同浓度的C6细胞。在两种情况下，计数与理论浓度很好地对应（误差条代表标准偏差）。 康宁®细胞计数器立即生成一份报告，其中包含计数的细胞浓度和活力，以及计数样本的图像，并清楚地显示计数的细胞（活的和死的）。这是对传统自动计数系统的改进，其中报告功能受到三个因素的阻碍：1.    板载计算机非常小，生成报告需要很长时间。2.    屏幕界面质量很低，很难清楚地看到什么被计为活细胞和死细胞。3.    数据只能使用USB记忆棒导出，这可能会很不方便。使用Cell Counter，报告会立即显示在您的计算机上并发送到CytoSMART™Cloud App，使您可以在智能手机，平板电脑或计算机上查找分析的图像和细胞计数。由于所有数据都保存在CytoSMART Cloud App中，因此您可以从一个实验到下一个实验深入了解细胞培养的健康和质量。图4.按Count按钮开始细胞计数。图5 .查看CytoSMART Cloud App上的数据。产品规格计数范围    5×104至1.0×107细胞/ mL计数范围    10至70微米测量时间    兼容性    可重复使用和一次性计数室样本量    10 μL重量       1.0千克视野        2.0 x 1.5毫米 放大       200X图像分辨率    2048 x 1536导出的格式    PNG光源            LED发光二极管相机            500万像素的CMOS单位尺寸    122 x 122 x 125（长x宽x高）工作环境    5°C至40°C，湿度20％至95％ 产品信息货号                    描述                                       数量/ CS6749                  康宁细胞计数器                          1480200               计数板                                      1 

意大利萨伦托大学Guerra 等人利用8孔ibiTreat处理的多孔腔室载玻片（货号80826）接种C13细胞进行活细胞成像,研究 RAB7A 在Cisplatin耐药中的作用: 通过抗性营养损害和细胞外水泡分泌物研究Rab7a 蛋白表达的调节，文献地址“ https://www.mdpi.com/2072-6694/11/1/52/htm”,了解更多关于ibid多孔腔室载玻片的信息:http://www.kosterscience.com/goods.php?id=591

荧光显微镜中的LED光源具有便利与绿色环保的优点。这些LED能够保持研究成分的有效性，特别是对成像和敏感样品的保存。LED技术在我们的生活中发挥越来越重要的作用。在过去的50年里，该技术的应用已从简单的电子产品指示灯扩展到替代白炽灯以节约大量能源。LED具有高强度、使用寿命长、可控制性及光谱输出稳定的特点，因此发展出了一些不为大家所熟知的专业照明应用。图1. 荧光显微镜的基本构造将荧光显微镜中的灯泡替换成LED已大大降低了其运行成本。这种技术在生命科学中广泛用于单细胞或多细胞生物标本的研究。该研究涉及到使用光学显微镜（图1）激发出特定波长的光。通过一种被称作为斯托克斯（Stokes）位移的过程，例如荧光光谱和拉曼光谱，重新激发出更长波长的光。斯托克斯位移即相同电子跃迁吸收和发射光谱带顶位置之间波长或频率单元的差异。使用不同的荧光团来标记样品，即在不同的区域使用不用的荧光颜色，则可形成高对比度的多色照片（图2）。图2. 使用CoolLED公司pE-300white拍摄的带有荧光标记的皮肤图像满足光谱需求一些研究中需要使用活细胞成像，另一些需要使用被化学试剂固定于某一特定生命时期的细胞。不论何种情况，用于照明样本的光源的类型和设计对显微镜所需的硬件以及所记录图像的质量和有效性都有极大的影响。早期使用LED系统的一个重要原因在于使用者及实验室负责人的便利性。最常见的灯泡，例如100W高压汞灯，其寿命很短，约为300小时。使用者通常会在记事本上记录打开灯泡的时间，因为若使用灯泡的时间过长，则会增加爆炸的风险。然而，LED产品的使用寿命长达数万小时。灯泡的使用需要预热与冷却的时间，且在一整天内都要打开。而LED光源可以在需要的时候以电子方式打开或关闭，即在观察样本或拍照期间打开光源，不使用期间可以关闭。尽管使用LED替代灯泡的优点很多，但由于存在高强度及光谱范围这两个主要问题，LED的应用发展停滞不前。由于LED光源的复杂性和成本，其发出的光不是宽光谱而是包含多达六个离散波长的高斯（Gaussian）光谱，并且具有约10nm至40nm的半峰宽（FWHM）。因此光源设计人员需要使用多个LED来满足研究人员的光谱需求，这将产生新的光电和机械设计的复杂性，且这些问题对于传统灯泡光源来说是不存在的。研究人员需要捕捉和校准LED芯片的朗伯发射，然后使用二色镜组合出多种颜色。朗伯定律表明，从漫反射表面观察到的发光强度与入射光方向和表面法线之间的角度θ的余弦成正比。一种新颖且已获得专利的方法采用了波长分组概念，即具有相近光谱的LED波长为一个用户可选择的通道。根据对高速应用的需求，合并具有相近光谱的四个LED。关键是要认识到，某些波长接近的分组，在相同的样本中很少会用到。如今，研究人员可以使用包含高达16个波长的LED光源，使用这种方法能够改善LED的强度、谱段范围，也能够降低成本。目前可以使用的LED芯片的功率与100W汞灯泡中等离子弧产生的辐射相差甚远。灯泡能够发射极宽谱段范围的能量，但在给定的约20nm的谱段范围内，LED更有优势甚至超过了汞灯泡在360nm至800nm的大部分区域。LED的过度使用在荧光应用领域非常常见，这使热量管理变得极为重要。冷却技术包括珀尔帖（Peltier）冷却以及将未封装的LED芯片放置在大型铜散热片上。长期以来，光谱的绿光区域与灯泡相比最弱，这部分区域在固态照明中被称为“绿色空白”，也是LED光谱中极其微弱的区域。研究人员可以通过采用多种形式的荧光材料来解决这一问题。一种由飞利浦公司（Philips）取得专利权的方法使用由一系列明亮蓝色LED组成的荧光棒。与单个LED相比，在常见的荧光显微镜上使用这种方法会增加成本且实用不方便。对蓝色LED芯片功率的最新研究提出了更为简单的解决方案，即在LED上直接放置荧光剂，且只选择能够提供最大绿色光谱区域的荧光剂。图3中展现了由明亮绿色LED通过斯托克斯位移激发的红色光。图3. 使用荧光标记的牛肺动脉内皮细胞。蓝色区域为细胞核，绿色区域为微管蛋白，红色区域为肌动蛋白。图片来源：Jordi Recasens/Izasa Scientific。成像增强显微镜的最终目标是获取优质的图像。然而，由于光毒性的影响，样品观测对实验来说至关重要。通过提升LED的固有属性可以同时改善图像信噪比以及成像的反作用。金属卤素灯引入后，充液灯开始广泛使用，消除了为提高照明均匀度而校准灯泡的需要。这种均匀度的改善为制造性能良好的光扰频器起到了指导性作用。LED由于其固态特性可以直接与显微镜连接，无需重新校准，并采用柯勒（K?hler）照明——一种现代科学光学显微镜样品照明技术。利用这种方法，光源中的光学器件可将LED成像到显微镜物镜的后孔径上。这种反向工作的物镜能够在样品的完整视野内均匀地分散光线。然而一些LED仍与导光板一起使用，以减轻显微镜的重量和振动。具有良好的阻挡和反射区域的滤光片能够改善图像的信噪比。在用于普通4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光（DAPI）成像（图4）的激发和发射滤光片中，激发滤光片需要阻挡汞（Hg）光谱大部分蓝色区域的能量。图4表示使用示例性的激发和发射滤光片覆盖385nm LED的光谱以及DAPI吸收和发射的Hg光谱。相比之下，用于激发DAPI的LED在相应的激发带上产生了极低的能量，包括在相对较弱的样品成像的蓝色区域。对比结果为，使用LED作为光源能够获得更好的图像信噪比，因为LED光源能够减低样品的背景水平。爱丁堡大学的Sandrine Prost及其同事们的研究表明采用波长可控制的独立LED光源，其信噪比的提高超过了灯泡系统，甚至超过了其他一些白色宽光源LED。由于细胞不能暴露在高强度光下，因此观测样品也会影响到观测结果。观测样品导致的反作用包括光漂白和光毒性，导致随着时间推移信号减弱和活细胞的死亡或由照明引起的操作不当。减少样品的照明时间对降低这些反作用的影响至关重要。传统灯泡光源通过机械快门来控制曝光，这种方法有时会造成长时间的延迟，导致样品在曝光时被不必要地照亮。使用自动控制的LED光源则可以解决这个问题。LED的直接TTL控制通过提供以微秒计算时间的开/关来完善USB通信方式。许多高端摄像机在相机曝光时使用TTL输出信号，该信号能够与相机曝光精确配合，直接馈送至LED光源控制开关。由于两至三个荧光标记的顺序成像很常见，所以最新的LED将波长的阶跃序列编程到光源中，随着每个照相机的顺序进行曝光。对于这种电路连接方式，不需要实时操控机械控制的快门以及电脑控制模块，因而减少了不必要地样品曝光。最近，麦吉尔大学的Claire Brown及其同事们的研究表明，通过控制样品曝光量，光漂白及光毒性的影响将大大降低。一个荧光原子吸收一个光子后将进入受激单能态，理论上将释放自身大部分的能量，激发出一个更长波长的新光子。然而，荧光原子也有可能进入有毒的三线态。如果处于三线态的荧光原子吸收了更多的光子，则额外的能量会使共价键的断裂。这种方法同样有助于降低光毒性和光漂白效果。在使用快速线扫描法（可用于共焦系统）的激光激发研究中，光漂白和光毒性的影响同样被显著降低。因为短时间内受限的脉冲在曝光后进入间歇周期，使三线态的分子能够返回到稳定的基态。这方面的研究工作将继续进行，由于LED的可控性以及快速开关切换能力，预期以LED作为光源也能得到相似的结果340nm的大功率LED已经在近期投入市场使用，其采用钙荧光指示剂（Fura-2）进行钙成像。该应用通过获取神经元网络的活动信息进行阿尔兹海默病及其他相似病症的研究。斯特拉思克莱德大学的Peter Tinning及其同事们的研究表示，使用340nm或380nm的强LED系统可以使细胞中钙荧光指示剂浓度比标准细胞制备方案低25%。该研究不仅为实验研究节省了资金，更重要的是，能够降低荧光标记可能导致的细胞毒性效应，以观测到生物样品更为典型的自然行为

一体化细胞免疫荧光技术介绍                                                                                    免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。一．传统的免疫荧光实验步骤（一）、实验材料 1. 细胞样品 2. 试剂、试剂盒： 多聚甲Quan；70% 甲醇；丙Tong；PBS；Triton ；BSA；DAPI 染液；DABCO；Tris；甘油   3. 仪器、耗材：玻片     （二）、实验步骤     细胞爬片免疫荧光实验步骤 第一天：1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3 min；2. 用 4% 的多聚甲Quan固定爬片 15 min， PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min；3. 0.5%Triton X-100( PBS 配制 ) 室温通透 20 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭 30 min；5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃ 孵育过夜；第二天：6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3 min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中 20-37℃ 孵育 1 h，PBST 浸洗切片 3 次，每次 3 min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。7. 复染核：滴加 DAPI 避光孵育 5 min，对标本进行染核，PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI；8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像二 传统免疫荧光实验主要问题1. 爬片效果欠佳2. 细胞和试剂用量大，成本高3. 染液分布不均4. 操作繁琐,费时费力三. 一体化免疫荧光技术简介 一体化的培养室-固定-染色-成像 免疫荧光的解决方案技术特点：1.快速简便的样品制备,一体化培养室简化了免疫荧光染色方案2.均匀细胞分布,通道载玻片几何结构可以产生均匀的细胞分布3.经济实惠的实验方案，需要少量的细胞和试剂4.高分辨率成像，适用于宽场荧光，共焦成像，FRAP-FRET-FLIM和高质量的相差成像（Phase Contrast） 主要工作模式：1. 通道模式：ibidi通道载玻片是使用少量试剂的理想选择。μ-Slides VI0.4是一般免疫荧光检测的理想选择，而μ-Slide I0.4Luer可在低密度培养和流动实验中进行免疫荧光染色。2.开放腔室模式Ibidi μ-Slide 8 孔和μ-Dish35mm 能够在全内腔中实现标准免疫荧光方案，无盖玻片。染色后，使用高分辨率显微镜通过聚合物盖玻片底部观察样品。 3. 可拆卸腔室载玻片模式带有腔室的可拆卸硅垫片为个体细胞培养和孵育提供了理想的模式。ibidi micro-Insert 4 Well可以使用极低的试剂量。可拆卸3Well|8Well|12 Well Chambers是长期样品储存的理想选择。一体化免疫荧光技术应用举例超过800篇参考文献证明了使用ibidi产品进行免疫荧光检测的优势。1. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) cultured under flow conditions in μ-Slide I 0.4 Luer蓝色: nucleus (DAPI)绿色: VE-cadherins (Alexa 488 conjugated antibody)红色: actin cytoskeleton (Cy5 conjugated antibody)2. Cell line Madin-Darby canine kidney (MDCK) cultured in μ-Slide VI 0.4蓝色: nucleus (DAPI)绿色: actin cytoskeleton (Alexa 488 conjugated antibody)红色: mitochondria (MitoTracker)3. Differentiated mouse fibroblasts cultured on elastic surface (ESS 28 kPa)绿色: zyxin (Alexa 488 conjugated antibody)红色: alpha-smooth muscle actin (Cy5 conjugated antibody)产品技术参数表五. 总结和评价（1）这种腔式载玻片／培养皿，不需要包被，不需要爬片，培养细胞－冲洗玻片－固定细胞－染色－成像，所有步骤都在这个  载玻片就可以完成，直接镜检成像效果良好；（2）如果希望做完实验还可以封片永久保存的，有这种可移除的腔式载玻片，3孔8孔12孔，根据实验需要选择，种好细胞染色之后，就可以撕掉框架，直接观察或者封片保存； （3）如果实验希望做小容量的，这种通道载玻片，跟普通免疫荧光实验对比，用枪加液和吸液就可以完成所有免疫荧光步骤，操作更简单；节省细胞节省试剂，一个通道只需要25微升液体；保证细胞分布均匀，得到更好的观察结果；（4）如果实验需要做大容量的，或者做长时间的活细胞观察的，IBIDI培养皿，底部比普通载玻片的成像效果要好，可以直接完成所有细胞操作和观察，这个有配套的盖子可以减少污染，杜绝蒸发，盖子可锁可不锁，锁上的话，蒸发率基本为零，适合长时间观察细胞；（5）如果实验需要定期观察同一个细胞／重新找回某一个之前观察过的细胞，或计数细胞，有带计数格的培养皿和腔式载玻片（8孔的），只要记住细胞的坐标，每次都可以轻松找回同一个细胞，不像平常用记号笔标记的那么不准确，记号笔的痕迹还会影响观察；（6）如果实验要做高通量的免疫荧光，比如药筛，有24孔板，96孔板，384孔，价格和市面的多孔板差不多，多孔板不需要包被，也不会有自发荧光，孔壁是黑色的，所以孔和孔之间的免疫荧光不会互相影响；（7）这些耗材专门为共聚焦超分辨显微成像设计，效果很好；（8）这些产品都是通过ibidi的专利物理方法ibiditreat处理，底部都是超薄亲水的，大多数种类细胞都可以直接贴壁生长的，不需要另外包被了；如果有特殊实验需求，可以自己再包被的（选择uncoated版本）；

通道载玻片内细胞培养介绍 本应用简报说明了如何在细胞培养微通道内生长贴壁细胞。将描述细胞接种，培养基交换和光学性质。另外，显示了细胞培养通道和标准开放孔格式之间的主要差异。 为了显示细胞接种和μ-Slide处理，使用μ-Slide VI 0.4进行演示。像通常方法一样制备细胞悬液（例如3×105细胞/ ml）并将30μl加到通道中。将移液管尖端放在通道的入口上，并如图所示指向通道。快速分配并填充整个渠道。细胞附着后，如上图所示，将60μl无细胞培养基填充到每个通道中。注意避免气泡。如果在细胞粘附后进行填充步骤，则不会将细胞冲洗出通道。如果您想在细胞接种后立即填充通道，请小心移液。 μ-Slide VI 0.4在显微镜观察时已充满细胞和培养基。 填充μ-Slide VI 0.4的Luer储液孔。 2.培养基交换a.连续介质交换 - 推荐使用对于连续介质更换，首先从储存器中移除旧介质。然后，将适量的新鲜培养基加入一个储液器中，同时从另一个储液孔中吸出。小心使用细胞培养移液器。我们建议体积至少是通道容积的3倍。重新填充储液器。 连续交换介质体积为3倍的介质。 b.完全的培养液交换 - 仅适用于昂贵的液体 如果仅仅更换通道内液体，请先清空通道。然后，将移液管尖端放在通道入口上，并小心地将液体从通道中吸出。使用细胞培养移液器彻底清除所有液体。为了重新填充通道，将通道容量的新鲜介质直接注入通道。避免产生气泡。重新填充两边的蓄液孔。 完全清空通道可能导致重新填充后形成气泡。 通道和储存孔液体完全替换。  3.通道载玻片与多孔载玻片在下面部分，我们将μ-Slide VI 0.4（细胞培养通道）的特性与μ-Slide 8孔（开放格式）进行比较。 对于接种细胞，主要差异是结构内部液体的高度。两个系统的小区域部分如下所示。μ-Slide VI 0.4通道内部底部和顶部之间的距离为400μm。填充的μ-Slide 8孔载玻片没有顶部结构。在8孔载玻片里面，培养基约为0.3毫，通道载玻片比开放格式8孔载玻片薄7.5倍。 对于细胞接种，必须应用不同的细胞密度以在表面上获得相同量的细胞。在该示例中，目标是接种25个细胞/单位面积。由于μ-Slide 8孔内液体的高度是7.5倍，因此应用的细胞浓度必须低于相同的因子。  基于不同高度的液体内部μ-Slide VI 0.4和μ-Slide 8孔。在上面的例子中，相同的生长区域和细胞数量但不同的体积导致所需的细胞浓度不同。  为了获得相当程度的融合，我们建议使用3 ... 7 x 105细胞/ ml（μ-Slide VI 0.4）和4 ... 9 x 104细胞/ ml（μ-Slide 8孔）。这是两个几何形状之间相同的~7.5倍。细胞粘附后，每单位面积的细胞数相同。 由于不同的高度，不同的细胞浓度产生相同等级的细胞聚合。 4.通道μ-Slide的优点与标准开孔格式相比，通道载玻片具有很强的优势。 a.相差显微成像效果更好通道几何结构很方便使用相差显微镜，因为没有凹液面的影响，整个生长区域可以用相差技术观察。 与开放式多孔载玻片不同，通道载玻片不会干扰相差显微镜的光束路径，从而获得更好的相差效果。 开放式多孔培养板(图a,图b)：凹液面影响了了相差效果。只有中心部位能提供高质量的对比度。 通道式载玻片(图c,图d)：在通道几何结构中，光束路径始终对齐。整个视野都可以提供高质量的相差显微镜成像。  b.细胞分布均匀 在通道中，因为边缘效应小，贴壁细胞的同质性要好得多。 下面的显微图像，相差（a）和荧光（b）模式中显示了开放孔（1-3）中细胞分布的不均匀性和细胞培养通道（4-6）中的同质性。 1     开放式多孔载玻片，边缘位置成像2     开放式多孔载玻片，随机位置成像3   开放式多孔载玻片，中心部分4     通道载玻片，边缘位置成像5     通道载玻片，随机位置成像6   通道载玻片，中心位置成像  

细胞共培养实验介绍1.基本原理体外细胞共培养（co-culture)是将两种细胞（可以来自同一种组织，也可以来自不同的组织）混合共同培养，从而使其中一种细胞的形态和功能稳定表达，并维持较长时间。该技术能模拟体内生成的微环境，便于更好地观察细胞与细胞、细胞与培养环境之间的相互作用以及探讨药物的作用机制和可能作用的靶点，填补了单层细胞培养和整体动物实验的鸿沟。目前主要有三方面的研究内容：分别是a. 细胞与细胞之间的接触、作用，引起胞质膜的直接接触并产生细胞外基质 ECM ，其含有间质胶原、纤连蛋白、蛋白多糖及层粘连蛋白等成分，从而模拟了与体内相似的微环境，维持细胞的立体构形及促进细胞的功能。b.细胞与细胞之间的相互作用 ,观察细胞共培养后其功能、性状和生长行为的变化 ,如某一细胞的分泌物对另外一种细胞基因表达的影响，细胞与细胞之间的“对话”等。c.研究药物对细胞形态、功能的影响以及相关机制，为新药研发提供重要技术支持。细胞共培养分为直接接触式共培养和非直接接触式共培养。直接接触式共培养是指在合适的条件下，将两种细胞按照一定比例在同一培养皿中共同培养。利用两种细胞或组织接触，通过旁分泌、自分泌分泌细胞因子或直接接触等相互作用方式，主要缺点是两种细胞分离较困难，不便于观察和后续检测；非直接接触式共培养是指在共培养体系中一者对另者的影响是通过旁分泌的细胞因子相互作用，但两者不接触。由于两种细胞容易分离，便于观察和不影响后续的检测，包括以下4种方法：（1）用一种细胞的培养上清液（含有不同生长因子）与另外一种细胞共培养。（2）将玻片上（经过1型胶原凝胶预处理）培养的细胞B，以一定的比例放入细胞A的培养皿中与其共培养。（3）Millicell插入式细胞培养皿（Transwell小室）是一类有通透性的杯状装置，杯子底层放一张有通透性的膜，一般常用的是聚碳酸酯膜，孔径大小有 0.1～12.0um。将 Transwell 小室放入培养板中，细胞A种在上室内，下层种植的细胞B 其培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的影响。（4）三维细胞培养(three dimensional cell culture,TDCC)：TDCC是将具有三维结构不同材料的载体与各种不同种类的细胞在体外共同培养，使得细胞能够分化产生一定的三维组织特异性结构，构成三维细胞载体复合物,如现在常用的基质胶 (matrigel)，是一种从小鼠肿瘤组织中提取的物质，在室温下，它形成类似于体内的细胞外基底膜的胶状结构，把内皮细胞培Matrigel胶内，内皮细胞表现出新生血管的特征。Matrigel胶方法的局限性是并不能很好模仿体内肿瘤和血管内皮的微环境，细胞分离及提取困难，而且细胞因子的弥散受到一定的影响。Ibidi共培养实验产品介绍----μ-Slide 2孔共培养2.应用范围：（1）不同细胞系或原代细胞的共培养（2）上皮-间质细胞互相作用（3）体外不同种类细胞旁分泌互相作用（4）基质胶中细胞或细胞球体培养3. 特点：（1）IBIDI有2孔共培养载玻片，细胞互不接触，但共享同一个液体环境，可以实时观察细胞，不像transwell做共培养，需要取出细胞才能观察；（2）IBIDI共培养载玻片在孔里加液换液，培养和观察等操作方便，比transwell的操作要简单；（3）此产品能按实验需要调节供体细胞和受体细胞的比例；（4）产品用法简介：在浅的孔中种细胞，细胞贴壁后，加入培养基浸过所有的浅孔，共培养实验开始；－（如果实验是做少量细胞的共培养，或多细胞对少细胞的共培养）IBIDI这些2孔插件，还有4孔插件都可以做，把少细胞种在插件的孔里；4. 实验流程简介1. 将40-60ul的受体细胞悬浮液种到slide中间小室，根据你的细胞类型密度控制在5-10×104cells/ml；2. 将40-60ul的饲养层细胞悬浮液种到slide的其他8个小室；3. 细胞贴壁后，移去各小室培养基，并洗脱掉未贴壁细胞，再加400-600ul培养基到大well，两种细胞共享同一培养体系。纵切面： 

 2019年3月18日，广州科适特科学仪器有限公司给广州客户现有的蔡司品牌倒置荧光显微镜Axio Observer 7升级加装流体剪切力装置，安装客户采购的流体剪切力系统，配置双流体单元，可以实现层流，脉冲，摆动式细胞流体实验。系统调试好以后工作稳定，效果良好。     显微活细胞流体剪切力系统由倒置荧光显微镜、活细胞培养装置、微流体控制单元、显微摄像系统等组成。温度控制器可以精确控制培养箱中的温度，CO2浓度，湿度等培养条件。显微活细胞流体剪切力系统通过在流体灌注的蓄液器内施加空气压力来产生液体流动置。使用流体剪切力泵系统，可以模拟连续层流和脉动层流以及振荡流动。配合专门设计的放置在显微镜上面的活细胞培养装置，开展相关细胞研究工作，通过高质量的荧光显微镜和高灵敏度的摄像头观察并且记录实验图像数据。    利用活细胞流体剪切力系统，可以帮助用户在血小板研究，心脑血管，淋巴免疫系统研究等相关基础科研领域开展高水平的研究，特别是在模拟活细胞生理状态下血管，淋巴管，静脉窦，毛细血管等组织液体流动环境的血管内皮细胞，上皮细胞，以及跨膜迁移等相关的研究。

肿瘤学必备——血管生成实验介绍实验原理肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子，诱导血管生成。多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。因此，血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用，抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成实验能很好的模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验。我们以HUVEC细胞为例，介绍这一实验的详细过程。 图一  血管生成镜检图一. 实验材料和实验方法1. 实验材料2. 实验方法：2.1 实验流程介绍  图二  实验流程图（提前将Matrigel融化，铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中，待胶凝后，将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中，成管后使用显微镜观察。）2.2 耗材结构介绍  图三   血管生成载玻片纵截面示意图（Matrigel铺在下孔，细胞铺在Matrigel上，上孔充满培养基）2.3 数据分析流程介绍 图四  实验结果收集和分析流程图（在特定的时间点采集图片，并且进行图像分析（Wimasis全自动分析）测量小管长度，成环数，细胞覆盖面积和结点。之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。）二. 实验步骤1. 准备基质胶1）.实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4。C冰箱，使胶能过夜缓慢融化。（注意：同样要准备一些4。C预冷的枪头用于吸取Matrigel）2）.开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。3）.打开灭菌包装，取出ibidi血管生成载玻片。4）.每孔中加入10μl Matrigel。注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能打入10μl的胶，却不能填满血管生成载玻片的下孔——这样，必然会影响到实验的成像结果。如何判断是否加入了合适体积的Matrigel：我们只需用一张格子纸就能知道自己的移液枪调整到多少能正好把下孔填满。如上图所示，垂直透过每个孔看下面的格子纸，如果格子被缩小了，那么就说明胶没加满，格子被放大了，那么胶就加多了，格子没发生什么变形，这才是刚刚加满下孔的状态。2. 凝胶1）.盖上ibidi血管生成载玻片的盖子。2）.准备一个10cm的培养皿，放入浸过水的纸巾，制成一个湿盒。3）.将ibidi血管生成载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖。4）.将整个培养皿放入培养箱中，静置30分钟左右，等待胶凝结。5）.等待同时准备细胞悬液。3. 铺细胞加入细胞的量直接影响实验结果，所以在正式实验开始之前，要对不同类型的细胞和使用数量进行预实验。获得最佳比例的细胞密度。我们今天的实验使用HUVEC细胞，每孔种10000个细胞即可。1）.准备密度为2*105cells/ml的细胞悬液，充分混匀。2）.将胶已经凝固的ibidi血管生成载玻片从湿盒中取出。3）.每孔加入50μl的细胞悬液，注意保持枪头垂直在上孔的上方，不要接触下孔的凝胶。可以使用排枪。4）.同样用格子纸查看是不是加了足够量的液体，如果没有，加入无细胞的培养基，使上孔液体正好加满。5）.盖上盖，静置，一段时间后，所有细胞都会沉下去落在Matrigel的表面。4. 采集图像并统计结果可以按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度，覆盖面积，成环数，结点数进行测量和记录，并且对其进行统计分析。5. 免疫荧光染色根据需要，可以对成管结果进行免疫荧光染色。1）.小心的移除上孔内培养基，注意不要碰到胶或者细胞网络。2）.加入50μl用无血清培养基稀释的calcein (12.5 μl calcein stock 1 μg/μl)，使其终浓度为 6.25 μg/ml (1:160)。3）.在室温下避光孵育30分钟。4）.使用PBS清洗三次，注意，PBS要缓缓加入上孔，以免冲击掉细胞。5）.使用 485 nm/ 529 nm进行免疫荧光成像。实验优势1.此实验方法能节省更多基质胶，降低实验成本；2.分上下孔的ibidi血管生成载玻片能去除凹液面，使成像效果更好。（左侧ibidi血管生成载玻片无凹液面，整个视野成像清晰；右侧96孔板有凹液面，中间清晰周围模糊。）

一种新型细胞划痕实验方法的简要介绍 广州科适特科学仪器有限公司一.传统细胞迁移实验技术—划痕实验1.基本原理细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上， 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h），取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。实验材料细胞样品试剂、试剂盒无血清培养基 PBS仪器、耗材6孔板 maker笔 直尺 枪头实验步骤准备：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔等在操作前，需紫外照射30min（超净台内）流程1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。2、操作步骤（1）先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 （2）在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。（3）第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。（4）PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。（5）放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。（6）统计方法：使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。3.注意事项：（1）在用PBS缓冲液冲洗时，贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。（2）一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（（3）按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。二．传统实验方法主要问题传统实验方法缺点是细胞增殖对实验结果有影响，即使在无血清或低血清条件时，细胞的状态、代谢等方面会受到影响，由于细胞内信号传导系统整体性的下调，细胞迁移的速度也会慢很多；另外创建“伤口”也可能时大时小，边缘不整齐等误差；还有在镜下拍照观察时，每次观察点基本不可能做到完全一致等。 三．最新实验解决方法-------伤口愈合划痕插件可黏附底部；生物相容硅胶材料；9 mm x 9 mm x 5 mm；两孔（70μl/孔）；每孔生长面积0.22 cm2；可产生500 μm宽的“gap”  特点：1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。2. 非常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。 细胞培养插件方法与传统划痕实验比较细胞培养插件提供重复性更好的实验结果：左图是伤口愈合插件做出的实验数据统计；右图是枪头划痕做出的实验数据统计四.方案小结（1） 新型细胞划痕实验方法可以保证划痕的标准化，保证了实验的重复性－对比枪头划痕，划痕会歪歪扭扭，无法保证每次都一样； （2）新型细胞划痕实验方法可以避免枪头划痕会伤到包被；手动划痕伤到包被的话，会直接影响了细胞迁移的结果；（3）直接镜检观察，成像效果良好； （4）新型细胞划痕实验方法有配套的图像分析，图像分析是通过计算实验区域的空白面积来计算愈合情况的，比分析计算的要更客观准确；（5）产品用法简介： 只需要在插件的两个孔里种细胞，等细胞贴壁了再拔掉这个插件，细胞之间就会留下一道标准的划痕，就可以开始定时观察细胞愈合的情况了；（6）多种规格适合不同的实验流程，2孔，3孔，4孔，带培养皿或者插件，细胞追踪实验专用插件培养皿等

   多年来，广州科适特科学仪器有限公司一直致力于为广大客户提供优质的显微成像产品和配套设备。2019年起，广州科适特科学仪器有限公司作为德国ibidi公司正规签约授权代理商和服务商，独家授权代理如下区域：广东，广西，海南，云南，贵州，湖南 。为更好服务客户，广州科适特科学仪器有限公司在广州办事处设立ibidi培训服务点。ibidi服务点提供流体剪切力实验技术、活细胞显微图像记录、细胞趋化、血管生成、划痕实验耗材设备，数据分析方法等服务。库存充足，欢迎预约订货，欢迎洽谈合作！      

康宁磁力搅拌器在固相微萃取（SPME）中的使用 样品预处理技术：固相微萃取(solid-phase microextraction,SPME)技术(是20世纪90年代兴起的一项新颖的样品前处理与富集技术，它由加拿大Waterloo大学的Pawliszyn教授的研究小组于1989年首次进行开发研究，属于非溶剂型选择性萃取法。SPME是在固相萃取技术上发展起来的一种微萃取分离技术，是一种集采样，萃取，浓缩和进样于一体的无溶剂样品微萃取新技术。与固相萃取技术相比，固相微萃取操作更简单，携带更方便，操作费用也更加低廉;另外克服了固相萃取回收率低、吸附剂孔道易堵塞的缺点。因此成为目前所采用的样品前处理技术中应用广泛的方法之一。固相微萃取(SPME)非常小巧,状似一只色谱注射器，由手柄(Holder)和萃取头或纤维头(Fiber)两部分构成。萃取头是一根外套不锈钢细管的1cm长、涂有不同色谱固定相或吸附剂的熔融石英纤维头，纤维头在不锈钢管内可自由伸缩，用于萃取、吸附样品；手柄用于安装或固定萃取头，可长期使用。固相微萃取(Solid Phase Micro Extraction)，1994年获美国匹兹堡分析仪器会议R&D100项革新大奖，是一种应现代仪器的要求而产生的样品前处理新技术，几乎克服了以往一些传统样品处理技术的所有缺点，集采样、萃取、浓缩、进样于一体，便于携带，真正实现样品的现场采集和富集，能够与气相、气相-质谱、液相、液相-质谱仪联用，有手动或自动两种操作方式，让更多的分析工作者从重复、烦琐的操作中解脱出来。广泛应用于环保及水质处理、临床药理、公安案件分析、制药、化工、国防等领域。 固相微萃取（SPME）的典 型 应 用：* 表面活性剂* 环境水样* 食品、香精、香料* 法庭样品* 血、尿和体液中毒类或药物* 聚合物和固样中痕量杂质（顶空方式）* 药物中残留溶剂* 气体硫化物及挥发物（VOC） 固相微萃取（SPME）装置及选配耗材：1 SPME手柄（手动或自动） PK12 专用进样插件，可选，用于HP6890 PK53 SPME专用采样台 用于4ml瓶， PK14 SPME专用采样台 用于15ml瓶， PK15 康宁PC-420D/PC-620D专用磁力加热搅拌装置 PK16 磁力搅拌子 PK37 专用温度计 PK18 进样导管 PK19 专用采样瓶 4ml, 10 专用采样瓶 15ml, 11 专用高温进样隔垫 11mm, 12 专用高温进样隔垫 9.5mm, 13 SPME-HPLC接口 PK1 （可选）14 固相微萃取头（SPME萃取头）选用   美国Corning数字式磁力加热搅拌器是匹配固相微萃取（SPME）的专用磁力加热搅拌器仪器简介：美国Corning®数字型磁力加热搅拌装置Corning数字式加热仪有明亮LED面板显示温度，他们还带有一个闭路旋钮来监控与调节温度，带有可选的外部温度控制器 (Cat. No. 6795PR) ，他们还可以监控与控制容器中的温度。加热设置可以从5°C到550°C（200°C带可选外部温度控制器）。可以选择两种顶部尺寸5" x 7"，35平方英寸（226cm 2 ）或者10" x 10"，100平方英寸（645cm 2 ）。数字型磁力加热搅拌装置表面采用白色玻璃陶瓷材料，其数字型加热搅拌装置有PC-420D和PC-620D两种。  PC-420D磁力加热搅拌器的主要参数：货号: 6879-420D      型号 PC-420D     功率:230V/50Hz/698W/3.1A加热板尺寸：5" x 7" (12.7 x 17.8cm)     转速范围 60-1150RPM 温度范围：5-550°C 重量：3.2kg     仪器尺寸：10.9" x 7.8" x 4.4" (27.7 x 19.8 x 11.2cm)美国 Corning PC-420D 磁力加热搅拌器的主要应用：固相微萃取（SPME）专用磁力加热搅拌器。美国Corning PC-620D 磁力加热搅拌器的技术参数：货号：6797-620D  型号：PC -620D电源：230V/50Hz加热温度范围：5-550度搅拌范围：60-1150rpm尺寸：11.75×19.7×39.1cm台面尺寸：10 x 10 (25.4 x 25.4cm)美国 Corning PC-620D 磁力加热搅拌器的主要应用：固相微萃取（SPME）专用磁力加热搅拌器。

2019新年好礼相送  康宁小仪器限时劲爆价 在2019年伊始，为报答广大新老客户对本公司的的支持与帮助，广州科适特给大家送开年福利啦！！！ 康宁小仪器又双叒叕限时优惠大促销，更有好礼相送哦，数量有限,送完即止(限前30名订购用户)，同学们千万不要错过鸭，新的一年里赶快为你的实验室添置新的仪器小伙伴啦！ 活动时间：2019年1月15号——2019年2月15号 康宁corning移液器 欢迎联系免费试用！      一、首购礼：新用户首次购买康宁任意移液器，赠送u型枕一个二、惊喜礼：（1）凡购买任意6支以上Lambda Plus单道移液器移液器，赠送华为智能蓝牙音响一个（2）凡购买2支以上Stripettor Ultra电动移液器，赠送华为智能蓝牙音响一个（3）凡购买任意2支以上Lambda Plus 8道或12道移液器送任意Lambda Plus单道移液器1支（规格可选） 为什么选择康宁移液器？3年免费质保严格按照ISO 8655标准校准超省力设计，使用舒适性高整支高压灭菌防紫外线设计锁定装置，防止意外转动可调节的吸头排出器适配所有常见品牌吸头                                  康宁移液器型号选购指南： 产品名称 货号 规格 产品名称 货号规格单道移液器100-1000 uL4075支 8道移液器 5-50 uL4082支单道移液器20-200 uL4074支 8道移液器 20-200 uL4083支单道移液器10-100 uL4073支 8道移液器 50-300 uL4084支单道移液器2-20 uL4072支 12通道移液器1-10 uL4085支单道移液器0.5-10 uL4071支 12通道移液器5-50 uL4086支单道移液器0.1-2 uL4070支 12通道移液器20-200uL4087支8道移液器 1-10 uL4080支 12通道移液器50-300 uL4099支电动移液器4081支 6位移液器通用旋转支架 4078个  康宁磁力加热搅拌器——市面上最好的电磁加热搅拌器 磁力搅拌器各种配件：两年质保，广州现货供应 一、首购礼：新用户首次购买康宁了磁力搅拌器，赠送u型枕一个二、惊喜礼：凡购买康宁磁力搅拌器5台以上送送任意Lambda Plus单道移液器1支（规格可选）  为什么选择康宁磁力搅拌器？拥有超过40多年历史的顶级Pyroceram玻璃陶瓷白色顶面，加热均匀。更耐高温，温度最大可以调节到550℃。更强，更大的磁力，搅拌转速60-1150 RPM，搅拌范围可调。控制更精确，Corning创新微处理技术的数字显示加热仪。安全性好，超过60℃时指示灯会闪烁提醒。节约实验空间，体积小，可随时验收。多种类型、规格可选   更多促销详情请咨询：联系人：赖经理手机：15813341698Tel:020-38102730   Mail:kosterpub@163.comhttp://www.kosterscience.com地址：广州天河区体育西路9号骏汇大厦北座14楼D房

激光共聚焦显微镜、扫描电镜、原子力显微镜三者简要区别和系统关联技术进展激光共聚焦显微镜，扫描电镜，原子力显微镜是目前科研领域用的比较多的成像系统。近年来，随着技术的不断发展，各种系统关联应用成为一个趋势，本文简单整理一下各种显微镜的区别及关联技术进展情况。一、极限分辨率不同, 缘于放大信号源的差异　　激光共聚焦：极限分辨率 150nm. 采用极纯单色短波可见光做光源成像，通过更换物镜可改变分辨率和图像质量。　　扫描电镜：根据电子枪发射原理不同，当前技术的极限分辨率20nm~0.8nm. 采用电子光学成像。主要通过改变电磁透镜的焦距来改变分辨率。　　原子力显微镜：极限分辨率0.1nm，采用杠杆放大激光测距成像！扫描针尖的曲率半径决定分辨率。二、扫描驱动方式不同　　激光共聚焦：激光光源非常细，使用计算机控制的激光转镜控制激光扫描范围和扫描速度，从而控制放大倍数和图像质量。　　扫描电镜：计算机控制的扫描线圈控制电子束扫描范围和扫描速度，从而调节放大倍数和图像质量。　　原子力显微镜：计算机控制的压电位移传感器驱动样品台X,Y 方向扫描，实现扫描范围和扫描速度调控，从而改变放大倍数和图像质量。三、立体成像的差别　　激光共聚焦：通过纳米精度步进电机驱动样品在Z轴方向逐层成像，然后软件将设定的各层图像合成清晰立体图像。　　图像景深是Z周驱动范围决定.　　扫描电镜： 单帧图像具有很大景深，但属于二维图像，通过立体对技术可实现三维成像。　　原子力显微镜：成像的本质就是测量表面每个像素点的高低，描绘出立体形貌。所以每个像素Z方向的数据必须是精确的，否则形貌不准确。传统采用管式驱动器，X/Y方向摇摆扫描，造成图像失真，再现性差。最新的采用独立X、Y扫描驱动器，形貌精确。四、工作环境差别　　激光共聚焦和原子力显微镜可以在大气环境中进行测试样品　　一般扫描电镜必须在高真空环境下进行测试样品五、应用范围差别　　激光共聚焦：几倍 ~ 几千倍，样品制备简单　　扫描电镜 ：几倍~几十万倍，样品制备稍微复杂一些，但总体也很简单    原子力显微镜：几万倍~几千万倍， 要求样品非常平坦，样品制备很难。例如A4纸过于粗糙，无法观测。 系统关联技术进展激光共聚焦与扫描电镜关联，蔡司2013年推出的SHUTTER & FIND可以整合激光共聚焦和扫描电镜，也有其它几个品牌合作推出此类系统 应用举例- 通过扫描电镜，白光共聚焦显微镜进行石墨烯特性研究   原子力显微镜AFM与扫描电镜SEM关联成像（CPEM ）捷克原子显微镜厂家Nenovision 2016年推出litescope，并且专利CPEM技术，已经在蔡司，FEI，日本电子，Tescan等电镜平台测试完成，系统已经在欧洲销售。整合了AFM和SEM的技术优势，即插即用的解决方案–方便使用同时具备SEM – 图像, 化学分析, 表面修饰AFM – 3D 表面形貌，粗糙度，导电性，电子特性 应用举例：石墨烯覆盖的金纳米颗粒细节研究