蜀科离心机在抗衰老领域的重要应用(二)

 人类的动脉硬化、炎症、糖尿病、癌症等多种疾病和衰老等被证实与活性氧和自由基有关.接下去以葡萄为原料，研究天然发酵过程中还原力、DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基和ABTS自由基清除能力的变化，其中蜀科立式高速离心机又发挥了强大的作用。

  首先进行葡萄酵素的制备。用无菌水在无菌条件下 轻轻冲洗除去葡萄表面沙子和灰尘，在无菌操作台中自然晾干。红糖用紫外杀菌45min。葡萄与红糖按质量比1∶1加入到已灭菌的玻璃瓶中，封口，放在暗处，常温下发酵56d。为了避免潜在的菌体污染，制备过程中所有操作都在无菌条件下进行。在发酵过程中，每隔8d取样，样品经蜀科高速离心机 10000r/min离心10min后，用于测定。

总酚含量测定

[8]

100

μ

L

样品加入到

45.9

mL

去离子水

，

再加入

1

mL

Folin-Ciocalteau

试

剂

，

反应

3

min

，

最后加入

3

mL

20%

的碳酸钠溶

液

，

25

°

C

恒温水浴振荡

2

h

，

在

760

nm

波长处测

定吸光度

，

以去离子水为参比溶液

。

总酚含量以没

食子酸等价物表示

，

按照标准曲线线性方程

y

=0.

0917

x

+

0.0208

，

R

2

=

0.9996

来测定总酚含量

。

其

中

：

y

为吸光度

；

x

为样品质量浓度

（

GAE

，

μ

g/mL

总酚含量测定

  100μL样品加入到45.9mL去离子水，再加入1mLFolin-Ciocalteau试剂，反应3min，最后加入3mL20%的碳酸钠溶液，25°C恒温水浴振荡2h，在760nm波长处测 定吸光度，以去离子水为参比溶液。总酚含量以没食子酸等价物表示，按照标准曲线线性方程y=0. 0917x+0.0208，R2=0.9996来测定总酚含量。其中：y为吸光度；x为样品质量浓度（GAE，μg/mL）

DPPH自由基清除能力

  40μL样品加入到4mL0.1mmol/LDPPH-甲醇溶液中，再加入450μL50mmol/LTris-HClbuffer（7.4），25°C温度下恒温水浴30min。以去离子水为参比溶液。在517nm波长处测定吸光度（%）=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100 （1）式中，A0———空白对照液的吸光度；A1———样品测定管的吸光度；A2———样品本底管的吸光度。

还原力测定

  30μL样品加入到2.5mL 磷酸缓冲液（0.2mol/L，pH6.6），然后加入2.5mL 10g/L铁氰化钾，50°C反应30min，再加入0.1g/ mL三氯乙酸2.5mL，在3000r/min下再次用蜀科高速离心机离心10min，立即取2.5mL上清液，加入2.5mL去离子水和0.5mL1g/L三氯化铁。以去离子水为参比溶 液，在700nm波长处测定吸光度。吸光度越高，还原力越强。

超氧自由基清除能力 

  50μL样品加入到950μL磷酸缓冲液（0.1mol/LpH7.4），然后加入1mL120μmol/LPMS（用0.1mol/L的PBS，pH 7.4配制），1mL936μmol/LNADH（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）和1mL300μmol/LNBT（用0.1mol/L的PBS，pH7.4配制）。在环境温度下，反应5min。以去离子水为参比溶液。在560nm波长 处测定吸光度。 超氧自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/A0] ×100

羟基自由基清除能力

  135μL样品加入 到1.4mL6mmol/LH2O2，然后加入0.6mL20 mmol/L水杨酸钠和2mL1.5mmol/L硫酸亚铁，37°C温度下恒温水浴1h。以去离子水为参比溶液。在562nm波长处测定吸光度。 羟基自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100

ABTS自由基清除能力

  用7mmol/LABTS（用5mmol/L的PBS，pH7.4配制），加入过 硫酸钾使最终浓度为2.45mmol/L，在室温条件下黑暗放置12~16h。使用前把ABTS自由基用PBS稀释成在734nm波长处吸光度为0.7±0.02。 取10μL样品加入到5mL上述稀释液中，在 30°C温度下反应5min。以去离子水为参比溶液。在734nm波长处测定吸光度。 ABTS自由基清除能力/%=[（A0-（A1-A2））/ A0]×100

  经实验研究表明，葡萄固有的多种有益菌天然发酵而产生的葡萄酵素产品具有良好的抗氧化性能。抗氧化性能变化规律研究表明：发酵过程中总酚含量、还原力、DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和ABTS自由基清除能力总体呈逐渐增加趋势，超氧自由基清除能力呈现先增加后略微降低再增加的趋势。因此，平时可以适当食用功能性微生物发酵产品，可以起到一定的抗衰老，抗菌，消炎，净化血液，增强机体免疫能力等多种保健功能。

  此实验中，蜀科立式高速离心机发挥了强大作用，相关领域客户如果对实验中的离心机感兴趣可以随时联系我们，我们会给您更多专业详细的解答哦！