医用离心机“肾单层细胞培养”案例

 蜀科医用离心机系列产品包含高速离心机，低速离心机，大容量离心机，冷冻离心机等，广泛应用于制药、临床医学、血站血库、检验检疫、疾控等科研和生产单位。

 下面简单介绍通过医用离心机进行“肾单层细胞培养”的一般操作技术。

1.取肾：用无菌操作取出断乳前后幼龄动物的肾脏置灭菌平皿中，剪去留的被膜和脂肪，并纵向切成两半，剪去肾的被膜和脂肪，并纵向切成两半，剪去肾盂及髓质部分，用含双抗(指青、链霉素，下同)的汉克氏液洗净，移置小烧杯中，剪成乳糜状，再用汉克氏液洗2—3次，至液体澄清无血细胞为止。

2.消化；加入10倍的0.125％胰酶液进行消化。有热消化法(在37℃水浴中)和冷消化法(在4℃冰箱中)两种。消化的时间根据不同的组织细胞和所用胰酶的活性而定，直至聚成絮状的肾组织又分散开。取出倾去胰酶，用汉克氏液洗涤数次，然后加入少量乳汉液，用吸管进行吹打(即吸入和吹出)10-20次，使组织分散为细胞。将分散的细胞经2—3层消毒纱布过滤，取滤液置于医用离心机中以1500转/分离心十分钟，弃去上清液，加适昆乳汉液混匀，再次通过离心机离心，最后加入乳汉液使细胞悬浮其中，收集于灭菌三角瓶中。

3.细胞计数和分装：取已制好的细胞悬浮液，用计数白细胞的方法计数，根据计数结果，用营养液(pH6.8—7.0)稀释为每毫升含50-60万细胞，分装于小扁瓶中(容量约50毫升的扁瓶加悬液约5毫升)，也可分装在链霉素小瓶中。

4.培养：在37℃培养，3—4天即可粘附瓶壁形成单层细胞，以后每过3—4大更换一次维持液。

5.接毒；将病料剪碎，按1：4加含双抗的汉克氏液研磨成乳糜状，经冻融处理使细胞破碎，病毒充分释放，用离心机，将转速控制在3000转/分左右离心15分钟，将上清液接种到已生长单层细胞的培养瓶中，在37℃温箱中吸附30-60分钟，然后加入维持液继续培养。

6.收获病毒：每日或隔日用低倍显微镜观察细胞病变情况，当有50-75％细胞出现病变队时可收集培养瓶中液体，从放在冰箱(-20℃)中保存，此即繁殖的病毒液。

注：培养皿及其他使用器具的洁净、离心机的使用、水的质量、酸碱度、无菌操作等，都是关系到组织培养成败的重要问题，必须严格规定的要求去做。