叶绿素研磨方案

客户信息

某省级环境监测站

样品名称

水中叶绿素a提取

执行标准

HJ 897-2017 叶绿素a的测定

实验原理

将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm 和 630nm波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素a的浓度

过滤处理

在过滤装置（5.2）上装好玻璃纤维滤膜（4.5）。根据水体的营养状态确定取样体积，见表1，用量筒量取一定体积的混匀样品，进行过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。过滤时负压不超过50kPa，在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。

注：仅当富营养化水体的样品无法通过玻璃纤维滤膜时，可采用离心法浓缩样品，但转移过程中应保证提取效率，避免叶绿素a的损失及水分对丙酮溶液浓度的影响。

研磨处理

将样品滤膜放置于研磨装置（5.3）中，加入3ml～4ml丙酮溶液（4.3），研磨至糊状。补加3 ml～4 ml丙酮溶液（4.3），继续研磨，并重复1～2 次，保证充分研磨 5 min以上。将完全破碎后的细胞提取液转移至玻璃刻度离心管（5.5）中，用丙酮溶液（4.3）冲洗研钵及研磨杵，一并转入离心管中，定容至10ml。

注：叶绿素对光及酸性物质敏感，实验室光线应尽量微弱，能进行分析操作即可，所有器皿不能用酸浸泡或洗涤。

用于叶绿素研磨的高通量球磨仪+离心管适配器+特制PTFE离心管

以上产品为天津市东方天净科技发展有限公司研制

本仪器优点：

①　机械部分与电子控制部分分开，航空插头设计，延长电子元器件寿命，减少损坏；简单，实用。——这也是一体机致命缺点。

②　5ml或10ml离心管研磨腔，3个3mm、2个5mm氧化锆磨珠，保证研磨过程无污染物进入；

③　超快速研磨：过滤后的玻璃纤维滤纸加丙酮溶液的研磨，用激光粒度分布仪在2min测试含量99.15%粒径为200um，在3min测试含量99.85%粒径为200um，证实能完全对叶绿素a的提取，并将滤纸研磨到糊状；

④　一机两用：该研磨仪既可以作为提取叶绿素的仪器，也可以将震动频率调低，作为混匀仪使用，减少物料的转移，避免污染，可将研磨后的10ml离心管直接转移到离心机上；

原理：

微量研磨仪具有对称的一对高速大振幅的摇臂，通过玛瑙小球或不锈钢小珠等在样品管内来回不规则撞击及摩擦，在几秒到几分钟内轻松实现样品的研磨、粉碎、混合及细胞破壁。精细的研磨，可以达到微米级。

配置：

材质：PTFE、1010尼龙

规格：6孔10ml、12孔5ml

用途：

将4.1中滤膜吸干水的样品粉碎。

离心浸渍提取

将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后，用铝箔包好，放置于 4 ℃避光浸泡提取 2 h以上，不超过24 h。在浸泡过程中要颠倒摇匀 2～3 次。

6.3.4 离心

将离心管放入离心机（5.4），以相对离心力1000×g（转速3000r/min～4000r/min）离心10min。然后用针式滤器（5.7）过滤上清液得到叶绿素a的丙酮提取液（试样）待测。

离心机    针式过滤（0.45um聚四氟乙烯）

任何10/15ml转子离心机均可相配

研磨设备

TJG-25型高通量球磨仪 

撰写人

天津市东方天津科技发展有限公司技术部

报告出具时间

2018年9月20日