我司为你诠释：大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒原理操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取50μL 加样即可。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

名称96孔配置48孔配置备注

微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无

标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无

生物素1mL 0.5mL 无

检测抗体-HRP 10mL 5mL 无

20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释

底物A 6mL 3mL 无

底物B 6mL 3mL 无

终止液6mL 3mL 无

封板膜2 张2 张无

说明书1 份1 份无

自封袋1 个1 个无

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、20、40、80、160、320 pg/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20 稀释，即1 份的20×洗涤缓

冲液加19 份的蒸馏水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。

大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒原理操作步骤

1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 待测样本孔先加生物素10μL，再加待测样本50μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒原理试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。