ELISA试剂盒实验预备温育知识

在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶联络物后。抗原抗体反应的结束需求有必定的温度和时间，这一保温进程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA 中似不恰当。ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的联络只在固相表面上发生。elisa试剂盒以抗体包被的夹心法为例，参与板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗联络的机遇，只要最靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的进程，因此需经涣散才华抵达反应的结尾。在其后参与的酶符号抗体与固相抗原的联络也相同如此。这便是为何ELISA反应老是需求必定时间的温育。

ELISA试剂盒温育常选用的温度有 43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体联络的适合温度。在树立ELISA方法作反应动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2 小时，产品的生成可达高峰。为加速反应，可前进反应的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中，以构成最多的沉积。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予选用。

elisa试剂盒保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA 板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA 板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性出色的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最终将ELISA 板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规矩的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。

无论是水浴仍是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以保证各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严峻束缚在规矩的范围内，规范室温温度是指 20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时，ELISA 板只需平置于操作台上即可。应留心温育的温度和时间应按规矩力求准确。为保证这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一同测定。

一个出色的实验操作环境可以保证ELISA试剂盒测定效果更准确。实验操作的严谨性与实验操作规范密不可分，未运用的试剂应储存于2-8℃，运用时应回温到室温（20-25℃）。切忌不一样批次的试剂混合运用，要常常检查酶标仪和微量移液器的精度盒准备度，这么才华保证实验的可操作性。