elisa实验严格把关，坚决控制新污染为进一步落实环境保护基本国策，实施可持续发展战略，贯彻《中华人民共和国国民经济和社会发展"九五"计划和2010年远景目标纲要》，实现到2000年力争使环境污染和生态破坏加剧的趋势得到基本控制，部分城市和地区的环境质量有所改善的环境保护目标，对于实验和生产中所产生的废弃物，提倡综合利用，化废为宝。无法利用的废液严禁倒入水池或下水道。废气严禁排入室内，废渣严禁随意乱扔。对于有机废液定期收集，有学院统一处理。对于废酸、废碱液需经中和后再排入下水道。    而实验或生产中的有毒、有害、有味气体一定要达到国家允许的排放标准后，再利用通风设施排入高空。对于废渣，根据其性质，适当地深埋地下，产生粉尘的地方要采用除尘装置。  根据Elisa试剂多年的处理经验：我们为客户推荐以下方法，欢迎参考阅读！  1.焚烧法  ①将可燃性物质的废液，置于燃烧炉中燃烧。如果数量很少，可把它装入铁制或瓷制容器，选择室外安全的地方把它燃烧。点火时，取一长棒，在其一端扎上沾有油类的破布，或用木片等东西，站在上风方向进行点火燃烧。并且，必须监视至烧完为止。  ②对难于燃烧的物质，可把它与可燃性物质混合燃烧，或者把它喷入配备有助燃器的焚烧炉中燃烧。对多氯联苯之类难于燃烧的物质，往往会排出一部份还未焚烧的物质，要加以注意。对含水的高浓度有机类废液，此法亦能进行焚烧。  ③对由于燃烧而产生NO2 SO2 或HCl 之类有害气体的废液，必须用配备有洗涤器的焚烧炉燃烧。此时，必须用碱液洗涤燃烧废气，除去其中的有害气体。  ④对固体物质亦可将其溶解于可燃性溶剂中然后使之燃烧。  2.溶剂萃取法  ①对含水的低浓度废液，用与水不相混合的正己烷之类挥发性溶剂进行萃取，分离出溶剂层后，把它进行焚烧。再用吹入空气的方法，将水层中的溶剂吹出。  ②对形成乳浊液之类的废液，不能用此法处理，要用焚烧法处理。  3.吸附法  用活性炭硅藻土矾土层片状织物聚丙烯聚酯片氨基甲酸乙酯泡沫塑料稻草屑及锯末之类能良好吸附溶剂的物质使其充分吸附后与吸附剂一起焚烧  4.氧化分解法（参照含重金属有机类废液的处理方法）  在含水的低浓度有机类废液中，对其易氧化分解的废液，用H2O2 KMnO4 NaOCl H2SO4+HNO3 HNO3+HClO4 H2SO4+HClO4 及废铬酸混合液等物质，将其氧化分解。然后，按上述无机类实验废液的处理方法加以处理。  5.水解法  对有机酸或无机酸的酯类，以及一部份有机磷化合物等容易发生水解的物质，可加入氢氧化钠或氢氧化钙， 在室温或加热下进行水解。水解后，若废液无毒害时，把它中和、稀释后，即可排放。  6.生物化学处理法  用活性污泥之类东西并吹入空气进行处理。例如，对含有乙醇、乙酸、动植物性油脂、蛋白质及淀粉等的稀溶液，可用此法进行处理。·实验室有机类实验废液处理注意事项：  ① 尽量回收溶剂，在对实验没有妨碍的情况下，把它反复使用。  ② 为了方便处理，其收集分类往往分为：可燃性物质；难燃性物质；含水废液；固体物质等。  ③ 可溶于水的物质，容易成为水溶液流失。因此，回收时要加以注意。但是，对甲醇、乙醇及醋酸之类溶剂，能被细菌作用而易于分解。故对这类溶剂的稀溶液经，用大量水稀释后，即可排放。  ④ 含重金属等的废液，将其有机质分解后，作无机类废液进行处理。

ELISA试剂盒的七大优势1.样品易保留：通过酶反响显现的有色产物大多比较稳定，因而有利于样品的保留。2.成果易调查：对检查成果即可用肉眼调查，又可用显微镜调查，也能够用分光光度计进行比色测定，还可用显微镜调查。这是由于某些酶反响产物能使电子密度发作改动，从而导致被检查物的显现。3.ELISA试剂盒能够定量测定：溶液中的抗原物质，运用酶免吸附技能进行比色测定，根据光密度值的改变，能够定量。预计用细胞分光光度计可对安排内的抗原进行免疫酶技能的定量测定。4.专注性强：抗原与抗体的免疫反响是专注反响，而免疫酶技能以免疫反响为根底，所检查的对象是抗原(或抗体)，运用的抗体除标记了酶以外，与一般抗体的免疫反响特性并无多大不同。5.灵敏度高：由于抗体联合上了酶，因而，借助于酶与底物的显色反响，显现抗原与抗体的联系，大大提高了检查的灵敏性，使检查水平挨近放射免疫测定法。6.仪器和试剂简略：对免疫没技能来说，不需求荧光显微镜，也不需求测定放射性的特别仪器，所用仪器及试剂均属通常性仪器与试剂，一般实验室及出产运用单位均易置办。7.能够大规模测定样品：如有成千上万份样品需求进行检查，免疫酶技能都能在较短时间内完结。

一个完整合格的ELISA试剂盒组成ELISA试剂盒组成做了总结，下面就来看看吧。1、已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；2、酶标记的抗原或抗体（结合物）；3、酶的底物；4、阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；5、酶联物（结合物）及标本的稀释液；6、洗涤液；7、ELISA试剂盒酶反应终止液。

如何提升ELISA试剂盒试验的准确度标准ELISA试剂盒此种酶符号抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性联络。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。如果您一直被所困惑，那么或许您该花些时间来优化封闭液。这或许需要时间，但也是值得的。如今ELISA试剂盒主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您运用的类型须取决于多个要素，包含微孔板的表面吸附的抗原、您的抗体和查看试剂。好的封闭液应降低非特异性联络，但它不应当与抗原、抗体或查看试剂发生彼此作用。最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液廉价、安稳，在去掉洗刷过程中的一些非特异联络上很有用。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸剂"（immunosorbent）；（2）酶符号的抗原或抗体，称为“酶联物"、“联络物"（conjugate）；（3）ELISA试剂盒酶反应的底物。依据试剂的来历和标本的状况以及查看的具体条件，可规划出各种不同类型的查看方法。ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所致使的盛行症、ELISA试剂盒寄生虫病及非盛行症等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，依据现已运用的效果，认为ELISA试剂盒法具有活络、特异、简略、敏捷、安稳及易于自动化操作等特征。 

如何把细胞养得形态更好更漂亮？养了很久的细胞，关于如何把细胞养的形态很好更漂亮，我有一些经验和体会总结一下，和大家分享一下。不同的细胞，喜欢的环境是不一样的这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度。养的细胞形态怎么都不好？对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，或者细胞形态不清晰，表面似有异物等，可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入 3 mL 新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走。然后再加入 3 mL 的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。PS：巨噬细胞我们只吹打，不消化的）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10 分钟观察一次，20 分钟，30 分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入 3 mL 新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。这就是二传。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。这个方法真的很好用。培养基的量的问题这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶 12 mL，大方瓶14mL 的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握。培养瓶选择的问题个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对更安逸的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，塑料瓶比玻璃瓶会好，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更好。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，塑料瓶会好一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。传代时消化的问题可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良，我称之为四步消化法，以难消化细胞为例，具体操作如下：首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗 1-2 遍。这是前奏，即为第一步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶，即为第二步。你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。吸干净瓶内剩余液体，加入 0.3 mL 左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入 1 mL 左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打 2-3 遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用 2 mL 左右新培养基洗一遍与前面的混合。你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。这是第三步。然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养，根据实际情况你自己把握。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能最大限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够最优。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像 RAW264.7，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接手一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求，便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以最大程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个是非常考究你的功夫的。细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活或死的致命点，像 Caco-2 细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到 70% 左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代，不能再拖。换液传代时候洗瓶的问题对于用 DMEM 培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清 1640 去洗细胞在随即后的几次中会比用 DMEM 洗的长的要好。同样，用 1640 培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用 PBS 来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。代时 PBS 洗是很重要的一步，最近发现，用 PBS 就可以把细胞消化开来。加入 PBS 放置 10 ~ 15 分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。

细胞养不好？这些注意事项请收好1冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入 37 ℃ 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。2细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除 DMSO？除少数特别注明对 DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有 10~15 ml 新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。3可否使用与原先培养条件不同的培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。4可否使用与原先培养条件不同的血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。5何谓 FBS，FCS，CS，HS？FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 是错误的使用字眼，请不要再使用。CS （calf serum） 则是指小牛血清。HS （horseserum） 则是指马血清。6培养细胞时应使用 5% 或 10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统，而培养基中 NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养时应使用 10% CO2；当培养基中 NaHCO3为每公升 1.5 g 时，则应使用 5% CO2培养细胞。7何时须更换培养基？培养基中是否须添加抗生素？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。8附着性细胞继代时所使用的 trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？一般使用的 trypsin-EDTA 浓度为 0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于 –20 ℃，避免反复冷冻解冻造成 trypsin 的活性降低，并可减少污染的机会。9悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部分含细胞的培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。10欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为 1 000 rpm，5~10 分钟，过高的转速，将造成细胞死亡。11细胞的接种密度为何？依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。12细胞冷冻培养基的成分为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含 5~10% DMSO （dimethyl sulfoxide） 和 90~95 % 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意：由于 DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将 DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。13DMSO 的等级和无菌过滤的方式为何？冷冻保存使用的 DMSO 等级，必须为 Tissue culture grade 的 DMSO （如 Sigma D2650），其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于 4 ℃，避免反复冷冻解冻造成 DMSO 的裂解而释出有害物质，并可减少污染的机会。若要过滤 DMSO，则须使用耐 DMSO 的 Nylon 材质滤膜。14冷冻保存细胞的方法？欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻保存方法一：冷冻管置于 4 ℃ 30~60 分钟 →（-20 ℃ 30 分钟） → -80 ℃ 16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 长期储存。冷冻保存方法二： 冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降 1~3 ℃ 至 –80 ℃ 以下， 再放入液氮槽 vapor phase 长期储存。–20 ℃ 不可超过 1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入 –80 ℃ 冰箱中，存活率稍微降低一些。冷冻管内细胞数目一般为 1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以 5x106 cells/ml vial 为宜。15如何避免细胞污染？发生微生物污染时应如何处理？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。如果细胞发生微生物污染，加入相应抗生素，直接灭菌后丢弃。16支原体 （mycoplasma）污染的细胞， 是否能以肉眼观察出异状？对细胞培养有何影响？不能以肉眼观察出异状。除极有经验的专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨。支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数，代谢及研究任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为 mycoplasma-free，实验结果的数据方有意义。侦测出细胞株有支原体污染时，应直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。17为何培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，颜色会偏暗红色，且 pH 值会越来越偏碱性？培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，培养基内的 CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂 （通常为 phenol red） 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤 CO2，以调整 pH 值。18各种细胞培养用的 dish，flask 是否均相同？不同厂牌的 dish 或 flask，其所 coating 的 polymer 不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大的影响，唯有少数细胞则可能因使用厂牌不同， dish 或 flask 有生长差异。19购买的细胞死亡或存活率不佳可能原因？细胞冷冻管解冻后，为何会有细胞数目太少的情形？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；解冻过程错误；冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；悬浮细胞误认为死细胞；培养温度使用错误；细胞置于 –80 ℃ 太久。研究人员在冷冻细胞培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。20收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落的原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，是因热胀冷缩的物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。21如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM 做粘附细胞培养，RPMI-1640 做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养最好首选 AIM V（12005）培养基（SFM）。22L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。23GlutaMAX-I 是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I 二肽是一个 L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的 alpha-氨基用 L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放 L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常稳定，即使在 121 磅灭菌 20 分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。24什么培养基中可以省去加酚红？培养基中丙酮酸钠的作用是什么？酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。25为什么目录上说 Hank's 平衡盐溶液 （HBS） 在空气中使用，不需要 CO2培养箱？HBS 和 Earle's 平衡盐溶液 （EBS） 有什么本质的功能差别？HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在 Eagles （2.2 g/L） 中比在 Hanks （0.35 g/L） 中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagles 液在空气水平的 CO2中，溶液会变碱，Hanks 液在 CO2培养箱中会变酸。如果希望在 CO2培养箱中保存组织，需要用 Eagles 液，如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用 Hanks 液就可以了。26二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么？二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用 EDTA 清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。27其他注意事项当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的 50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。大部分添加物和试剂最多可以冻融 3 次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。在溶解的一周内使用贮存在 4℃ 冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在 4℃ 就可能开始降解，如果在室温下放置超过 30 分钟，就会变得不稳定。为了保持 CO2培养箱水盘清洁，需定期 （至少每两周一次） 用无菌蒸馏水或无菌去离子水更换。

几种常用的转染方法一、物理-化学方法 脂质体转染法：采用脂质体转染试剂，将遗传物质如质粒, siRNA等转移至细胞内。 此种方法易于操作且不需要许多步骤或特殊的专业知识。通常情况下，你只需要一种转染试剂和一种兼容的生长培养基 (通常是低血清且具有良好的缓冲作用，使细胞在转染过程中保持活性)。不同的厂商有自己的配方试剂，有些可以为特定的细胞系设计配方，所以检查你的细胞系是否有最佳脂溶性配方。此外，这种方法可与一系列细胞兼容，如HEK 293. 脂质体转染试剂价格昂贵，但转染效率高，从长远来看是值得的。 DEAE-葡聚糖法：它是一种阳离子聚合物，可以与带负电荷的DNA和蛋白质结合，进而被细胞吞噬。 聚合物浓度、核酸或蛋白质与聚合物的比值，以及转染的持续时间是重要的优化参数，另外，此方法对附着细胞的转染非常有效，也可用于某些悬浮细胞系。 缺点是一些细胞类型对葡聚糖特别敏感，可能会发生形态变化或者抑制细胞生长。 磷酸钙共沉淀法：DNA与浓缩的氯化钙溶液混合，然后添加到含有磷酸盐离子的缓冲液中，形成磷酸钙-DNA沉淀物，从而被细胞吸收。 这种方法价格便宜且被广泛使用，但这种方法转染效率不稳定，可能会发生DNA聚集等，影响转染的效率，对试剂浓度、PH值等的要求也比较高。 电穿孔法：将细胞短暂暴露于电场中，短脉冲使细胞膜暂时穿孔，可以吸收外来的遗传物质，此方法也适用于传递蛋白质。 目前有许多电穿孔装置，操作不需要专门的专业知识，但在购买之前一定要向供应商索要设备的演示，确保它对你的细胞系有效。最佳的电压、持续时间和脉冲数可以增加外来材料的渗透性，对每个不同的细胞系你需要仔细优化这些参数。但是并不是所有细胞都能忍受电穿孔，有些细胞会死亡，另外，电穿孔仪也是相对昂贵的。 二、生物方法 腺病毒转导：对于转染困难的细胞，利用病毒载体将遗传物质转移到哺乳动物细胞中 此方法存在病毒传播的风险，需要适当的安全预防措施。另外，需要包装细胞系产生能携带目的DNA的病毒颗粒。 成功转染的诀窍： 哺乳动物细胞系的转染并不简单，使用哪种方法取决于很多因素，例如: 你的实验室的预算、电穿孔设备、你的细胞类型等等，选择最适的转染方法会有较好的转染效率。 抗生素耐药性示例----筛选转染成功的细胞引入遗传物质(通常是一个质粒)的同时细胞会产生一种耐抗生素的基因。在转染的最初阶段，细胞可能会有点“萎靡”，需要时间来恢复，一两天之后，你就可以把它们暴露在抗生素环境下。没有接受质粒的细胞将无法承受，并且会死亡，你就可以用转染的细胞继续你的实验。 2.尽早确定你的转染效率比较不同转染方法的一个快速而简单的方法是使用一个携带荧光标记蛋白的质粒，这样你就可以在显微镜下观察转染的细胞。你可能需要尝试几种不同浓度的DNA / siRNA来确定你的细胞系的最佳转染效率。 3.尝试使用永生细胞系与原始细胞系相比，永生细胞系无疑更容易工作，但仍然可能会观察到细胞毒性作用，影响整个转染效率。

PCR陷阱:细节决定成败PCR几乎是生物学实验室一项最基本的技能，然而有时并不是你想象的那样顺利，实验中的一些小细节可能会使这看似简单的实验失败。陷阱一:起始模板不合格 良好的开端往往带来成功的结局，使用高质量的DNA模板对于最终得到的PCR产物是至关重要的。理想情况下,最好的DNA样本是一个新鲜的样本，然而并不是每次都可以达到这样，最好选择冻结/解冻周期最小的样品。 对于50μl标准的PCR反应,使用25 - 100 ng的人类基因组DNA。为了防止过量的DNA造成反应过量，生成不确定的产物，应该将DNA进行一系列的稀释,分别进行PCR来验证你的反应的极限。 分光光度计可以检测DNA的浓度和质量。分析样品的质量，计算样品A260/280和A260/230吸光度值的比率，比率大于1.8通常是很好的，较低的比值表明样品有污染。常见的污染物,如血红蛋白、乙醇、苯酚是强有力的PCR抑制剂。例如,低A260/230值表示有盐或溶剂污染,而低A260/280值可能有蛋白质污染。如果有污染,及时进行清理。 陷阱二:一级序列和二级结构 在设计引物时,注意那些可能会扰乱反应的一级和二级结构，最好避免AT和GC丰富的区域，选择上游或下游的其他区域。当然,如果克隆一个特定的区域时就没有办法了，一些基本的技巧处理这些复杂的基因序列: 对于富含AT的区域，使用比标准的18-22bp更长的引物。此外,在这种情况下使用两步PCR能达到很好的效果(没有单独的延长步骤)；简单地，删除延长步骤并延长退火时间。也可以试着添加额外的MgCl2至10Mm. 对于富含GC区域,特别是当GC含量 陷阱3:使用错误的试剂或操作错误 如果一个标准的PCR反应突然不运行了，有可能是你的试剂问题。Taq聚合酶、dNTPS和引物有可能发生了降解。如果你认为可能是这个问题，更换新的试剂，检查它们是否稀释到正确的浓度。确保引物浓度在0.1-0.5μM，dNTPs浓度在200μM。另外，不同的PCR程序需要使用不同的聚合酶，根据你所需要的PCR产物特点,比如高保真酶减少产物发生序列错误。 如果以上都试过了都没有效果,尝试校准你的吸量管，或者，回顾一下确定没有忘记添加某个重要的试剂。 陷阱4:没有优化反应条件 优化反应条件是很有必要的，推荐的退火温度当然是很好的，但你不能以为这就是最理想的，调整适当的退火温度可以降低非特异性产物如引物二聚体的形成。

骨组织切片观察成骨细胞用啥染色方法最好成骨细胞用HE染色法可以的，可以看看我们的教科书里，教学切片有HE染色。做科研可以用以下方法酶的组织化学染色：碱性磷酸酶钙-钴法和抗酒石酸碱性磷酸酶法。成骨细胞多见于生长期的骨组织，分布在新形成的骨质表面。当成骨细胞功能活动旺盛时，用组织化学方法可显示出胞浆内的碱性磷酸酶活性。这种染色结果使酶所在部位呈灰白色至黑色，颜色深浅由胞浆内碱性磷酸酶含量决定。胞核复染为蓝色，红蓝反差大，视觉效果好。甲苯胺蓝法：甲苯胺兰法是染料经渗透作用进入组织，虽可同时使成骨细胞和破骨细胞粉色，但由于胞浆和胞核都染为蓝色，反差不大，视觉效果不如酶组织化学法好。免疫组化法：成骨细胞OPG染色。OPG是成骨细胞表面的蛋白成分，经免疫组化染色显示阳性结果，即胞浆为棕色，胞核为蓝色。染好了效果也很好，特异性强。我认为酶的组织化学染色就挺好，有试剂盒的。仅供参考！

小鼠的肝肾石蜡切片 改变下脱水的步骤，95% ，100%乙醇各 1h就好（特别是liver）。脱水不宜过长，否则会过度脱水，组织变硬。如果仍然担心二甲苯透明过度，我建议先采用1：1的二甲苯／纯酒精预先透明30min；再进入二甲苯，以组织边缘透明为准。这样可以避免组织块周围透明过度，而组织内部透明不够，从而引起组织块周围变脆的情况。组织与蜡分离可能是由于组织仍有水分残留的缘故。组织脱水不彻底时二甲苯不能渗入，组织也无法透明，显现浑浊。石蜡亦不能渗入组织，包埋好的蜡块与空气接触后也会因水分蒸发而凹陷，或组织与蜡块分离。所以这里要尤其注意每一次更换酒精都记得用滤纸吸干组织表面的水分。

ELISA结果判断定性测定定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。在间接法和夹心法ELSIA中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法ELISA中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。两类反应的结果判断方法不同，分述于下。（1） 间接法和夹心法这类反应的定性结果可以用肉眼判断。目视标本也无色或近于无色者判为阴性，显色清晰者为阳性。但在ELSIA中，正常人血清反应后常可出现呈色的本底，此本底的深浅因试剂的组成和实验的条件不同而异，因此实验中必须加测阴性对照。阴性对照的组成应为不含受检物的正常血清或类似物。在用肉眼判断结果时，更宜用显色深于阴性对照作为标本阳性的指标。目视法简捷明了，但颇具主观性。在条件许可下，应该用比色计测定吸光值，这样可以得到客观的数据。先读出标本（sample，S）、阳性对照（P）、和阴性对照（N）的吸光值，然后进行计算。计算方法有多种，大致可分为阳性判定值法和标本与阴性对照比值法两类。a． 阳性判定值阳性判定值（cut-off value）一般为阴性对照A值加上一个特定的常数，以此作为判断结果阳性或阴性的标准。用此法判断结果要求实验条件十分恒定，试剂的制备必须标准化，阳性和阴性的对照品应符合一定的规格，须配用精密的仪器，并严格按规定操作。阳性判定值公式中的常数是在这特定的系统中通过对大量标本的实验检测而得到的。现举某种检测HBsAg的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照品为不含HBsAg的复钙人血浆，阳性对照品HBsAg的含量标明为P=9±2ng/ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先计算阴性对照A值的平均数（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（P-N）必须大于一个特定的数值（例0.400），试验才有效。3个阴性对照A值均应≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而已另两个阴性对照重新计算NCX；如有两个阴性对照A值超出以上范围，则该次实验无效。阳性判定值按下式计算：阳性判定值=NCX+0.05标本A值＞阳性判定值的为阳性，小于阳性判定值的为阴性。应注意的是，式中0.05为该试剂盒的常数，只适合于该特定条件下，而不是对各种试剂均可通用。根据以上叙述可以看出，在这种方法中阴性对照和阳性对照也起到试验的质控作用，试剂变质和操作不当均会产生"试验无效"的后果。b.标本/阴性对照比值在实验条件（包括试剂）较难保证恒定的情况下，这种判断法较为合适。在得出标本（S）和阴性对照（N）的A值后，计算S/N值。也有写作P/N的，这里的P不代表阳性(positive)，而是病人（patient）的缩写，不应误解。为避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的间接法ELISA中，有些作者定出S/N为阳性标准，现多为各种测定所沿用。实际上每一测定系统应该用实验求出各自的S/N的阈值。更应注意的是，N所代表的阴性对照是不含受检物质的人血清。有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，以致反应后产生的本底可能较正常人血清的本底低得多。因此，这类试剂盒规，如N（2）竞争法在竞争法ELISA中，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量，一般调节阴性对照的吸光度在1.0-1.5之间，此时反应最为敏感。竞争法ELISA不易用自视判断结果，因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，一般均用比色计测定，读出S、P和N的吸光值。计算方法主要也有两种，即阳性判定值法和抑制率法。a. 阳性判定值法与间接法和夹心法中的阳性判定值法基本相同，但在计算公式中引入阳性对照A值，现举某种检测抗HBc的试剂盒为例。试剂盒中的阴性对照为不含抗HBc的复钙人血浆，阳性对照中抗HBc含量为125±100u/ml。每次试验设2个阳性对照和3个阴性对照。测得A值后，先计算阴性对照A值的平均值（NCX）和阳性对照A值的平均数（PCX），两个平均数的差（N-P）必须大于一个特定的数值（例如0.300）,试验才有效。3个阴性对照A值均应小于2.000，而且应≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范围，则弃去，而以另2个阴性对照重新计算×NCX；如有2个阴性对照A超出以上范围，则该次实验无效。阳性判定值按下式计算：阴性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX标本A值≤阳性判定值的反应为阳性，A＞阳性判定值的反应为阴性。b. 抑制率法抑制率表示标本在竞争结合中标本对阴性反应显色的抑制程度，按下式计算：抑制率（%）= （阴性对照A值-标本A值）×100%/阴性对照A值一般规定抑制率≥50%为阳性，＜50%为阴性。定量测定ELSIA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。

ELISA中必要的三个试剂在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定，ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中);(5)酶联物(结合物)及标本的稀释液;(6)洗涤液;(7)酶反应终止液。免疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月以上。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。固相载体固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多，最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性，加之它的价格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料，可制成各种形式。ELISA载体的形状主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用，专用于EILSA的产品称为ELISA板，国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为ELISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割，价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操作步骤进行测定，然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。在ELISA中，用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。ELISA板孔的吸附面积约为200mm2，小珠均为1000mm2，将近ELISA板孔的5倍。吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式ELISA的反应往往更为灵敏。小珠的另一特点是更易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。

深入解读纳米医疗的研究现状 如今，纳米技术已经成为21世纪的关键技术之一，其推动了各个研究领域的迅猛发展，当然纳米科技对医学研究的影响也是显而易见的。比如在生物医学研究中纳米机器人可充当“微型医生”，解决了医生用传统技术难以解决的问题。同时纳米科技在癌症治疗、疫苗开发、hiv治疗以及多种疾病的诊疗中也发挥着关键作用。 纳米疗法与癌症治疗最近，来自美国梅奥诊所等机构的研究人员通过研究开发出一种新型的抗癌纳米颗粒（doi：10.1038/nnano.2017.69），这种纳米颗粒能够让乳腺肿瘤萎缩的同时还能够阻止疾病再次复发。研究者betty y.s. kim博士在文章中指出，在这项概念验证研究中，我们吃惊地发现这些接受这种纳米颗粒治疗的小鼠表现出持久的抗癌效应。不同于现存的仅靶向免疫系统一部分的癌症免疫疗法，我们专门设计的纳米颗粒积极地调动整个免疫系统来杀死癌细胞，促进身体产生它自己的记忆系统，从而使得肿瘤复发最小化。这种纳米药物还可靶向不同类型的癌症和其他的人类疾病，包括神经血管疾病和神经退行性疾病。”近年来，随着精准医疗概念的提出，科学家在对癌症新疗法的开发上也有了不同的见解。许多科学家认为个性化疗法或许是未来人类彻底击败癌症的关键所在。然而，来自美国密歇根大学的研究人员就尝试着开发出了一种新的纳米疫苗，研究人员首先通过基因测序等方式确定患者自身肿瘤细胞上相关突变基因，然后利用人工合成的高密度脂蛋白作为载体，将这些患者特异性抗原输送进入体内，用于“训练”患者机体免疫系统产生肿瘤杀伤性t细胞，以治疗癌症。随着对纳米医疗研究的不断深入，有些研究人员就得到了意外的研究发现，2016年，发表在国际杂志nature nanotechnology上的研究报告中，来自斯坦福大学医学院的研究者就发现，利用纳米粒子就可以激活免疫细胞，进而杀死肿瘤；研究人员通过对小鼠进行实验发现了上述现象，当时研究者想测试一种铁补充剂中的纳米粒子能否作为“特洛伊木马”，把用于化疗的药物偷偷地带入小鼠的肿瘤中。他们却意外发现，铁补充剂中的纳米粒子能够促使巨噬细胞（tam，与肿瘤相关）杀死肿瘤细胞。研究者daldrup-link认为，未来，这种纳米粒子或许能够帮助无法完全移除体内肿瘤的癌症病人进行疾病治疗得以康复。 此前，来自美国芝加哥大学的研究人员就基于纳米颗粒开发出了新型的组合性免疫疗法来帮助治疗癌症；而来自米兰的研究人员通过研究（doi：10.1007/s12274-016-1035-8），将小型的纳米金颗粒吸附到前沿的细胞因子疗法中，他们认为这或许可以更好地增强疗法的作用，研究者helen rippon说道，利用纳米医学中的金来治疗癌症是一个新型且让人非常兴奋的研究领域。2016年6月，有研究人员就报道（doi：10.2217/nnm.15.218）利用纳米载体跨越血脑屏障来靶向治疗脑癌，研究人员通过利用纳米载体将化学药物定向运输到大脑中实现了将脑部肿瘤细胞大量杀灭的目的；尽管目前该技术仅仅在小鼠水平得到了验证，但如果能够同样适用于人体的话，将会导致新的治疗脑癌的疗法的产生。近年来，肿瘤医生和科学家们都寄希望于纳米技术带来的突破性变革。此前有研究者尝试利用纳米气泡“炸死”机体中残余的癌细胞，而在过去十年里，德克萨斯州休斯顿的莱斯大学和其它科研工作者率先对这一方法进行了初步探索。他们认为这种金原子组成的纳米簇可以作为对抗癌症有力的武器。通常情况下，几乎所有的实体瘤内的血管都有渗漏，那么将金原子纳米簇注射到血液中，它们就会倾向于通过肿瘤血管渗透在肿瘤细胞周围聚集。同时这些癌细胞会吞噬这些纳米粒子。一旦进入细胞，这些纳米粒子就好比"特洛伊木马"一样，利用可穿透数厘米厚组织的红外激光照射"击中"这些金原子，这些纳米簇会瞬间产生巨大热能，将周围的组织液气化，产生一些纳米气泡将癌细胞撕裂或"炸掉"。由此可见，近年来纳米技术在癌症治疗领域发挥了巨大的作用，不仅如此，纳米技术还在疫苗开发以及其它研究领域大放光彩。 纳米技术与疫苗去年，昆士兰大学的研究人员mark kendall通过研究开发出了一种新型的纳米贴（nanopatch），这种纳米贴能够提供一种疫苗运输的新型途径，而这无疑是160年以来古老注射疫苗方法的一个革命性创新。研究者认为，这种纳米贴片能够适合于疫苗运输来靶向作用免疫细胞，从而使得疫苗注射的成功率提高，比如流感疫苗、脊髓灰质炎以及霍乱疫苗等。纳米贴片的开发为疫苗的运输策略带来的极大的革新，这种新型技术或许还能够明显减少疫苗开发过程的花费，并且使得疫苗在全世界范围内都可用。而且这并不仅仅是一个好消息，研究者mark kendall和其同事目前正在布里斯班利用纳米贴片进行人类临床试验，而且who也计划2017年在古巴开展脊髓灰质炎疫苗的试验。此前，一项刊登于国际杂志nanoscale上的研究报告中（doi：10.1039/c5nr08821f），来自美国国家生物医学成像和生物工程研究所的研究人员开发了一种新型纳米疫苗，其可以帮助开发出治疗癌症免疫疗法的新方法而且降低疗法的副作用；这种纳米疫苗可以有效运输特殊的dna序列至免疫细胞中，这种来源于细菌dna中的序列可以被用来诱发机体的免疫反应，同时该疫苗还可以保护机体中的dna免于被破坏。不光如此，早在2014年，美国加州大学圣地亚哥分校纳米工程师就开发出一种“纳米海绵疫苗”，经小鼠实验证明，其能大量吸收耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（mrsa）产生的成孔毒素——无论在血管还是在皮肤，因此能预防mrsa放出的alpha-溶血素造成的影响恶化，可作为一种安全高效的抗毒素疫苗。 纳米技术与hiv除了在癌症治疗和疫苗开发中的应用外，科学家们还利用纳米科技在hiv的研究中取得了众多的研究进展，此前来自中国的科学家通过研究开发了类病毒样富勒醇纳米颗粒作为hiv疫苗的佐剂，这对于艾滋病疫苗的研发具有重要的实际意义。纳米医学是应用纳米技术进行疾病预防和治疗的新领域。这个逐步发展的学科有望为医学科学研究带来巨大改变，目前已经有许多临床治疗和诊断方法受到纳米医学技术的影响。2016年10月，来自英国利物浦大学的研究人员进行了一项新研究，他们希望通过纳米技术改善对hiv病人的药物治疗。到目前为止临床上仍然没有可以用于hiv治疗的口服纳米治疗药物，借助新开发的快速小规模纳米医学筛选方法，研究人员就找到了一种新型水溶纳米治疗方法。2017年在美国西雅图市举办的逆转录病毒与机会感染会议上，英国利物浦大学的研究人员宣布了他们的最新研究成果，他们通过研究，利用纳米技术有效改善了用于治疗hiv感染者的药物疗法，而且在临床试验中研究者也取得了较好的结果。不仅如此，来自加拿大的研究人员也通过研究设计并合成出一种纳米尺度的dna机器，该机器的定制修改特性可支持识别特定的目标抗体，这一研究成果将给目前缓慢、繁琐且昂贵的抗体检测过程带来革命性变化，有助于诊断风湿性关节炎、hiv等感染和其他自身免疫性疾病，从而减少疾病治疗延误，降低治疗开支。 纳米科技与疾病诊断胰腺癌是癌症死亡的主要原因之一，这是因为在早期阶段，它通常是无法检测到的。近日，来自美国亚利桑那州立大学的科学家们开发出一种快速的廉价的基于纳米颗粒的胰腺癌诊断方法（doi：10.1038/s41551-016-0021），该方法是基于胰腺癌释放的囊泡表面上的一种生物标记物而开发的。近期，发表在国际杂志nature communication上的一项研究报告中（doi：10.1038/ncomms14378），来自阿尔伯塔大学的研究人员正在领跑一场使用纳米机器改善病人疾病诊断和药物输送的竞赛，在研究中研究人员描述了如何在活细胞内合成dna马达，此前这个过程只能在试管中完成，而这项研究中，研究者展示了如何在活细胞内使用dna马达完成特殊的生物学功能；研究者通过dna酶及其底物创造了一个纳米器件，该纳米器件有需要的燃料、dna轨道及分子开关。这个设备被用于检测乳腺癌细胞中的一种特殊的microrna，当它与靶分子结合后，dna马达会被打开，从而产生荧光。研究人员就能够通过检测荧光强度判断哪些细胞是癌细胞，这项技术在疾病早期诊断领域具有巨大的潜力。 纳米科技与其它疾病纳米科技不管在上述疾病的研究中发挥着巨大作用，其还能够帮助研究者对其它疾病或疗法的开发带来帮助。比如来自瑞士洛桑联邦理工学院的科学家们开发出了可遥控的纳米机器人用于多种疾病的治疗（doi：10.1038/ncomms12263）；还有来自德国环境健康研究中心的研究人员开发出了一种新型纳米颗粒载体，其能在人类和小鼠的肺部的肿瘤位点实现位点选择性地释放药物分子，这种新型的纳米载体或可将肺癌药物的作用效率提高25倍。不仅如此，2016年来自中国香港理工大学的研究人员开发出了一种新型的，用于进行流感和其它病毒快速检测的纳米生物传感器，可以将试验时间从原先的1-3天缩短到如今的2-3小时，相比传统临床方法而言速度要快10倍以上，同时每份样品仅需要花费20元港币，相比传统检测费用降低了80%；因此这种新型技术就可以被广泛用于检测不同种类的病毒，为后期开发低成本、快速且超灵敏的病毒检测技术提供了新的思路（doi：10.1021/acsnano.5b05622）。未来，随着科学家们对纳米科技的不断应用和深入研究，相信新型的纳米技术会不断诞生，而科学家们也会通过不懈的努力基于纳米技术开发更多对疾病进行诊疗的新型工具或技术，从而更多地造福于人类健康。纳米科技近年来已成为医疗健康产业热门领域之一，在2017年6月30日即将召开的“中国光谷”国际生物健康产业博览会上，主办方特地设置了“中国纳米医药产业高峰论坛”，由纳米药物国家工程研究中心组织承办，诚邀全国纳米医疗科技行业人士共襄盛举。除了纳米医药产业高峰论坛，此次生博会还策划的其它10余场精彩论坛，包括亚洲生物技术高峰论坛、医研企协同创新模式论坛、基因产业发展高峰论坛、国际健康管理与智慧医疗产业发展高峰论坛、生物药研发新技术及临床前研究高峰论坛、第六届中国国际免疫治疗创新论坛、第三届中国先进体外诊断技术与应用论坛、第二届中国光谷生物健康产业投融资论坛、2017医疗大数据与医学人工智能高峰论坛、第一届光谷农业生物技术创新论坛等，云集200多位行业领军人物带来精彩演讲。 

dmem培养基的使用方法及特点 dmem是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。该类培养基广泛应用于疫苗生产和各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养;如a9、3t6、balb/3t3、cos-1、cos-3、cos-7、l6、wehi-3b等细胞系的培养。dmem培养基的成分 dmem培养基的配制方法：1 制备新鲜三蒸水或millipore超纯水。2 称取所需量的干粉培养基，加入约终体积一半的三蒸水中;若配制一个包装的培养液，在将整个包装的干粉倒入三蒸水后，需用水洗包装袋内面2次，倒入培养液中，以保证所有干粉都溶解成培养液。磁力搅拌或人工搅拌使之完全溶解。3 根据包装袋上的要求补加所需量的碳酸氢钠;根据实验需要，添hepes(5-20mmol/l)、谷氨酰胺和其他特殊物质。4 加水定容到终体积。5 必要时用1 mol/l 盐酸和1 mol/l 氢氧化钠调节ph。6 用无菌0.22um滤膜过滤除菌，分装于无菌血清瓶中，4℃冰箱保存。配制好的培养液用前加入100u/ml青霉素和100u/ml链霉素，并根据需要加入血清(5%-20%)。dmem培养基的特点：（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等；（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；（4）含有微量的铁离子。dmem培养基应用广泛。基于dmem培养基中氨基酸、微生物含量丰富，并具有糖酵解中的丙酮酸和微量fe离子，因此在细胞培养、疫苗生产等方面的应用最为常见。 

 尊敬的客户朋友及全体员工：2017年端午节即将来临，根据国家有关规定，我公司端午节放假安排如下： 　　一、放假时间安排：公司放假时间为5月28日至30日放假调休，共3天。5月27日(星期六)上班。 　　二、温馨提示：1、放假期间，各部门要安排好本部门的各项工作事项，勿因放假影响工作。 　　2、若以上放假安排对您造成不便，望谅解，届时有紧急事宜急需办理请与我公司相关人员提前联系，我们将为您尽快办理。　　                                                               特此通知                                                      上海钰博生物科技有限公司　　                                                           2017年5月26日

核酸抽提中裂解液的作用及选择核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。下面主要讲述裂解液的作用及选择。经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境 (如 Tris)，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏 (如 EDTA)、维持核酸结构的稳定 (如 NaCl) 等。去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶；利用蛋白酶（蛋白酶K）将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂裂解的，该方法已经成为了 RNA 抽提的主流，却不是基因组 DNA 抽提的主流。含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。裂解包括膜蛋白的游离和与基因组 DNA 相连接的蛋白质的游离。蛋白酶的裂解作用是使蛋白质变小，故而对蛋白质的游离有巨大的促进作用；同时，巨大的基因组 DNA 是很容易“缠”住大分子的东西的，蛋白质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组 DNA “缠”住，有利于蛋白质在纯化操作中的去除，使最终获得的基因组 DNA 的纯度更高。当得率和纯度要求不是最高，考虑经济性及操作步骤简单时，可以考虑不含蛋白酶的裂解方法。关键是控制好裂解液/样品的比例。该方法结合高盐沉淀，可以实现最简单的操作。高浓度蛋白质变性剂 (如 盐酸胍、重金属盐等) 的裂解方法，是抽提 RNA 的首选。总 RNA 的抽提，最重要的是快速裂解细胞膜，高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜，进而迅速抑制住细胞内的 RNA 酶，从而确保了 RNA 的完整性。除了极少量不适用该方法的样品 （主要是植物），其它绝大部分样品的 RNA 的抽提，都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。该方法也可用于基因组 DNA 抽提，特点是快速简单，纯度较低。SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法，具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的特点。关键是控制好裂解液/菌体的比例和操作温和。蛋白质的沉淀效率在 4°C 会更好，采用 4°C 离心去蛋白质，可以提高质量。RNA 的去除可以靠在溶液中加入 RNase A (100ug/ml) 或者在最后的溶解液中加入 RNase A (25 ug/ml) 来实现。PCR 模板的简易裂解方法，也是使用面很广的一类方法。该方法的特点是无须纯化，样品被裂解后即可直接取裂解液用于 PCR，非常快速。也正因为不纯化，所以，假阴性 (即没有扩增出来的阳性) 比例也比较高。该方法最简单的裂解液就是水，复杂一点的就会含有一些不会抑制后续的 PCR 反应，而且能提高裂解效率，甚至还可能部分消除样品内抑制 PCR 反应杂质的东西，如 Triton X-100、甲酰胺等。再复杂一点的就会含有诸如 Chelex 100 之类的能吸附部分杂质的介质。操作也非常简单，多使用温度的变化来实现样品的裂解，如煮沸、或者高温-低温的多次循环等。该方法最适合从一大堆样品中找出阳性样品，但却不适合用于判断某一个样品是阳性还是阴性。核酸抽提不同的方法，需要的裂解液也不同，其裂解液的选择也是多种多样的，用于核酸抽提的生化试剂产品中相关裂解作用的产品有蛋白酶K、SDS、 RNase A 、盐酸胍、Triton X-100、甲酰胺、Chelex 100 等。

感受态的配置及注意事项感受态是指一种容易接受外源DNA的状态。在转基因的过程中，一般会把待转化的宿主细胞处理成为感受态，以提高转化的效率。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。DH5a菌感受态的制备：1、从LB平板上挑取DH5a单菌落,接种于3LB液体培养基中 37℃下振荡培养12h左右直至对数生长后期培养基中。2、将菌悬液以1:100的比例接种于LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜，再将菌悬液以1:100的比例接种于100ml LB液体培养基中37℃，210rpm至OD ＝0.5左右(生长对数期），约2-3h。3、将菌液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中，冰浴30min，4℃、5000rpm离心5min，弃上清；4、每只离心管中加入4ml冰冷的0.1M CaCl2，使菌体重悬，冰浴30min，4℃、5000rpm离心5min，弃上清；5、每只离心管中加入1ml冰冷的0.1M CaCl2，重悬后分装到无菌的1.5ml离心管中(每管100μl)；置-40℃冰箱长期保存；1、制备感受态的注意事项：1、所有器具必须清洁干净，避免污染。2、培养基装量建议不要高于培养基体积/三角瓶容量=100ml/500ml，50ml/250ml，厌氧生长出来的菌体是做不出效率高的感受态的。 3、接种前的pH值在6.8-7.2。等菌摇好后，可以测一下pH值，不要低于6.0，最好在6.5以上。4、经验证明，当培养基中存在一定量的Mg2+离子时，该方法制得的感受态要相对较高。在制备普通感受时，使用20mM MgCl2做为培养基的添加物，在感受态收获之前20-30分钟加入，会收到很好的效果。5、较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了Inoue的高效感受态制备方法。6、在保存感受态时，DMSO要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。7、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。8、冻存的感受态用一次拿一管，不要反复冻融。化冻之后立即使用，不要冰上放太久。9、操作时可以轻弹轻甩，尽量避免用移液器吹吸。

 异常血红蛋白（abnormal hemoglobin）筛查[实验目的]1. 学习血红蛋白电泳分离方法；2. 能辨认正常人和异常血红蛋白的电泳图谱；[实验原理]血红蛋白是一种结合蛋白质，由血红素和珠蛋白组成。正常人所含珠蛋白的多肽链有a、b、d 、e、g和z六种。这六种肽链的基因在人体发育的不同阶段表达状况不一。正常成人红细胞中有三种血红蛋白即hba、  hba2 和 hbf。hba（a2b2）是正常成人红细胞中的最主要的血红蛋白，占红细胞内血红蛋白总量的96%以上，pi=6.7。 hba2(a2d2) 是正常成人红细胞中的次要成分，占2~3% 左右，其pi>6.7。 hbf(a2g2)为胎儿血红蛋白，胎儿出生后六个月急剧持续下降至血红蛋白总量的1%以下，其pi接近 6.7。各种血红蛋白在ph8.5的缓冲液中均带负电荷在电场中都向阳极移动，但因等电点不同所带电荷数目不同而有不同的电泳速度。hba因其所带电荷最多故向阳极泳动速度最快，又因其含量最多区带颜色最深。其后有一较浅的区带为hba2，hbf与hba的等电点接近，通常与hba分不开。异常血红蛋白是指由于基因突变而导致结构异常的红蛋白。异血红蛋白具有与正常血红蛋白不同的电泳行为，因此用电泳的方法可以将其检出。例如hbs是一种由b-链第6位的谷氨酸被缬氨酸所替换而形成的异常血红蛋白，此变异体比hba少带两个负电荷，因此，向阳极移动的速度比hba慢，出现于hba与hba2之间。分析血红蛋白的电泳方法有许多，如滤纸电泳，淀粉胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳等。但异常血红蛋白筛查最常用的还是醋酸纤维薄膜电泳法。因为醋酸纤维薄膜做支持体电泳操作简便，电泳速度快，分辨力强区带集中而且对染料不吸附，容易定量。用醋酸纤维素薄膜电泳筛查异常血红蛋白的检出率为1~2‰。[器材与试剂]1.  器材、电泳仪、电泳槽、醋酸纤维素薄膜2.  试剂(1) 浸泡醋酸纤维膜tbe缓冲夜(ph8.5)；(2) 电泳槽硼酸缓冲液(ph8.6；(3)丽春红染色液；(4)漂洗液。[步骤与方法]1. 浸膜：将醋酸纤维素薄膜膜面向下放入浸膜液中，浸透后用眼科镊子压入液面底部。2. 采血：碘伏消毒耳垂部，用一次性采血针采血，并将血液吸在两次对折的滤纸尖部。3. 加样：将浸泡好的醋酸纤维素薄膜膜面向上放在滤纸上，用滤纸吸去多余的液体，在距一侧1.5cm处用沾血的滤纸涂圆点状（直径约0.2cm）或线状。4. 电泳：将加好样的醋酸纤维素薄膜膜面向下放入电泳槽中的缓冲液纱布上，加样端放在负极，静置2分钟后开启电源，调电压200伏，电泳40分钟。5. 电泳结束后，关掉电源，观察电泳图谱，并记录红色区带（几条）及分布（位置）情况。6. 染色： 将醋酸纤维素薄膜放入染色液中2分钟，然后转入漂洗液中洗至背底呈白色，再观察结果。电泳对比图谱 含异常血红蛋白的样品：应在未染色前观察，除正常成分外，在任何位置出现的不经染色的红色区带，均可记为有异常血红蛋白存在。异常血红蛋白常以hba为标准，分为快泳血红蛋白和慢泳血红蛋白。[注意事项]1. 醋酸纤维素膜一定要浸透（无白色斑点），加样前从浸膜液中取出，既要吸去多余的液体还不能使膜太干，否则都会影响电泳结果。2. 加样时注意要加在醋酸纤维素的膜面，电泳时也要膜面向下放到电泳槽中的缓冲液纱布上。 

蛋白测定方法之Folin—酚试剂法（Lowry法）（一）实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：?在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素（0.5%），硫酸纳（1%），硝酸纳（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液，即可显色测定。若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1~2倍。进行测定时，加F olin—酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定，但上述还原反应只在pH=10的情况下发生，故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前，还原反应即能发生。此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。此法可检测的最低蛋白质量达5mg。通常测定范围是20~250mg。（二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（A）10克Na2CO3，2克NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。溶解于500毫升蒸馏水中。（B）0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准NaOH滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1N左右。（3）标准蛋白质溶液:精确称取结晶牛血清清蛋白或g—球蛋白，溶于蒸馏水，浓度为250 mg/ml左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊，可改用0.9 % NaCl溶液。2.器材（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器（3）秒表（4）试管16支（三）操作方法1.标准曲线的测定：取16支大试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分成两组，分别加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml）。用水补足到1.0毫升，然后每支试管加入5毫升试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，于室温（20～25℃）放置10分钟。再逐管加入0.5毫升试剂乙（Folin—酚试剂），同样立即混匀。这一步混合速度要快，否则会使显色程度减弱。然后在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于700nm处测定各管中溶液的吸光度值。以蛋白质的量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制出标准曲线。注意：因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间，即第1支试管加入5毫升试剂甲后，开始计时，1分钟后，第2支试管加入5毫升试剂甲，2分钟后加第3支试管，余此类推。全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟，则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙，1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙，2分钟后加第3支试管，余此类推。待最后一支试管加完试剂后，再放置30分钟，然后开始测定光吸收。每分钟测一个样品。进行多试管操作时，为了防止出错，每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格。表中是每个试管要加入的量（毫升），并按由左至右，由上至下的顺序，逐管加入。最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量（微克）和测得的吸光度值。2.样品的测定：取1毫升样品溶液（其中约含蛋白质20~250微克），按上述方法进行操作，取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起，同时进行。即在标准曲线测定的各试管后面，再增加3个试管。如上表中的8、9、10试管。根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应的蛋白质量，从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。注意，由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。

抗体选择随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。一、关于特异性的选择：特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。1、蛋白特异性：针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。2、种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。3、实验方法特异性：目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。4、标记物的特异性一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如WB、IHC等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。二、抗体种属来源的选择：有人认为单抗比多抗好，其实这并不是一个严谨的观点，只能说在可能性上单抗的特异性更好一些，而多抗的亲和力会优于单抗，并且特异性并不一定就逊于单抗，主要看抗原的设计水平。目前商品化抗体里单抗主要是鼠单抗、兔单抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他种属来源抗体较少。不建议纠结于单抗好还是多抗好，能做出实验的抗体就是好抗体。在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好，不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标实验中，需要在区别于实验种属的基础上，区分开两个指标的抗体种属来源，以便于二抗区别识别。三、关于性价比的选择：抗体的品质高低最终还是需要通过实验结果来呈现的，但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的，无论进口还是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品，不同品牌之间，甚至同一品牌的不同产品之间，抗体品质差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择，但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的，所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体品质障碍时，能够确保有效地解决问题，不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验，可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。在价格方面，需要谨记，最贵的不一定就是最好的，最适合你的实验的才是最好的。花很多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的，不买贵的。在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，要综合考虑。在规格方面，根据最终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的实验而言，过大的包装有时会造成很大的浪费。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相继推出小包装的抗体，这在一定程度上给选择者更大的选择自由度，可以根据使用产品的效价，计算出自己实际需要的抗体量，做到精确定量采购。四、关于品牌的选择：因为抗体品质的异质化，关于抗体的品牌选择就被大家所重视，但是不管是什么品牌都难免会遇到不适合自己实验的抗体。所以一般建议考虑那些业内普遍认可、购买方便、技术支持专业、售后处理便捷的品牌。一些甚至都没有正式代理的，只能备选。同时购买时一定要找能够提供产品指导、实验分析、售后处理的正规代理商购买，避免因为买到假货水货影响实验。五、关于其他一些小细节：抗体选择与使用过程中，多少还会遇到一些意想不到的事情。有些细节，还是需要多注意一些。如在选择做阻断或中和实验时，有时需要将抗体加到细胞培养液中，这是需要注意抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体，进行分装是比较节约的方式，如果是高效价的，可以配成母液再分装。抗体的短时间运输，用普通冰块保持温度是可以满足要求的。另外不要纠结于WB过程中分子量的问题。很多时候，我们看到同样的抗体，不同的品牌，甚至同一品牌不同的货号，标注的分子量都不一样。其实可能只是生产商只检测时使用了不同的种属不同的样品类型，或是参照了不同的文献，对使用者来说，同样的样品，不管使用哪个品牌的，只要抗体是对的，目的条带只会出现在相同的位置。关于分子量的问题，一般不建议看产品说明，WB中条带的位置由样品决定，并不会因为抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前，我们可以通过数据库或参考文献，对将要检测的蛋白做个比较全面的了解，包括其可能剪切与修饰的情况、表型的情况等。在第一次使用一个新的抗体时，不要根据分子量横向剪膜，可以保留几个全泳道，看看条带位置或分布的情况。

APAAP法检测淋巴细胞表面的IL-2分泌IL-2的淋巴细胞检测试剂（APAAP法）T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群,在正常机体内各T淋巴细胞亚群相互作用,维持着机体正常的免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，就可导致机体免疫紊乱并发生一系列的病理变化。目前越来越多的研究证明，T淋巴细胞在各种临床疾病如自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、变态反应性疾病，再生障碍性贫血、病毒感染、恶性肿瘤等都有异常改变，在各种疾病的发生，发展过程中不同的T淋巴细胞又产生着极其重要的影响。在自身免疫性疾病（如活动性系统性红斑狼疮）中，T抑制/细胞毒细胞（CD8+）的数量和功能低下是发病的重要因素，有时也有T辅助/诱导细胞（CD4+）数量和功能的增高；在乙型肝炎、自身溶血性贫血、类分湿症，重症肌无力等患者都具有类似的T亚群异常的特征。CD4+/CD8+比值减少是免疫缺陷病的重要指征，在AIDS病人中就存在着CD4+细胞显著减少的现象；在一些上呼吸道感染的病人中CD8+细胞的数量和功能都有异常增高的现象。很多感染性疾病（如水痘、猩红热、麻疹病人）都和免疫抑制有关，CD4+/CD8+比值的倒置被认为是病毒感染性疾病的重要指征。在肿瘤病人外周血中T淋巴细胞亚群数值都有异常，其特征是患者体内CD3+细胞、CD4+细胞明显减少，而CD8+细胞明显增加，CD4+/CD8+比值显著降低，说明肿瘤病人的细胞免疫功能处于抑制状态，患者对识别和杀伤突变细胞的能力下降，形成了肿瘤的生长转移。骨髓造血细胞的增殖和分化障碍也与T细胞亚群异常有关。如在再生障碍性贫血与粒细胞减少症中，患者外周血CD4+细胞数减少，CD8+细胞数增多，CD4+/CD8+比值明显下降。因此T淋巴细胞亚群的检测对控制这些疾病的发生、发展、了解发病机制、指导临床治疗都有极其重要的理论意义和临床意义，它已成为临床检验的一项重要指标。T淋巴细胞亚群的分类方法最常用的是根据细胞表面标志，利用单克隆抗体将其分为不同功能亚群。抗CD2单抗与成熟T细胞表面E玫瑰花结实验的绵羊红细胞受体分子结合，用于检测人正常T细胞。抗CD3单抗与CD3抗原分子的ε链结合，是总T细胞的标志，抗CD4单抗与辅助/诱导功能T细胞反应，抗CD8单抗与抑制/细胞毒功能T细胞反应。在静止的人T淋巴细胞表面存在有很少的IL-2受体，并且一般认为不分泌IL-2，只有活化的淋巴细胞才能分泌IL-2，所以分泌IL-2是T淋巴细胞活化的标志之一。使用方法：一、标本的制备：取PHA刺激和正常的Jurkat细胞进行涂片。涂片要用清洁玻片，最好用酸处理，然后经水洗后放95%乙醇中，从乙醇中取出用干净纱布擦干净。涂片不应太厚，厚玻片在染色过程中易脱落。涂片前取5粘片剂均匀推片或用棉签沾取粘片剂，均匀涂于干净玻片上，干后制备细胞涂片，有利于细胞黏附。二、标本的保存： 标本如不进行染色，干燥后，用铝铂纸或塑料纸包起来密闭防潮，标本最好放干燥器中，放–20℃可保存半年至一年而抗原不会丢失。标本在室温可以保存3-5天，长期保存会因抗原丢失而不能染色。固定前将标本从冰冻状态取出，使其恢复至室温后再打开包。三、标本的染色：1.  细胞涂片标本室温干燥2小时以上或过夜，画圈笔在标本外花圈，然后滴加固定液于标本上，固定1-2分钟后PBS洗。2.  加抗IL-2单克隆抗体10-15μl，放湿盒20-30分钟。3.  加羊抗鼠 IgG二抗10-15μl，室温20-30 分钟。4.  加APAAP(碱性磷酸酶)复合物10-15μl，室温20-30分钟。如需增加染色程度，可重复3-4步骤，每步骤10分钟。5.  加碱性磷酸酶底物显色：临用前取底物液，加入少许坚固红，充分混匀。取20-40μl加于标本上，室温或37℃湿箱显色15-30分钟，在低倍显微镜下观察，可见到细胞膜上出现红色标记物，待显色很明显时，用自来水洗终止显色。以上实验均须将标本放于湿盒内以防止抗体蒸发。每步骤间均用0.01MpH7.2PBS液洗三次。6.  加苏木素复染液一滴复染1-2分钟，自来水洗，如果核着色很深影响染色时，可用1%HCL分色5-10秒钟，再自来水冲洗。7.  甘油明胶封片：如标本需长期保存时，可将封片剂瓶放热水中融化 ，加一滴于标本上或加于盖片上封片，镜检。如果不需保存，可加一滴水于标本上加盖片后观察，标本干燥后细胞形态不宜观察。高倍镜下观察，细胞核呈兰色，细胞表面有红色标记物的细胞为阳性细胞，无红色标记物的细胞为阴性细胞，记数100-200个单个核细胞，计算阳性细胞百分率。

ELISA在移液的时候是否要按照一定的顺序？我在移液的时候是否要按照一定的顺序？◆ 根据说明书中的顺序进行移液操作。◆ 高灵敏度检测利用了放大系统。在底物孵育完成之后，按照加底物的顺序依次加入放大试剂。◆ 底物加完之后，轻拍酶标板使其充分混合。底物有可能被污染吗？◆ 是的。如果测定时使用的是碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶标记的结合物，在测定时要注意避免污染。污染可能会导致产生超过酶标仪范围的值。避免与金属或氧化试剂接触。使用新容器。底物是否需要在黑暗环境中进行孵育？◆ 不需要。不过在孵育过程中应避免阳光直射。温度怎样影响结果？◆ 碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶都是光敏感型酶。光密度单位或者相对光单位都会随着温度的改变而变化。◆ 避免在环境条件变化剧烈的地方孵育。（比如通风口，窗口这些温度和光照都剧烈变化的地方）

ELISA信号变化（Signal Development）信号的变化受以下几个因素影响：底物，孵育时间，酶结合物和底物反应失败，波长和仪器。我是否可以更改底物处理的方法？◆ 如果反应物溶液需要混合，确保加入的反应物试剂体积正确并充分混合。混合后的溶液必需在15分钟内使用（化学发光检测最多4小时）。如果反应物混合得太早，则在容器中的颜色可能会发生变化。◆ 如果底物是冻干品或片剂，则根据说明书中的方法用适当体积的稀释液将其完全溶解。混合完全后并在说明书中推荐的时间内使用。

 抗体的制备抗体的制备最常用的动物是兔，但是兔与人、大鼠、小鼠等物种均属于哺乳类动物，虽然大部分的蛋白差异是较大的，但是总有一些如“管家基因”编码的蛋白在各种哺乳动物中是极相似的，这些蛋白，由于结构相近，很难用兔生产出好的抗体的，而与哺乳动物种属差异较大的禽类就是一个很好的选择。于是，鸡受特异性抗原免疫后产生的igy能通过卵黄由母鸡传递给胚胎，其它免疫球蛋白如igm和iga等分子量大，不能渗透过鸡卵黄囊，因而卵黄含有高浓度的靶抗体igy。鸡多抗已经面市，并且在wb检测中，能准确识别组织样本中的目标蛋白，获得了良好的应用体验，最让我们感到欣慰的是，这种“母鸡中的战斗机”，不仅产生了良好的特异性抗体，而且是产蛋率极高的英雄母鸡，目前平均产蛋量达到22枚！ 卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin，igy）类似于其他哺乳动物中的igg，构成鸡的主要免疫球蛋白。常规兔多抗igg，来源于兔血清，而鸡卵黄抗体igy富集于鸡蛋黄中，两者结构差异。sds-pag结果。 

 小分子不能被免疫检测试剂盒检测，是真的么?小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质，被广泛用于医药、农药等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成，存在周期长，检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么免疫检测技术可以用于定量检测小分子吗？免疫检测试剂盒的技术基础就是抗原和抗体的特异性结合，小分子特异性抗体的制备即是小分子免疫检测试剂盒制备的关键之处。小分子由于分子量小，结构简单，在免疫学上划归为半抗原（hapten），即只有免疫反应性而没有免疫原性的一类物质，不能直接刺激机体产生抗体但是却拥有和抗体结合的特性。随着抗体制备技术的发展，小分子特异性抗体的制备技术显得更为多元化（如图所示）。 1、传统小分子特异性抗体制备技术为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生抗体的特性，必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物免疫原性很强的物质：如ova、bsa、klh等偶联，将其制备成完全抗原，通过免疫宿主动物，便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性抗体，这类抗体通过抗原特异性的筛选便能获取目的抗体。目前，通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性抗体的制备，但是也可能由于小分子的结构特异，偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及免疫技术有待发展等多方面的因素使其特异性抗体的制备存在困难。2、基于基因工程技术制备小分子特异性抗体    通过大量的实验发现，小分子的偶联物并不是不能产生特异性针对小分子的抗体，而是效价过低，不满足制备多克隆抗体和单克隆抗体的需要，但是基因工程手段为制备该类型小分子特异性抗体提供了新的思路。该技术的核心在于制备抗体的基因文库，通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取抗体的目的基因，再利用蛋白表达系统制备重组抗体或者改造抗体，以获取针对小分子的特异性抗体。目前随着抗体基因测序信息的公布和完善，为人工设计抗体提供了基础，这也会以后小分子特异性抗体的制备提供了新的途径。小分子能用免疫检测试剂盒检测吗？答案当然是肯定的，尽管小分子抗体制备难度较大，但请不要对他们随意说“no”哦。 

mhc 四聚体技术：检测抗原特异性 t 细胞的金标准细胞在肿瘤、病毒、细菌、寄生虫、移植组织、过敏原、甚至自身抗原的适应性免疫应答中都发挥着重要的调节作用。大部分 t 淋巴细胞在其细胞表面表达单一的、高度特异性的抗原受体（tcr），与 mhc-抗原肽复合物相结合并识别其中特异的抗原肽，启动获得性/特异性免疫应答机制，比如 t 细胞介导的细胞免疫和 b 细胞介导的体液免疫。 由于 tcr 与 mhc-抗原肽复合物之间的亲和力低，半衰期短，相互结合后容易快速脱落，重组的可溶性 mhc-抗原肽复合物单体并不适合用于抗原特异性的 t 细胞检测。 1996 年，美国斯坦福大学 john d. altman 博士等人开发出 mhc-抗原肽复合物四聚体（简称：mhc 四聚体）技术。该技术由 4 个 mhc-抗原肽单体分子及荧光染料组成的复合物，它以带有信号标记的链霉亲合素为基础，交联四个 mhc 分子单体，形成 mhc 四聚体；一个 mhc 四聚体分子可与同一 t 细胞表面的 3-4 个 tcr 相识别并结合，从而大大增强了 mhc-抗原肽复合物与 tcr 之间的结合力和检测特异性，并可通过流式细胞术成功实现对抗原特异性的 t 细胞的离体分析。     如今，mhc 四聚体技术已成为 t 细胞免疫应答定量的「金标准」。它极高的灵敏度和抗原特异性，适用于一些相关的基础研究和临床应用，包括：特异性 t 细胞高效分选；抗原表位短肽亲和力筛选；病毒逃避免疫机制研究；t 细胞表面受体 tcr 亲和力研究；可作为分子标记，应用于「t-cell receptor-like antibodies」筛选研究；mhc 免疫功能研究等。 mhc 四聚体已广泛应用于疫苗研发；细胞治疗研究等。并具备诊断试剂开发潜能。 四聚体技术优势 与其他应用于 t 细胞检测的传统方法相比，如酶联免疫斑点检测（elispot）、单细胞 pcr 等，mhc 四聚体分析技术具有以下优势： ◎ 高灵敏度：可检测血液中低丰度（≤1%）的抗原特异性 t 细胞 ◎ 高特异性：极大提高了 tcr 与 mhc-抗原多肽复合物结合的特异性 ◎ 稳定性好：检测结果一致性好，可重复性高 ◎ 多样化/个性化：可定制，合成特异的抗原多肽片段，组合成各种 t 细胞选择性 mhc 四聚体 ◎ 定性/定量分析：可结合流式细胞术实现对抗原特异性 t 细胞群的定性/定量分析 ◎ 荧光标记选择灵活： 可选用 pe 或者 apc 标记 helixgen mhc 四聚体试剂染色步骤 广州好芝生物推出的 helixgen tm mhc 四聚体产品，能快速、简便地实现对抗原特异性 t 细胞（antigen-specific t cells）的定性与定量分析。 （一）所需主要试剂和设备 1）欲检测的细胞或全血； 2）荧光染料标记 anti-cd8 抗体或其它抗体； 3）离心机、流式细胞分选仪等。 （二）基本操作流程 细胞准备 1. 外周血单核细胞、脾细胞、淋巴细胞、常规细胞系细胞等，以 2-5×107/ml 的密度重悬于 facs buffer（pbs+ 2% 小牛血清+0.1% 叠氮钠；建议使用时新鲜配制），制备成细胞悬浮液。 2. 取 25ul 细胞悬浮液滴加入微孔培养板或 facs 试管。 staining cocktail 制备 3. 制备 2x staining cocktail：facs buffer+ mhc 四聚体（建议稀释比例为 1:50～1:100）+ anti-cd8/fitc 抗体或其他用作内参的抗体（请参考其说明书进行稀释）。 染色孵育 4. 取 25ul 2x staining cocktail，滴加入步骤 2 中的微孔培养板或 facs 试管，与细胞悬浮液混匀。（注意：使用移液器轻柔上下吹打混匀，尽可能避免产生气泡。） 5. 在冰上或其他已通过实验优化确认的最佳温度条件下，避光孵育 60 分钟。 洗涤 6、加入 150ul facs buffer 至微孔培养板每孔或 2-3 ml facs buffer 至 facs 试管，轻柔混匀，避免形成气泡，1200 rpm 离心 5 min，小心除去上清液，尽可能不要触碰到细胞沉淀，减少细胞损失。（注意：对于具有传染性或危害性的样本，可考虑使用吸引器，轻柔吸掉上清液，尽可能不要触碰到细胞沉淀，减少细胞损失。） 7、重复步骤 6，再洗涤 2 次。 细胞固定&流式分析 8、将细胞重悬于 200ul 固定液（pbs+1% 多聚甲醛（pfa））中，使用流式细胞仪进行样本分析。 helixgen mhc 四聚体试剂染色注意事项 1. 染色体系的体积应尽可能小，以节约试剂。例如：25ul 2x staining cocktail + 25ul 细胞悬浮液=50ul。 2. 所有操作应尽量在 4℃ 条件下进行。一些 mhc 四聚体在室温或更高温度条件下，能获得更高强度的亲和力，可提高染色效果。但另一些细胞表面标志物，比如 cd62l，对较高的温度条件往往比较敏感。部分 mhc 四聚体已被证实，在 37℃ 条件下容易与细胞解离。故我们建议：在 4℃ 条件下孵育 45-60 分钟，或在室温条件下孵育 30 分钟。 3. 在进行大规模试验前，建议先进行预试验，以确定最佳的 mhc 四聚体稀释比例。通常，建议 mhc 四聚体的初始稀释比例为 1:100～1:200。请根据具体实验，优化其稀释比例，以期获得最佳的染色效果。4. 对于新鲜的外周血单核细胞、淋巴细胞、脾细胞，通常建议每个染色样品细胞总数为 1-2 ×106；而对于细胞克隆或者 ctl 细胞系，每个样品细胞总数可减低为 2×105。当针对细胞克隆染色时，建议选取具有不同特异性的其它克隆细胞作为阴性对照。 helixgen mhc 四聚体定制服务流程

ELISA实验牛奶样本处理方法在酶联免疫ELISA实验中，涉及到牛奶样本的时候，具体的牛奶样本处理方法有以下两种：样本处理1：取 10ml牛奶放入离心管，加入10ml乙酸乙酯，超声震荡30min，然后4000g离心10min（如两相之间出现乳化层，则将样品瓶放在80℃的水浴 中约5min，再离心）移取1ml乙酸乙酯层至另外试管中，60℃氮气流下蒸干，残留物用缓冲液2ml缓冲后备用，前处理过程约需2小时。 样本处理2：取 10ml牛奶10℃3500G离心10MIN，祛除上层脂肪，取5ml脱脂奶粉加入150微升17.2%亚铁青化钾，出现沉淀，漩涡混合，然后加入150 微升53.5%硫酸锌。再次漩涡混合。15摄氏度3500g离心10分钟，取上层清液用缓冲液1：2稀释待用，前处理过程所需1小时。

2017清明节放假通知　公司各部门及合作伙伴：　　2017年清明节即将来临，根据国务院办公厅关于2017年部分节假日安排的通知，结合我公司实际情况，现将2017年清明节放假安排通知如下：　　4月2日至4月4日放假。其中4月2日(星期日)、4月3日(星期一)为公休、4月4日(星期二，农历清明当日)为法定节假日，4月1日(星期六)正常上班。如有紧急事件请拨打我司服务电话18321282235进行沟通、咨询。特此通知!　　                                                 上海钰博生物科技有限公司　　                                                       2017年4月1日

ELISA测定操作疑问的过程ELISA试剂盒温育这一步是ELISA测定中最简单出现问题的过程，所以有时候一份标本用一样的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，通常就是上述加样及试剂的过错所造成的。加在孔壁上部的非包被区，易致使非特异吸附。其次，如今的产品ELISA试剂盒中的洗板液均需在试验室运用时对所供给的浓缩液稀释制造，因而稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。这么做的意图，首要是为了在后面的温育反响过程中，能使反响微孔内的温度能较快地到达所请求的高度，以满足测定请求。再如医治药物的检查，应根据药代动力学挑选服药后的最适时刻抽血检查。温育所需时刻与温度成反比，即温度越高，则所需时刻相对较短。运用微量加样器加样必需留心的纽带点是：加样不行太快，要防止加在孔壁上部，不行溅起和产气愤泡。对用于激素和医治药物测定的血清标本的搜集，要留心搜集时刻甚或体位有也许会对测定成果发生影响。温育是ELISA测定中影响测定胜败最为纽带的一个因素。ELISA试剂盒如今上运用血清标本测定的标志物通常有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和医治药物等。试剂的参加在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要留心滴加的角度外，滴加的速度也很主要，滴加太快，很容易泛起重复滴加或加在两孔之间的景象，这么就会在孔内的非包被区泛起非特异吸附，从而引起非特异显色。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值泛起：生长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以阵发性方法开释，因而，在测定此类激素时，有必要在严密密切相连的时刻间隔内采取数份血样本，以其间心值为测定值。因而在ELISA测定中试剂的准备最为纽带的是，在试验开端前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在运用前与室温平衡。加血清样本及反响试剂在如今的ELISA试剂盒中，血清样本的参加几乎是独一的要运用微量加样器参加样本的过程。ELISA试剂盒测定现通常为采用手艺操纵的以微孔板条为固相的测定形式，测定操纵非常俭朴，通常涉及到标本的搜集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、成果断定和成果演说及解说等方面，其间任一过程的不妥都会影响测定成果，且尤以加样、温育和洗板等过程为甚。溅起会对接近孔发生污染。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检查的血清标本的搜集则没有时刻和体位方面的影响。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的联系反响在固相长进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原彻底联系，必需在必定的温度前提下反响必定的时刻。

ELISA试剂盒实验需要多长时间？ 我公司ELISA试剂盒商品在研制前期已经过严格的稳定测验，发货前亦须经过检查并供给质检陈述，在市场上深受广大客户的赞许。近日，有位ELISA试验菜鸟来电咨询试验的所需时刻，因为ELISA办法不一样，故而所用的时刻也会不一样。那么一次ELISA试剂盒试验需求多长时刻呢？技术员介绍：双抗体夹心ELISA法一次试验需求4-4.5小时，竞赛ELISA法一次试验需求2-2.5小时。酶生机的测定实际上就是测定酶促反响的速率。酶生机的巨细即酶含量的多少，可以用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶单位来表明，单位是U/g或U/ml。酶生机的测定办法：①测定完结一定量反响所需的时刻；②测定单位时刻内酶催化化学反响量。首要经过产品的增加量或底物的减少数来测定。常用的办法有：①分光光度法；②荧光法；③同位素测定法；④电化学法。ELISA试剂盒的办法通常是对可溶性抗原或抗体进行定性和定量的检查，所以酶活性是不能用ELISA来检查的。生化测定的烦难首要在于下列几个方面：查阅文献挑选测定办法，制造试剂，预试验以判别该办法是不是合适自个的研讨资料，重复调整以优化测定系统和测定过程。对于研讨经历和测定练习都缺乏的研讨生而言，上述烦难常常会形成测定重复失败，导致时刻、样品和试剂的很多糟蹋，不能及时获得牢靠的数据。