人扁桃体成纤维细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
人扁桃体成纤维细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
人扁桃体成纤维细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
人扁桃体成纤维细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
人扁桃体成纤维细胞相关产品展示:
yb-8503荧光素酶转染人成骨肉瘤细胞,U2OS-Luc teT-on细胞
yb-8504荧光假单胞菌
yb-8505婴儿双歧杆菌
yb-8506隐甲藻
yb-8507阴沟肠杆菌
yb-8508异型酒香酵母
yb-8509已型副伤寒沙门氏菌
yb-8510乙型溶血性链球菌
yb-8511乙酸钙不动杆菌
yb-8512胰腺癌细胞,PANC-1细胞
yb-8513洋葱假单胞菌
yb-8514羊膜细胞,WISH细胞
yb-8515烟酸芽孢杆菌
yb-8516烟曲霉
yb-8517亚利桑那沙门氏菌
yb-8518熏衣草灰链霉菌
yb-8519血细胞瘤细胞系 Ramos细胞
yb-8520叙利亚仓鼠肾细胞,BHK-21细胞
yb-8521许旺酵母变种
yb-8522许旺酵母
yb-8523休哈塔假丝酵母
yb-8524胸膜细胞瘤) SMC-1细胞
yb-8525新生牛眼晶体上皮细胞,NBLE细胞
yb-8526新生牛眼Tenon's囊成纤维细胞,NBTF细胞
yb-8527新鞘氨醇单胞菌
yb-8528谢氏丙酸杆菌
yb-8529小细胞肺癌细胞,NCI-H446 [H446]细胞
yb-8530小鼠自发高乳腺癌细胞,TA2细胞
yb-8531小鼠子宫颈癌细胞,U14细胞
yb-8532小鼠脂肪细胞,L13T3细胞
yb-8533小鼠脂肪细胞,3T3-L1细胞
yb-8534小鼠正常肝细胞,NCTC1469细胞
yb-8535小鼠杂交瘤细胞CD25 PC61细胞
yb-8536小鼠杂交瘤细胞,ST2/o细胞
yb-8537小鼠原成骨细胞,MC3T3-E1 Subclone 14细胞
yb-8538小鼠原B细胞株 BaF3细胞
yb-8539小鼠胰腺腺泡细胞癌细胞,MPC-83细胞
yb-8540小鼠胰腺癌细胞,LTPA细胞
yb-8541小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞,Beta-TC-6细胞,
yb-8542小鼠胰岛素瘤β细胞(NOD/Lt转基因小鼠,SV40巨T抗原) NIT-1细胞
yb-8543小鼠胰岛素瘤β细胞,NIT-1β细胞,
yb-8544小鼠胰岛内皮细胞,MS1细胞,
yb-8545小鼠胰岛β细胞株 Min6细胞
yb-8546小鼠血细胞,WEHI-3细胞
yb-8547小鼠血管瘤内皮细胞,EOMA细胞,
yb-8548小鼠小胶质细胞,BV2细胞
yb-8549小鼠胃癌细胞,MFC细胞,
yb-8550小鼠网织细胞肉瘤 M5076细胞
yb-8551小鼠饲养层上皮细胞,HPT-8细胞