小鼠小胶质细胞具体操作:
1.首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍,(这是前奏,即为第一步,目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。
2.然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步(可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)。
3.吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)这是第三步。
4.然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,呵呵。继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况你自己把握)。
小鼠小胶质细胞应用举例:
1.细胞表面分子的检测与分析;
2.细胞内或细胞核内抗原检测与分析——如胞内细胞因子、调节性T细胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
3.细胞凋亡的检测与分析——如PI单染法、Annexin-V-PI复染法、末端转移酶标记技术(TUNEL)、细胞周期特异性细胞凋亡的检测(PI-Annexin-V,PA法);
4.DNA含量检测与细胞周期的分析——如药物对细胞周期的影响、流式细胞核型分析;
5.细胞增殖的检测与分析。
小鼠小胶质细胞服务流程:
1.根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
2.进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
3.杀伤曲线绘制;
4.转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
5.qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
小鼠小胶质细胞注意事项:
1. 原代培养,一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限,如果不冻存,体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次,因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
一般实验流程
1筛选浓度测定:以10~14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度
2细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖
3细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6)
4利用质粒上含有的抗性选择进行筛选
5鉴定筛选结果
小鼠小胶质细胞相关产品展示:
yb-10012小鼠胰岛内皮细胞MS1
yb-10013小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6
yb-10014小鼠结肠癌细胞CT26.WT
yb-10015小鼠骨肉瘤成骨细胞K7M2 wt [K7M2-WT]
yb-10016小鼠肝癌细胞Hepa 1-6
yb-10017小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14MC3T3-E1 Subclone 14
yb-10018小鼠骨髓基质细胞OP9
yb-10019小鼠肾腺癌细胞RAG
yb-10020小鼠肾小球系膜细胞SV40 MES 13
yb-10021小鼠肾上腺皮质瘤细胞Y1
yb-10022小鼠肥大细胞瘤细胞P815
yb-10023小鼠前列腺癌细胞RM-1
yb-10024小鼠睾丸间质细胞瘤细胞MLTC-1
yb-10025小鼠睾丸间质细胞TM3
yb-10026小鼠畸胎瘤细胞F9
yb-10027小鼠畸胎瘤细胞P19
yb-10028小鼠乳腺癌细胞4T1
yb-10029小鼠乳腺肿瘤细胞C127
yb-10030小鼠肺癌细胞LLC
yb-10031小鼠腹水瘤细胞S-180
yb-10032小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]
yb-10033小鼠垂体瘤细胞AtT-20
yb-10034小鼠骨髓瘤细胞FO
yb-10035小鼠骨髓瘤细胞P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]
yb-10036小鼠骨髓瘤细胞P3X63Ag8
yb-10037小鼠骨髓瘤细胞P3X63Ag8.653
yb-10038小鼠骨髓瘤细胞SP2/0
yb-10039小鼠淋巴样瘤细胞P388D1
yb-10040小鼠淋巴瘤细胞EL4
yb-10041小鼠淋巴瘤细胞YAC-1
yb-10042小鼠淋巴瘤细胞L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)
yb-10043小鼠巨噬细胞Ana-1
yb-10044小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7
yb-10045小鼠白血病细胞L1210
yb-10046小鼠白血病克隆细胞系L6565
yb-10047小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1
yb-10048人表皮癌细胞A-431
yb-10049人纤维肉瘤HT-1080
yb-10050人口腔表皮样癌细胞KB
yb-10051人咽鳞癌细胞FaDu
yb-10052人甲状腺导管癌细胞TT
yb-10053人甲状腺鳞癌细胞SW579 [SW 579; SW-579]
yb-10054人食管癌细胞TE-1
yb-10055人胃癌细胞NCI-N87 [N87]
yb-10056人胃癌细胞MGC80-3
yb-10057人胃癌细胞(未分化)HGC-27
yb-10058人胃腺癌细胞AGS
yb-10059人胃腺癌细胞SGC-7901