Wako Pure Chemical ScreenFect? siRNA Transfection reagent 299-75001检测试剂盒

Wako Pure Chemical  ScreenFect? siRNA Transfection reagent  299-75001检测试剂盒

【品名】ScreenFect? siRNA Transfection Reagent

Wako Pure Chemical  ScreenFect? siRNA Transfection reagent  299-75001检测试剂盒

咨询电话：

ScreenFect? siRNA高性能 转染试剂,

 【货号和规格】

299-75001  0.2ml

295-75003  1ml

293-75004  1ml×5

【保存条件】2-8度

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【产品特点】 可以与任何市售任何优质血清和抗生素兼容

成功转染后，不需要再另外更换培养基

SiRNA 转染的缓冲液是配套的，且经过优化

细胞毒性低

SiRNA使用量小，低浓度siRNA即可高效诱导基因沉默

为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点：

1.纯化siRNA

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在转染前要确认siRNA的大小和纯度。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。

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2.避免RNA酶污染

微量的RNA酶将导致siRNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等，此保证实验每个步骤不受RNA酶污染非常重要。

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3.健康的细胞培养物和严格的操作确保转染的重复性

通常，健康的细胞转染效率较高。此外，较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。为了优化实验，推荐用50代以下的转染细胞，否则细胞转染效率会随时间明显下降。

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4.避免使用抗生素

Ambion公司推荐从细胞种植到转染后72小时期间避免使用抗生素。抗生素会在穿透的细胞中积累毒素。有些细胞和转染试剂在siRNA转染时需要无血清的条件。这种情况下，可同时用正常培养基和无血清培养基做对比实验，以得到最佳转染效果。

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5.选择合适的转染试剂

针对siRNA制备方法以及靶细胞类型的不同，选择好的转染试剂和优化的操作对siRNA实验的成功至关重要。

6.通过合适的阳性对照优化转染和检测条件

对大多数细胞，看家基因是较好的阳性对照。将不同浓度的阳性对照的siRNA转入靶细胞（同样适合实验靶siRNA），转染48小时后统计对照蛋白或mRNA相对于未转染细胞的降低水平。过多的siRNA将导致细胞毒性以至死亡。

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7.通过标记siRNA来优化实验

荧光标记的siRNA能用来分析siRNA稳定性和转染效率。标记的siRNA还可用作siRNA胞内定位及双标记实验（配合标记抗体）来追踪转染过程中导入了siRNA的细胞，将转染与靶蛋白表达的下调结合起来。

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