关于ELISA猪瘟单克隆抗体

（一）材料及试剂 
1．猪瘟单抗纯化抗原 
2．兔抗猪IgG酶标抗体 
3．猪瘟阳性血清 
4．猪瘟阴性血清 
1～4均由指定的生物制品所购买。 
5．elisa反应板 
6．包被液 
碳酸钠 1.50g 
碳酸氢钠 2.93g 
H2O加至 1 000ml 
pH值9.6 
7．PBS液 
氯化钠 8.90g 
磷酸二氢钾 0.20g 
无水磷酸氢二钠 2.13g 
加双馏水 1 000ml 
8．PBS－吐温洗涤液 
PBS液 1 000ml 
犊牛血清 5ml 
混合即可 
9．底物溶液 
⑴ 0.1Mol/L柠檬酸液 
柠檬酸 21g 
双蒸馏水加至 1 000ml 
⑵ 0.2Mol/L Na2HPO4液 
Na2HPO4·12H2O 71.6g 
双蒸馏水 加至 1 000ml 
⑶ pH5.0磷酸盐－柠檬酸缓冲液 
取⑴液 24.30ml 
⑵液 25.70ml 
混匀即可 
⑷邻苯二胺液 
取⑶液 50ml 
双馏水 50ml 
磷苯二胺 20mg 
30%H2O2 0.15ml 
待邻苯二胺溶化后再加H2O2，现用现配。 
10．终止液 
浓H2SO4(98%) 22.2ml 
H2O 177.80ml 
（二）操作方法 
1．用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释，每孔包被100μl，4℃湿盒过夜。 
2．次日取出，甩去孔内液体，3×3′冲洗。 
3．将待检血清以PBS液做400倍稀释，每孔加100μl同时将猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清各做100倍稀释，于对照孔中加100μl。37℃温育1.5h～2h。 
4．重复第二步，取出，甩去孔内液体，3×3′洗涤。 
5．将兔抗猪IgG酶标抗体以PBS液做100倍稀释，每孔加100μl，37℃温育1.5h～2h。 
6．重复第4步。 
7．每孔加底物溶液100μl，室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时，立即终止反应，并以阴性孔做空白对照。 
8．每孔加终止液50μl立即于酶联免疫吸附检测仪测定490nm波长的光密度。 
（三）结果判定 
在猪瘟弱毒酶联板上，OD≥0.2，为猪瘟弱毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟弱毒抗体阴性。 
在猪瘟强毒酶联板上，OD≥0.5，为猪瘟强毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟强毒抗体阴性。