因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。标本保存不当。在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA检测试剂盒测定中会导致本底过深、造成假阳性;为克服上述干扰,ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。
塑料试管能吸附抗原物质,样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。最好使用真空采血管;并使用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。
1、 血清
血清是最常用于ELISA检测试剂盒的一类样本。用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过一夜,使血清析出。(最好将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测试剂盒中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
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