ELISA试剂盒的包被方式

基免

2015/08/12 07:02

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因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法,试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如30W紫外灯，75cm照射12小时），以增加其吸附性能。例如，ELISA试剂盒在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包被法，ELISA试剂盒即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。也可用亲和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。

IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结多发生在Fc段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。间接包被的另一优点是抗原用量少，仅为直接包被的1/10乃至于/100，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，抗心磷脂抗体的ELISA试剂盒一般采用这种包被方式。固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。