如何让ELISA实验更完美?

基免

2014/10/16 16:17

阅读：91

在策划实验之前首要就要了解到该实验的复杂性，虽说ELISA操作简单，却步骤多而复杂，完美的ELISA实验如何执行操作？上海恒远教您几招实验注意：

看似很无聊，其实很重要的洗涤步骤中，如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。如有必要，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。

洗板方法有手工与自动两种，在加样步骤中注意：吸嘴的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊，导致清洗困难，加大了交叉污染的机会。建议用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗，定期校准。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。

试剂盒规格有96T与48T两种，上海恒远所提供的高质量进口试剂盒供实验室研究使用，需要在2-8℃温度中保存，有效期为半年，也就是6个月。

1. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

2. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

3. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

ELISA包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一个晚上，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。

能够熟练的掌握好ELISA实验的每一步注意与技巧之后还怕结果不佳？配上上海恒远优质ELISA试剂盒定能助您实验成功！