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鹅瘟病毒(GPV)ELISA检测试剂盒说明书

2015-06-17 16:17

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鹅瘟病毒(GPV)ELISA检测试剂盒说明书 样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 酶标仪(450nm) 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 37℃恒温箱 操作注意事项 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 所有液体组分使用前充分摇匀。 操作步骤 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。 设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL; 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL; 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

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大鼠醛固酮(ALD)酶联免疫分析 检测范围: 96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中醛固酮(ALD)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠醛固酮(ALD)水平。用纯化的大鼠醛固酮 (ALD)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入醛固酮(ALD),再与 HRP 标记的醛固酮(ALD)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底 物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的醛固酮(ALD)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠醛固酮(ALD)浓度。

操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 2400ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 1200ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液 600ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液 300ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液 150ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl, 然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此 重复5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7. 温育:操作同3。 8. 洗涤:操作同5。 9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 10 分钟. 10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后15 分钟以内进行。 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6 个月

实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠降钙素CT水平。用纯化的大鼠降钙素(CT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入降钙素(CT),再与HRP标记的降钙素(CT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的降钙素(CT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠降钙素(CT)浓度。 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 480ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 加样:大鼠降钙素CT分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 温育:操作同3。 洗涤:操作同5。 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 400ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 200ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 100ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 50ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 鸡皮质酮CS如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月

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