血管生成实验数据怎么分析，这些秘诀您都知道么？

 　　管形成实验是一种简单但高效的的体外研究方法，用于筛选具有抗血管生成或促血管生成效果的物质。这些效果可以通过不同的参数来衡量，例如管的长度或凝胶表面上形成的环状结构数量。

　　要从管形成实验中得出高效的分析结果，需要在实验前、实验中和实验后考虑几个方面，以确保结果的准确性和可重复性。

　　本应用提供了在收集管形成实验数据后进行分析的指南，并专注于分析和解释这些数据。为优化您的实验，请阅读应用: Optimizing Tube Formation Assays优化管形成实验。

　　ibidi为血管生成实验提供多种解决方案：

　　1、管形成和血管生成分析的输出参数

　　“管”一词描述的是在二维网状中可见的细胞索，它 并不一定意味着这些细胞索有管腔。在管形成实验中，可以从相位对比图像中确定四个关键参数，如下图所示：• 细胞覆盖面积[%] (蓝色区域)• 管长度[px] (红色线条)• 分支点数 (白色点)• 环状结构数量 (黄色数字)这些关键参数在实验过程中彼此之间表现出一致的关系。因此，仅确定一个特征可能就足够了：在本应用说明中，仅将管的长度作为管形成的代表性值。

　　相位图像（A）和分析图像（B）显示了管形成分析的关键特征：细胞覆盖面积（蓝色）、管（红色）、环路（黄色）和分支点（白色）。根据这些参数，可以计算出其它值，如平均管长、总管长和环的平均面积。

　　从这些参数可以计算出更多的值，如平均管长、总管长度和环状结构的平均面积。

　　1.1、计算总管长度

　　可以使用专用于管形成实验分析的各种软件进行图像分析。

　　自动化管形成分析的示例输出示例

　　2、统计分析

　　血管形成是一个涉及各种各样的生化反应和信号通路复杂的过程。因此，建议每种处理条件至少使用三个生物学重复样本进行统计分析，以获得代表性值。

　　为了进行可靠的分析并获得平均值，我们推荐对每个条件进行多孔分析和复制。例如，每个被分析的孔都会得出一个管长值。这些值应该针对每个条件进行平均，并计算标准偏差。从同一载玻片上在相同条件下收集的数据点之间的标准偏差应小于10%。如果孔与孔之间的变化差异太大，则应参考以下应用指南来优化实验条件：Optimizing  Tube  Formation Assays。

　　以下图表示例性地显示了在两种不同条件（Condition1与Condition2）下生长在 Matrigel®基质胶上的HUVEC细胞的总管长。使用搭载于相差显微镜上的ibidi Stage Top Incubator进行成像。对于每种条件，在四个不同的时间点（0h、4h、6h 及24h）分别对八个独立的孔进行了成像。

　　对两种生物条件下，四个不同时间点(0小时、4小时、6小时和24小时)的八个独立孔的总管长度进行示例性数据分析。单个数据以点状图(左侧)和箱线图（右侧）的形式显示。

　　这些单一数据点随后被聚合并展示在一个箱线图中。统计分析可以通过例如方差分析（ANOVA）或t检验（Student’s t-test）来进行，其中将不同条件的数据点相互测试。例如，t检验（Student’s t-test）提供了证据，表明两个独立的、具有t分布值的数据集之间是否存在统计学上的显著差异。