人防御素α6(DEFα6)ELISA试剂盒

人防御素Α6(DEFΑ6)ELISA试剂盒实验方法操作标准，用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆)，有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。

(1) 人防御素Α6(DEFΑ6)ELISA试剂盒戊二醛二步法：

1) 原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。

2) 人防御素Α6(DEFΑ6)ELISA试剂盒标记步骤：

(1) 称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室温静置过夜。

(2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱，用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟，收集棕色流出液。如体积大于5ml，则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中，缓慢搅拌。

(3) 人防御素Α6(DEFΑ6)ELISA试剂盒将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml，搅拌下逐滴加入酶溶液中。

(4) 用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml，继续搅拌3?小时。)

(5) 加0.2M赖氨酸0.25ml，混匀后，置室温2小时。

(6) 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时。

(7) 3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

(8) 人防御素Α6(DEFΑ6)ELISA试剂盒将上述溶液装入透析袋中，对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析，去除铵离子后(用萘氏试剂检测)，10,000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，分装后，冰冻保存。

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