大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 检测试剂盒

大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 检测试剂盒

本试剂仅供研究使用 

试验原理：

FⅧ-Ag试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知FⅧ-Ag浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将FⅧ-Ag和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中FⅧ-Ag的活性浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

自备材料

1．  蒸馏水。

2．  加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．  避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．  实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．  不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 检测试剂盒操作注意事项

1．  试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．  实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．  不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4．  使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5．  使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6．  洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7．  底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8．  加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9．  按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法

1、  血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、  血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、  细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、  保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1．  标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

2．  洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA 检测试剂盒操作步骤

1．  使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．  根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3．  加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．  甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．  每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．  甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．  取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．  在450nm波长处测定各孔的OD值。

性能

1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

结果 判 断 与 分 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的FⅧ-Ag标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的FⅧ-Ag含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/ml

相关产品如下：

XY-EL-GP0461c 豚鼠S100钙结合蛋白A12(S100A12 )ELISA试剂盒 Guinea pig S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit

XY-EL-GP0462c 豚鼠细胞色素P450家族成员1A2(CYP1A2)ELISA试剂盒 Guinea pig CYP1A2 (Cytochrome P450 1A2) ELISA Kit 

XY-EL-GP0463c 豚鼠Dickkopf 相关蛋白2(DKK2)ELISA试剂盒 Guinea pig DKK2 (Dickkopf Related Protein 2) ELISA Kit 

XY-EL-GP0464c 豚鼠白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒 Guinea pig LIFR (Leukemia Inhibitory Factor Receptor) ELISA Kit 

XY-EL-GP0465c 豚鼠接触蛋白4(CNTN4)ELISA试剂盒 Guinea pig CNTN4 (Contactin 4) ELISA Kit 

XY-EL-GP0466c 豚鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒 Guinea pig FE (Ferritin) ELISA Kit

XY-EL-GP0467c 豚鼠增殖细胞核抗原(PCNA)ELISA试剂盒 Guinea pig PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit

XY-EL-GP0468c 豚鼠衰老关键蛋白4(FBLN4)ELISA试剂盒 Guinea pig FBLN4 (Fibulin 4) ELISA Kit

XY-EL-GP0470c 豚鼠乳脂球表皮生长因子8 (MFG-E8)ELISA试剂盒 Guinea pig MFG-E8 (Milk Fat Globule EGF Factor 8) ELISA Kit

XY-EL-GP0471c 豚鼠性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 Guinea pig SHBG (Sex Hormone Binding Globulin) ELISA Kit

XY-EL-GP0472c 豚鼠血栓前体蛋白(TpP)ELISA试剂盒 Guinea pig TPP (Thrombus Precursor Protein) ELISA Kit

XY-EL-GP0474c 豚鼠乳酸脱氢酶B(LDHB)ELISA试剂盒   Guinea pig LDHB (Lactate Dehydrogenase B) ELISA Kit 

XY-EL-GP0475c 豚鼠甲状旁腺激素样蛋白(PLP)ELISA试剂盒 Guinea pig PLP (Parathyroid Hormone-Like Protein) ELISA Kit

XY-EL-GP0476c 豚鼠热休克蛋白27(HSP-27/HSPB1)ELISA试剂盒 Guinea pig HSP-27/HSPB1 (Heat Shock Protein 27) ELISA Kit

XY-EL-GP0477c 豚鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)ELISA试剂盒 Guinea pig NOX1 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1) ELISA Kit 

XY-EL-GP0478c 豚鼠八聚体结合转录因子1(OBTF1)ELISA试剂盒 Guinea pig OBTF1 (Octamer Binding Transcription Factor 1) ELISA Kit 

XY-EL-GP0479c 豚鼠蛋白酪氨酸磷酸酶受体N(PTPRN)ELISA试剂盒 Guinea pig PTPRN (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit

XY-EL-GP0480c 豚鼠细胞外基质磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA试剂盒 Guinea pig MEPE (Matrix Extracellular Phosphoglycoprotein) ELISA Kit

XY-EL-GP0481c 豚鼠活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA试剂盒 Guinea pig FⅫa (Activated Coagulation Factor Ⅻ) ELISA Kit

XY-EL-GP0482c 豚鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒 Guinea pig ALP (Alkaline Phosphatase) ELISA Kit

XY-EL-GP0483c 豚鼠核糖核酸酶III(RNASEN)ELISA试剂盒 Guinea pig RNASEN (Ribonuclease III, Nuclear) ELISA Kit

XY-EL-GP0484c 豚鼠多药耐药相关蛋白1(MRP1)ELISA试剂盒 Guinea pig MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit

XY-EL-GP0485c 豚鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒 Guinea pig PDGF-AB (Platelet Derived Growth Factor AB) ELISA Kit 

XY-EL-GP0486c 豚鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒 Guinea pig ACA-IgM (Anti-Cardiolipin Antibody IgM) ELISA Kit

XY-EL-GP0487c 豚鼠绒毛膜促性腺激素(CG)ELISA试剂盒 Guinea pig CG (Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit

XY-EL-GP0488c 豚鼠角质转谷氨酰胺酶(TGM1)ELISA试剂盒 Guinea pig TGM1 (Transglutaminase 1, Keratinocyte) ELISA Kit

XY-EL-GP0489c 豚鼠胰蛋白酶原II(Try2)ELISA试剂盒 Guinea pig Try2 (Trypsinogen II) ELISA Kit

XY-EL-GP0490c 豚鼠钙调磷酸酶结合蛋白1(CABIN1)ELISA试剂盒 Guinea pig CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 

XY-EL-GP0491c 豚鼠解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒 Guinea pig ADAM9 (A Disintegrin And Metalloprotease 9) ELISA Kit 

XY-EL-GP0492c 豚鼠失调症蛋白质2(ATXN2)ELISA试剂盒 Guinea pig ATXN2 (Ataxin 2) ELISA Kit