人胃动素(MTL)ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 标本:组织匀浆
试验原理:
MTL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知MTL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将MTL和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中MTL活性浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48份酶标板 | 1块板(96T) | 半块板(48T) | 即用型 |
塑料膜板盖 | 1块 | 半块 | 即用型 |
标准品:400pg/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按说明书进行稀稀 |
空白对照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
标准品稀释缓冲液 | 1瓶(5ml) | 1瓶(2.5ml) | 即用型 |
生物素标记的抗MTL抗体 | 1瓶(6ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
亲和链酶素-HRP | 1瓶(10ml) | 1瓶(5.0ml) | 即用型 |
洗涤缓冲液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按说明书进行稀释 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
终止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
人胃动素(MTL)ELISA 检测试剂盒操作注意事项
1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
人胃动素(MTL)ELISA 检测试剂盒样品收集、处理及保存方法
1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
400pg/ml | (6号标准品) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。 |
200pg/ml | (5号标准品) | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
100pg/ml | (4号标准品) | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
50pg/ml | (3号标准品) | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
25pg/ml | (2号标准品) | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
12.5pg/ml | (1号标准品) | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
0pg/ml | (空白对照) | 原始浓度不用稀释直接加入50ul。 |
2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
人胃动素(MTL)ELISA 检测试剂盒操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
结果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的MTL标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的MTL含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-400pg/ml
4、敏感度: 1.0pg/ml
相关产品如下:
XY-EL-R1002c 大鼠正五聚蛋白3(PTX3)ELISA试剂盒 Rat PTX3 (Pentraxin 3) ELISA Kit
XY-EL-R1003c 大鼠20S-蛋白酶体(20S-PSM)ELISA试剂盒 Rat 20S-PSM (20S-Proteasome) ELISA Kit
XY-EL-R1004c 大鼠细胞角蛋白18(CK-18/KRT18)ELISA试剂盒 Rat CK-18/KRT18 (Cytokeratin 18) ELISA Kit
XY-EL-R1005c 大鼠转录因子20(TCF20)ELISA试剂盒 Rat TCF20 (Transcription factor 20) ELISA Kit
XY-EL-R1006c 大鼠雌激素受体相关受体α(ERRα)ELISA试剂盒 Rat ERRα (Estrogen Related Receptor Alpha) ELISA Kit
XY-EL-R1007c 大鼠α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA试剂盒 Rat α2-AP (α2-Antiplasmin) ELISA Kit
XY-EL-R1008c 大鼠转铁蛋白受体蛋白2(TFR2)ELISA试剂盒 Rat TFR2 (Transferrin Receptor Protein 2) ELISA Kit
XY-EL-R1009c 大鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒 Rat TFR (Transferrin Receptor) ELISA Kit
XY-EL-R1010c 大鼠白介素24 (IL-24)ELISA试剂盒 Rat IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit
XY-EL-R1011c 大鼠转化生长因子受体β(TGF-βR)ELISA试剂盒 Rat TGF-βR (Transforming Growth Factor Receptor) ELISA Kit
XY-EL-R1012c 大鼠转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒 Rat TGF-α (Transforming Growth Factor Alpha) ELISA Kit
XY-EL-R1014c 大鼠血小板膜糖蛋白IV (GP4/CD36)ELISA试剂盒 Rat GP4/CD36 (Platelet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit
XY-EL-R1015c 大鼠转化生长因子β2(TGF-β2)ELISA试剂盒 Rat TGF-β2 (Transforming Growth Factor Beta 2) ELISA Kit
XY-EL-R1016c 大鼠转化生长因子β3(TGF-β3)ELISA试剂盒 Rat TGF-β3 (Transforming Growth Factor Beta 3) ELISA Kit
XY-EL-R1017c 大鼠诱导转化生长因子β1(TGF βI)ELISA试剂盒 Rat TGFβI (Transforming Growth Factor Beta Induced) ELISA Kit
XY-EL-R1018c 大鼠转化生长因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA试剂盒 Rat TSC22 (Transforming Growth Factor Beta Stimulated Protein Clone 22) ELISA Kit
XY-EL-R1019c 大鼠谷氨酰胺转移酶(TG)ELISA试剂盒 Rat TG (Transglutaminase) ELISA Kit
XY-EL-R1020c 大鼠跨膜emp 24域含有蛋白质1(TMED1)ELISA试剂盒 Rat TMED1(Transmembrane Emp24 Domain Containing Protein 1) ELISA Kit
XY-EL-R1021c 大鼠转运蛋白1(TNPO1)ELISA试剂盒 Rat TNPO1(Transportin 1) ELISA Kit
XY-EL-R1022c 大鼠甲状腺素转运蛋白(TTR)ELISA试剂盒 Rat TTR (Transthyretin) ELISA Kit
XY-EL-R1023c 大鼠三叶因子2(TFF 2)ELISA试剂盒 Rat TFF2 (Trefoil Factor 2) ELISA Kit
XY-EL-R1024c 大鼠肠三叶肽因子3(TFF3)ELISA试剂盒 Rat TFF3 (Trefoil Factor 3, Intestinal) ELISA Kit
XY-EL-R1025c 大鼠髓系细胞触发受体-1(TREM-1)ELISA试剂盒 Rat TREM-1 (Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit
XY-EL-R1027c 大鼠抑制素B(INHB)ELISA试剂盒 Rat INHB (Inhibin B) ELISA Kit
XY-EL-R1029c 大鼠胰蛋白酶(TRY)ELISA试剂盒 Rat TRY (Trypsin) ELISA Kit
XY-EL-R1030c 大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA试剂盒 Rat TAP (Trypsinogen Activation Peptide) ELISA Kit
XY-EL-R1033c 大鼠微管蛋白β(TUBB)ELISA试剂盒 Rat TUBB (Tubulin Beta) ELISA Kit
XY-EL-R1034c 大鼠微管蛋白聚合促进蛋白(TPPP)ELISA试剂盒 Rat TPPP (Tubulin Polymerization Promoting Protein) ELISA Kit
XY-EL-R1036c 大鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员1B(TNFRSF1B)ELISA试剂盒 Rat TNFRSF1B (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1B) ELISA Kit
XY-EL-R1037c 大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒 Rat TNF-β (Tumor Necrosis Factor β) ELISA Kit
XY-EL-R1038c 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒 Rat TRAIL R1 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand 1) ELISA Kit
XY-EL-R1039c 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒 Rat TRAIL R3 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand 3) ELISA Kit
XY-EL-R1040c 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒 Rat TRAIL R4 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand 4) ELISA Kit
XY-EL-R1041c 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL/TNFSF10)ELISA试剂盒 Rat TRAIL/TNFSF10 (Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand) ELISA Kit
XY-EL-R1042c 大鼠肿瘤蛋白53(TP53)ELISA试剂盒 Rat TP53 (Tumor Protein 53) ELISA Kit
XY-EL-R1043c 大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)ELISA试剂盒 Rat TSGF (Tumor Specific Growth Factor/Tumor Supplied Group of Factor) ELISA Kit
XY-EL-R1045c 大鼠酪氨酸酶(TYR)ELISA试剂盒 Rat TYR (Tyrosinase) ELISA Kit
XY-EL-R1046c 大鼠酪氨酸激酶B(TRKB)ELISA试剂盒 Rat TRK B (Tyrosine Kinase B) ELISA Kit