在小鼠肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。
ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立小鼠肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)ELISA试剂盒方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成最多的沉淀。但因所需时间太长,在小鼠肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)ELISA试剂盒中一般不予采用。
保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,一般均采用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,最后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应,操作时的室温应严格限制在规定的范围内,标准室温温度是指20-25℃,但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时,ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点,一个人操作时,一次不宜多于两块板同时测定。
小鼠肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)ELISA试剂盒检测方法简单,灵敏度高,我个人觉得ELISA最适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量检测;病原体抗原的定性与定量;评估自己制备的血清抗体的效价等。好多客户有个误区,拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测,我还是建议多动脑,该检测活性的检测活性,该做western的做western。
xyA741Ra大鼠Dickkopf相关蛋白1(DKK1)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Dickkopf Related Protein 1 (DKK1)
xyF880Ra大鼠分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for HZcreted Frizzled Related Protein 1 (SFRP1)
xyC442Ra大鼠双肾上腺皮质激素(DCX)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Doublecortin (DCX)
xyE118Ra大鼠肝配蛋白B受体3(EPHB3)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Ephrin Type B ReHZptor 3 (EPHB3)
xyF609Ra大鼠肌微管素相关蛋白9(MTMR9)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Myotubularin Related Protein 9 (MTMR9)
xyF834Ra大鼠转化受体电位阳离子通道亚家族M成员4(TRPM4)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Transient ReHZptor Potential Cation Channel Subfamily M, Member 4 (TRPM4)
xyD513Ra大鼠促肾上腺皮质素释放激素受体2(CRHR2)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Corticotropin Releasing Hormone ReHZptor 2 (CRHR2)
xyD558Ra大鼠丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶6(MAP3K6)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Mitogen Activated Protein KinaHZ KinaHZ KinaHZ 6 (MAP3K6)
xyB019Ra大鼠血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 4 (ANGPTL4)
xyB699Ra大鼠血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Angiopoietin Like Protein 3 (ANGPTL3)
xyA518Ra大鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Ferritin (FE)
xyH519Ra大鼠神经突蛋白1(NRN1)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Neuritin 1 (NRN1)
xyC374Ra大鼠羧酸酯酶1(HZS1)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for CarboxylesteraHZ 1 (HZS1)
xyE675Ra大鼠再生胰岛衍生蛋白3α(REG3α)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Regenerating Islet Derived Protein 3 Alpha (REG3a)
xyC842Ra大鼠分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for HZcreted Frizzled Related Protein 5 (SFRP5)
xyH839Ra大鼠异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Isocitrate DehydrogenaHZ 1, Soluble (IDH1)
xyG393Ra大鼠氢离子转运ATP酶溶酶体辅助蛋白2(ATP6AP2)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for ATPaHZ, H+ Transporting, Lysosomal AcHZssory Protein 2 (ATP6AP2)
xyA752Ra大鼠环腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Cyclic ADP RiboHZ HydrolaHZ (cADPRH)
xyL907Ra大鼠N-myc下游调节基因2(NDRG2)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for N-myc Downstream Regulated Gene 2 (NDRG2)
xyD063Ra大鼠70kDa热休克蛋白8(HSPA8)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Heat Shock 70kDa Protein 8 (HSPA8)
xyD195Ra大鼠Ⅲ型胶原α1(COL3α1)ELISA试剂盒原理ELISA Kit for Collagen Type III Alpha 1 (COL3a1)