在小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。
ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。
温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)ELISA试剂盒方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成最多的沉淀。但因所需时间太长,在小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)ELISA试剂盒中一般不予采用。
保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,一般均采用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,最后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应,操作时的室温应严格限制在规定的范围内,标准室温温度是指20-25℃,但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时,ELISA板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点,一个人操作时,一次不宜多于两块板同时测定。
小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)ELISA试剂盒检测方法简单,灵敏度高,我个人觉得ELISA最适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量检测;病原体抗原的定性与定量;评估自己制备的血清抗体的效价等。好多客户有个误区,拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测,我还是建议多动脑,该检测活性的检测活性,该做western的做western。
xyF756Hu 人过氧化还原酶6(PRDX6)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Peroxiredoxin 6 (PRDX6)
xyF819Hu 人张力蛋白3(TNS3)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Tensin 3 (TNS3)
xyF863Hu 人胞裂蛋白3(SEPT3)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Septin 3 (SEPT3)
xyF952Hu 人Nesprin 2蛋白(Nesp2)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Nesprin 2 (Nesp2)
xyF953Hu 人Nesprin 1蛋白(Nesp1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Nesprin 1 (Nesp1)
xyF994Hu 人网状蛋白4(RTN4)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Reticulon 4 (RTN4)
xyG011Hu 人甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Methylthioadenosine Phosphorylase (MTAP)
xyG191Hu 人N-乙酰转移酶1(NAT1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for N-AHZtyltransferase 1 (NAT1)
xyG239Hu 人外生骨疣蛋白1(EXT1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Exostoses 1 (EXT1)
xyG300Hu 人小脑肽1(CBLN1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for HZrebellin 1 (CBLN1)
xyG342Hu 人色胺酸羟化酶1(TPH1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Tryptophan Hydroxylase 1 (TPH1)
xyG343Hu 人色胺酸羟化酶2(TPH2)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Tryptophan Hydroxylase 2 (TPH2)
xyG356Hu 人3-羟基丁酸脱氢酶1(BDH1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for 3-Hydroxybutyrate Dehydrogenase 1 (BDH1)
xyG439Hu 人小白蛋白(PVALB)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Parvalbumin (PVALB)
xyG465Hu 人腺苷高半胱氨酸水解酶(AHCY)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Adenosylhomocysteinase (AHCY)
xyG476Hu 人组氨酸脱羧酶(HDC)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Histidine Decarboxylase (HDC)
xyG529Hu 人溶血卵磷脂酰基转移酶1(LPCAT1)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 1 (LPCAT1)
xyG530Hu 人溶血卵磷脂酰基转移酶2(LPCAT2)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 2 (LPCAT2)
xyG531Hu 人溶血卵磷脂酰基转移酶3(LPCAT3)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Lysophosphatidylcholine Acyltransferase 3 (LPCAT3)
xyG610Hu 人芳基硫酸酯酶B(ARSB)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Arylsulfatase B (ARSB)
xyG820Hu 人甘胺酸-N-甲基转移酶(GNMT)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for Glycine-N-Methyltransferase (GNMT)
xyG919Hu 人尿苷二磷酸糖基转移酶8(UGT8)ELISA试剂盒原理 ELISA Kit for UDP Glycosyltransferase 8 (UGT8)