ITC肉汤

ITC肉汤是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，ITC肉汤因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。

首先，我们要从众多培养基成分及影响的环境因素中筛选出具有主效应的因子。这时，通常采用筛选试验。主要有全因子因析设计和Plackett－Burman设计。两种筛选试验，各有千秋，但都能以最少的试验次数筛选出主效应因子。其中全因子设计能够表现出因子的三级以上交互作用，而Plackett－Burman设计由于是两水平设计，所以交互作用只在二级交互作用。另外还有部分因子因析设计。

筛选到了主效应因子，我们就可以开始进行下一步优化试验。此时，主要有中心复合设计和Box-Behnken设计。

中心组合设计是一种国际上较为常用的响应面法，ITC肉汤是一种5水平的实验设计法。采用该法能够在有限的实验次数下，对影响生物过程的因子及其交互作用进行评价，而且还能对各因子进行优化，以获得影响过程的最佳条件。

Box- Behnken设计是另一种国际上较为常用的响应面法，是一种3水平的实验设计法。同样具有响应面法的优点。近年来利用该法进行生物过程优化的文献比用中心组合设计法的明显地少。

斜面培养基　　

葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5，分装试管。0.IMPa灭菌20min。95％酒精(食用级)40mL。摆斜面，

液体增殖培养基　　

葡萄糖10g 酵母粉10g pH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL 0.1MPa灭菌20min。

醋酸菌种的制备　　

扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。

安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入0.5mL无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次

菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，ITC肉汤对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。

xy7001 胰蛋白胨 250g AR

xy7002 胰酪胨 250g AR

xy7003 酵母抽提粉 250g AR

xy7004 细菌学琼脂 250g AR

xy7005 琼脂糖 250g AR

xy7006 蛋白胨 250g AR

xy7007 大豆蛋白胨 250g AR

xy7008 酸水解酪蛋白 250g AR

xy7009 多价蛋白胨 250g AR

xy7010 马玲薯浸粉 250g AR

xy7011 牛肉浸粉 250g AR

xy7012 麦芽浸粉 250g AR

xy7013 肝浸粉 100g AR

xy7014 牛心浸粉 100g AR

xy7015 牛胆盐 100g AR

xy7016 猪胆盐 100g AR

xy7017 三号胆盐 100g AR

xy7018 五号胆盐 100g AR

xy7019 去氧胆酸钠 100g AR

xy7020 大豆卵磷脂（粉末） 100g AR

xy7021 可溶性淀粉 500g AR

xy7022 蔗糖 500g AR

xy7023 蕃茄粉 100g AR

xy7024 甘油磷酸钠 250g AR

xy7025 牛血白蛋白 100g AR