改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）

改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。

首先，我们要从众多培养基成分及影响的环境因素中筛选出具有主效应的因子。这时，通常采用筛选试验。主要有全因子因析设计和Plackett－Burman设计。两种筛选试验，各有千秋，但都能以最少的试验次数筛选出主效应因子。其中全因子设计能够表现出因子的三级以上交互作用，而Plackett－Burman设计由于是两水平设计，所以交互作用只在二级交互作用。另外还有部分因子因析设计。

筛选到了主效应因子，我们就可以开始进行下一步优化试验。此时，主要有中心复合设计和Box-Behnken设计。

中心组合设计是一种国际上较为常用的响应面法，改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）是一种5水平的实验设计法。采用该法能够在有限的实验次数下，对影响生物过程的因子及其交互作用进行评价，而且还能对各因子进行优化，以获得影响过程的最佳条件。

Box- Behnken设计是另一种国际上较为常用的响应面法，是一种3水平的实验设计法。同样具有响应面法的优点。近年来利用该法进行生物过程优化的文献比用中心组合设计法的明显地少。

斜面培养基　　

葡萄糖8g，酵母粉10g碳酸钙5g琼脂15~20g水1000mLpH5.5，分装试管。0.IMPa灭菌20min。95％酒精(食用级)40mL。摆斜面，

液体增殖培养基　　

葡萄糖10g 酵母粉10g pH5.5水1000mL灭菌后加入酒精(食用级)40mL 0.1MPa灭菌20min。

醋酸菌种的制备　　

扩大培养过程：安瓿管，液体试管1．液体试管2，100mL三角瓶，500mL三角瓶，1000mL三角瓶，种子罐。

安瓿管开启：酒精棉球擦抹三次，用重器撞击，打开，注入0.5mL无菌水，将菌球溶解，全部注入装有10mL液体培养基的18×180试管1内，30℃培养72h，每2h摇动—次

菌体生长：培养基变混浊后，颜色变浅，改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）对光观察摇动时有云雾状金属光泽。每只装有10mL液体培养基的试管2接入lmL或0.5mL菌液，30℃培养48h，每2h摇动—次。

xy6004 50%卵黄乳液 10ml×4 作为添加剂添加于培养基中

xy6005 V-P试剂盒 10ml×4 用于V-P试验

xy6006 硝酸盐还原试剂盒 10ml×4 用于硝酸盐还原试验

xy6007 1%亚碲酸钾溶液 10ml×4 与亚碲酸钠培养基基础配套使用

xy6008 萋-尼氏染色液 10ml×4 用于细菌抗酸染色

xy6009 金胺O染色液 10ml×4 用于细菌抗酸染色

xy6010 瑞氏染色液 10ml×4 用于细菌瑞氏染色

xy6011 10g/L萘酚乙醇溶液 10ml×4 10g/L萘酚乙醇溶液

xy6012 STAA添加剂 10ml×4 每支添加于200mlSTAA琼脂培养基中

xy6013 姬姆萨染色液 10ml×4 用于血红细胞等染色

xy6014 荚膜染色液 10ml×4 用于荚膜染色

xy6015 刘荣标氏鞭毛染色液 10ml×4 用于鞭毛染色

xy6016 芽孢染色液 10ml×4 用于芽孢染色

xy6017 乳酸酚棉蓝染色液 10ml×4 用于真菌染色

xy6018 万古霉素溶液 1mg*5支 每支加入100mlHB0102-2中（GB2008标准）

xy6019 50%卵黄乳液 5ml*10 每20ml添加于250mlTSC琼脂基础中

xy6020 磺胺嘧啶钠溶液 1ml*5 每支添加于100ml HB0256中

xy6021 硫酸庆大霉素 1ml*5支 添加到哥伦比亚琼脂培养基中

xy6022 多粘菌素B 1.2mg/支*5 每支添加于100ml HB0256中

xy6023 D-环丝氨酸 0.2g 每0.1g加入250ml TSC琼脂基础中

xy6024 布氏肉汤添加剂 2ml*5 每支加入225ml布氏肉汤中

xy6025 氧化酶试剂 1g 用于空肠弯曲菌氧化酶试验

xy6026 改良Skirrow琼脂添加剂 1ml*5支 每支添加于100ml HB0242中

xy6027 FBP溶液 1ml*5支 每支添加于100ml HB0242中

xy6028 CCDA添加剂 2ml*5支 每支添加于200mlCCDA基础中

xy6029 1%马尿酸钠溶液 0.4ml/支*20支 用于空肠弯曲菌马尿酸钠水解试验

xy6030 Bolton肉汤添加剂 1ml*5支 用于添加到HB0273-1中

xy6031 茚三酮溶液 5ml*2 用于空肠弯曲菌的检测。