DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 DNA 分子在高于等电点的 pH 溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖 - 磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链 DNA 几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极移动。
制备琼脂糖凝胶10% SDS
1 .称 1. 2g 琼脂糖,加 100ml 电泳缓冲液( 1×TAE )加热熔化,取出摇匀,即为 1. 2% 的凝胶。
2. 当胶液冷至 60℃ 时,加 EB10μl ,小心混匀,缓慢倒入制胶模具中,在胶一端插上梳子。
3 .待胶凝固后,拨出梳子,将模具置于电泳槽中,加入 1×TAE ,让液面高于胶面 2 -3mm 。
4 .取 4ul 质粒,加 2ul lodaing buffer , 6ulddH 2 O ,混匀,用加样器吸取样品。加入点样孔中,注意加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中,不可刺穿凝胶,也要防止将样品溢出孔外。
5 .接通电源, 1-5V/cm 电压,开始电泳。10% SDS
6 .当溴酚兰染料移动到距离胶前沿 1 -50px 处,停止电泳。
7. 切断电源后,取出凝胶,在紫外灯( 360nm 、 312nm 或 254nm )下或经凝胶成像系统观察或拍照。
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性染色体 DNA 在拓扑学上的差异来分离它们。在 pH 值介于 12. 0-12. 5 这个狭窄的范围内,线性的 DNA 双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒 DNA 的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入 Ph4. 8 的乙酸钾高盐缓冲液恢复 pH 至中性时,共价闭合环状的质粒 DNA 的两条互补链仍保持在一起,因此复性迅速而准确,而线性的染色体 DNA 的两条互补链彼此已完全分开,复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕成网状结构,通过离心,染色体 DNA 与不稳定的大分子 RNA 、蛋白质 -SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。
10% SDS相关产品系列表:
xyG609Hu 人类固醇硫酸酯酶同工酶S(STS)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Steroid Sulfatase Isozyme S (STS)
xyC113Hu 人生长分化因子11(GDF11)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 11 (GDF11)
xyF025Hu 人真核翻译延伸因子1γ(EEF1γ)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Eukaryotic Translation Elongation Factor 1
Gamma (EEF1g)
xyC109Hu 人生长分化因子3(GDF3)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 3 (GDF3)
xyC071Hu 人干扰素诱导T-细胞α亚族趋化剂(ITαC)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha
Chemoattractant (ITaC)
xyQ870Hu 人含BED型锌指蛋白3(ZBED3)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Zinc Finger, BED Type Containing Protein 3 (ZBED3)
xyD387Hu 人白细胞弹性蛋白酶抑制因子(LEI)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Leukocyte Elastase Inhibitor (LEI)
xyL060Hu 人帕金森氏病蛋白2(PARK2)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Parkinson Disease Protein 2 (PARK2)
xyC358Hu 人钙蛋白酶2(CAPN2)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Calpain 2, Large Subunit (CAPN2)
xyC457Hu 人内切核酸酶G(ENDOG)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Endonuclease G, Mitochondrial (ENDOG)
CED065Hu10% SDS 人Apelin 17蛋白(AP17)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Apelin 17 (AP17)
xyF258Hu 人小亚基钙蛋白酶1(CAPNS1)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Calpain, Small Subunit 1 (CAPNS1)
xyH136Hu 人丝氨酸棕榈酰转移酶长链碱性亚基3(SPTLC3)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Serine Palmitoyltransferase, Long Chain
Base Subunit 3 (SPTLC3)
xyH645Hu 人眼小畸形关联转录因子(MITF)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Microphthalmia Associated Transcription Factor (MITF)
xyL074Hu 人泛素蛋白连接酶E3成分N-识别蛋白4(UBR4)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Ubiquitin Protein Ligase E3 Component
N-Recognin 4 (UBR4)
xyP783Hu 人非ATP酶蛋白酶体26S亚基10(PSMD10)ELISA试剂盒96t/48t ELISA Kit for Proteasome 26S Subunit, Non ATPase 10